过敏原检测课件及教案过敏原检测结果
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变态反应特异性抗体IgE检测报告患者姓名:标本编号:检测日期:检测者:检测结果序号变应原(英文)变应原(中文)缩写检测结果(抗体浓度分级)1Tree mix china树组合(柳树/杨树/榆树)ts202Ragweed矮豚草w13Mugwort蒿W64Mould mix尘螨组合(屋尘螨/粉尘螨)ds15House dust屋尘h16Cat猫毛e17Dog狗上皮e28Cockroach蟑螂i69Mould mix霉菌组合(点青霉/分支孢霉/烟曲霉/交链孢霉)ms110Humulus (hop)律草u8011Egg white鸡蛋白f112Cow milk牛奶f213Erdnuss花生f1314Soya bean黄豆f1415Beef牛肉f2716Mutton羊肉f8817Sea fish海鱼(鳕鱼/龙虾/扇贝)fs3318Fresh water fish淡水鱼(鲑鱼/鲈鱼/鲤鱼)fs3419Shrimp虾f2320crab蟹f179正常值范围:特异性变应原抗体IgE阴性,0级注:国际变态反应协会将特异性变应原抗体IgE浓度分为06级,一般认为检出的相关抗体浓度越高,与临床的相关性越强。特异性变应原抗体IgE浓度分级与临床相关性特异性变应原抗体IgE浓度分级临床相关性0未检出相关的特异性变应原抗体1检出极低浓度的特异性变应原抗体,接触相关变应原,通常较少会导致临床症状2检出较低浓度的特异性变应原抗体,接触相关变应原,可导致临床症状增强3明确检出相关的特异性变应原抗体,常伴有临床症状4检出较高浓度相关的特异性变应原抗体,大多数伴有临床症状5检出极高浓度相关的特异性变应原抗体6检出极高浓度相关的特异性变应原抗体大连医科大学附属第一医院检验科联系电话:0411836359633255授课题目过敏原检测教材欧蒙印迹法授课方式实验课学时4学时授课时间2016.3-2016.4教学手段多媒体+操作教学目的掌握:过敏原检测的原理、方法和结果判定。熟悉:免疫印迹试验的临床应用教学重点过敏原检测的原理、方法教学难点试验原理教 学 过 程及时间分配教 学 内 容教学方法15分40分讲 授+学生操作45分钟学生操作30分钟 讲 授 + 实验操作 10分钟40分钟免疫标记技术食物过敏免疫印迹试验:过敏原检测试验原理检测膜条上平行包被了(20种)吸入性和食入性过敏原。经缓冲液预处理的检测膜条与患者样本进行第一步温育。如果样本阳性,IgE类特异性抗体与相应的过敏原结合。为检测结合的抗体,加入酶标单克隆抗人IgE抗体(酶结合物)进行第二步温育,然后加入酶底物,发生颜色反应。材料:包被过敏原的检测膜条、待检血清、酶结合物、通用缓冲液、底物液、结果判断膜条、温育盘、塑封膜条、温箱方法:1.预处理 膜条置温育槽,加入1.0ml缓冲液,室温5分钟 2.血清温育 第一次 在温育槽中加入1.0ml样本,在摇床上温育60分钟(未稀释)或过夜(1:11稀释,最少12小时) 3.清洗 手动,吸去每个温育槽内液体,在摇床上洗涤3次,每次5分钟(1.0ml 通用缓冲液) 4.酶结合物温育 第二次 加入酶结合物1.0ml,摇床60分钟 5.清洗 同步骤36.底物温育 第三次 加入底物1.0ml,摇床10分钟 7.终止反应 吸去槽内液体,用蒸馏水洗涤3次,每次1分钟 8.结果判定 将膜条置模板中,风干后判断结果。 结果判断: 在判断结果时必须考虑到条带的位置和颜色强度。通过比较结果判断模板和已温育的检测膜条可确定抗相应过敏原IgE抗体。条带的颜色可分为4类。 类别结果条带特性0阴性,无临床意义未出现条带+低浓度抗过敏原IgE抗体部分临床意义弱条带+中等浓度抗过敏原IgE抗体通常具有临床意义清晰的条带+高浓度抗过敏原IgE抗体许多病例出现临床症状染色很深的条带采用软件判断结果 参考范围如下:类别(浓度:略)结果0未检出特异性抗体1弱特异性抗体 无症状2弱特异性抗体 有症状3特异性抗体浓度明显,通常出现症状4高浓度特异性抗体,总是出现症状5特异性抗体浓度很高6特异性抗体浓度很高方法评价、临床应用实验小结完成实验报告导入新课讲授法结合PPT结合临床画简图举例降低难度结合临床指导操作讲 授启发式指导结合临床讲授法结合临床本课题方面的新进展免疫印迹技术例 题型超敏反应的发生机制作 业 题1.型超敏反应的发生特点?2.过敏原检测结果如何判定?专业外语词 汇hypersensitivity; allergic ,rhinitis,hay fever,asthmafood allergy主要参考资 料免疫学教材及免疫学实验技术 人民卫生出版社课堂演示实 验过敏原检测课 堂 总 结过敏原检测的方法课 后 记(课后总结)备 注 齐齐哈尔医学院免疫 第二十二章 过敏原检测 齐齐哈尔医学院免疫一、超敏反应相关理论知识 齐齐哈尔医学院免疫基本概念 超敏反应:机体接受某些抗原刺激时,出现生理功能紊乱或组织细胞损伤等异常性免疫应答。齐齐哈尔医学院免疫型速发型型细胞溶解型型免疫复合物型型迟发型超敏反应的分型 齐齐哈尔医学院免疫型超敏反应型超敏反应 齐齐哈尔医学院免疫(一)I 型超敏反应特点:1.反应发生快,消退也快。2.通常使机体出现功能紊乱,很少发生组织细胞损伤。3.由特异性IgE介导,没有补体参与。4.具有明显个体差异和遗传倾向(多基因遗传病)。齐齐哈尔医学院免疫(二)型超敏反应的发生机制(一)致敏阶段:变应原进入机体产生IgE和肥大细胞/嗜碱粒细胞表面FRI结合机体处于致敏状态(二)激发阶段:变应原再次进入机体与致敏细胞表面IgE Fab特异性结合(受体交联)脱颗粒释放生物活性介质(三)效应阶段:生物活性介质作用于效应组织和器官局部或全身发生过敏反应 齐齐哈尔医学院免疫IgEFceRI变应原脱颗粒 炎症反应致敏亲细胞抗体 齐齐哈尔医学院免疫 齐齐哈尔医学院免疫致敏阶段致敏阶段激发阶段激发阶段肥大细胞变应原初次进入变应原初次进入变应原再次进入变应原再次进入B细胞(二)I 型超敏反应发生的机制 齐齐哈尔医学院免疫 齐齐哈尔医学院免疫(三)IgE介导的过敏性疾病过敏性鼻炎(allergic rhinitis,hay fever)过敏性哮喘(asthma)食物过敏(food allergy)特应性皮炎(atopic dermatitis)特应性湿疹(eczema)特应症(atopy)特应症:血清IgE的水平高1001000倍以上,多有家族史。双亲均为患者:后代50%以上,单亲为患者的后代30%左右,而且他们对环境中常见的多种变应原过敏。齐齐哈尔医学院免疫过敏性休克 药物过敏性休克 血清过敏性休克呼吸道过敏反应 过敏性鼻炎 过敏性哮喘消化道过敏反应 食物过敏皮肤过敏反应 特应性皮炎 荨麻疹 血管性水肿(三)I 型超敏反应常见疾病 齐齐哈尔医学院免疫 齐齐哈尔医学院免疫药物食入性变应原食入性变应原 齐齐哈尔医学院免疫(四)变应原:能选择性诱导机体产生特异性IgE抗体引起过敏反应的抗原性物质。分类:药物:青霉素/磺胺/普鲁卡因/有机碘化物吸入和叮咬注入性:花粉/真菌/尘螨/霉菌/昆虫毒液/动物皮毛和分泌物/装饰材料.食物:蛋白类;坚果类;蔬菜;水果类;食品添加剂和防腐剂.某些酶类物质:半胱氨酸蛋白酶/枯草杆菌蛋白酶 齐齐哈尔医学院免疫(五)变态反应-症状n皮肤:荨麻疹,湿疹,神经性皮炎n呼吸系统:支气管哮喘,过敏性鼻炎n消化系统:恶心,呕吐,腹痛,腹泻n系统性反应:发热,头痛,疲劳,抑郁,昏晕,脉搏加速,极度焦虑,定向障碍n严重可导致过敏性休克(血液循环障碍)齐齐哈尔医学院免疫(六)变态反应影响因素n接触变应原(早期接触变应原)n婴儿:非母乳喂养,被动吸烟,感染n空气污染(氧化氮和臭氧,而非烟尘和二氧化硫)n健康状况:慢性病,急性病n生活状况:温暖潮湿的空气利于屋尘螨和霉菌孢子的生长n遗传倾向:直系亲属中有患变态反应的人更易患此病(特应性变态反应)n食物:以前未 食入的食物和食物添加剂n过多的药品消费n社会文化方面:例如:工作和生活压力 齐齐哈尔医学院免疫(七)变态反应-发病率n10-20%的德国人曾患一种变态反应,其中最常见的变应原为:草,桦树,艾属植物,屋尘螨,猫发n美国每年有3500万人(人群17%)发病,常见的变应原为花粉、螨虫、猫毛、霉菌n据世界卫生组织估计,全球约有1亿5千万人患有哮喘,其中50%以上的成人及至少80%的儿童患者均由过敏因素诱发,每年有180,000多人死于哮喘。齐齐哈尔医学院免疫(八)交叉变态反应(花粉相关的食物性变态反应)n草(广),杂草(较少),树(最少)种属之内;不同种属之间交叉反应n桦树花粉与其他树花粉(榛子,桤树),水果(苹果,胡萝卜土豆),坚果n艾属与 其他草类,芹菜,胡萝卜,马铃薯,香料等n乳胶类与 香蕉,鳄梨,猕猴桃,马铃薯,栗子n豚草与香蕉及瓜类n交叉变态反应的原因是花粉和植物性食物有相似的蛋白质成分 齐齐哈尔医学院免疫(九)由生物胺引起的伪变态反应 n低分子量的复合物(如:组胺)能直接引起变态反应症状 n含有组织胺的食物:n红酒n金枪鱼n乳酪nSauerkraut(一种德国泡菜)n草莓n鳄梨,香蕉,菠萝nASS(阿斯匹林)齐齐哈尔医学院免疫(十)变态反应的诊断n非特异性诊断病史,症状,体征,实验室非特异性诊断(嗜酸计数,总IgE)n特异性诊断1.体内实验:皮试点刺试验,划痕试验,斑贴试验等2.体外:SIgE等 齐齐哈尔医学院免疫(十一)体外检测的临床适应症l皮肤划痕症或者患有严重皮炎,不能做皮试者l用抗组胺类或激素类治疗而不能停药者 l高度过敏患者,做皮试有危险的人l对食物过敏的患者,效应器官不在皮肤l用于研究一般由IgE参与的疾病和寄生虫病 齐齐哈尔医学院免疫二、过敏原检测l免疫印迹法l欧蒙试剂公司 齐齐哈尔医学院免疫(一)过敏原检测实验原理 齐齐哈尔医学院免疫筛 检测膜条上平行包被了20种吸入性和食入性过敏原。经缓冲液预处理的检测膜条与患者样本进行第一步温育。如果样本阳性,IgE类特异性抗体与相应的过敏原结合。为检测结合的抗体,加入酶标单克隆的抗人IgE抗体(酶结合物)进行第二步温育,然后加入酶底物,发生颜色反应。免疫印迹试验原理 齐齐哈尔医学院免疫筛 检测时直接将膜条放于特制的长条凹槽反应盘中与标本(一抗)和酶标二抗温育和洗涤,经过底物染色后,根据显色区域可判定抗体的有无及类型。免疫印迹试验原理 齐齐哈尔医学院免疫(二)过敏原检测操作流程 齐齐哈尔医学院免疫1预处理 膜条置温育槽,加入1.0ml缓冲液,室温5分钟2血清温育 第一次 在温育槽中加入1.0ml样本,在摇床上温育60分钟(未稀释)或过夜(1:11稀释,最少12小时)3清洗 手动,吸去每个温育槽内液体,在摇床上洗涤3次,每次5分钟(1.0ml 通用缓冲液)4酶结合物温育 第二次 加入酶结合物1.0ml,摇床60分钟5清洗 同36底物温育 第三次 加入底物1.0ml,摇床10分钟7终止反应吸去槽内液体,用蒸馏水洗涤3次,每次1分钟8结果判定将膜条置模板中,风干后判断结果。操作流程 齐齐哈尔医学院免疫(三)过敏原检测结果判定 齐齐哈尔医学院免疫 类别结果条带特性0阴性,无临床意义未出现条带+低浓度抗过敏原IgE抗体部分临床意义弱条带+中等浓度抗过敏原IgE抗体通常具有临床意义清晰的条带+高浓度抗过敏原IgE抗体许多病例出现临床症状染色很深的条带 齐齐哈尔医学院免疫类别(采用软件判定结果 浓度:略)结果0未检出特异性抗体1弱特异性抗体 无症状2弱特异性抗体 有症状3特异性抗体浓度明显,通常出现症状4高浓度特异性抗体,总是出现症状5特异性抗体浓度很高6特异性抗体浓度很高 齐齐哈尔医学院免疫试验参数试验参数 n 膜上包被有膜上包被有20种不同的变应原种不同的变应原n 使用未稀释的血清温育使用未稀释的血清温育1小时或小时或 使用使用1:11稀释的血清过夜温育稀释的血清过夜温育 n 试剂可直接使用试剂可直接使用 n 从从2002年年起起可可用用欧欧蒙蒙公公司司开开发发的的LINESCAN软件自动判断结果软件自动判断结果欧蒙印迹法欧蒙印迹法检测吸入性变应原 齐齐哈尔医学院免疫欧蒙印迹法检测食物性变态反应 食物性变应反应 齐齐哈尔医学院免疫(四)变态反应的治疗n避免接触变应原n药物治疗n抗组胺药物(抑制组胺结合H1受体)n肥大细胞稳定剂(Chromoglicinacid,皮质甾类)n可的松复合物(防止炎症造成的损伤)n接种抗IgE抗体(抗IgE抗体在IgE结合肥大细胞之前将其中和)n免疫疗法(脱敏治疗)患者接种变应原2-3年,其间接种量逐渐增大。风险:能引起系统性反应 齐齐哈尔医学院免疫(五)血清总IgE检测1.检测方法(1)免疫比浊(2)化学发光免疫试验(3)酶联免疫吸附试验 齐齐哈尔医学院免疫2.临床意义-单纯tIgE升高不能作为疾病诊断依据,也不能说明患者属于过敏体质个体。-单纯tIgE正常不排除变态反应疾病。-对于年龄较小的儿童排除寄生虫感染等疾病,tIgE越高,患变态反应疾病可能性越大。(五)血清总IgE检测 齐齐哈尔医学院免疫3.应用评价-免疫比浊敏感性高、特异性强、稳定性好、测定自动化、时间短。-ELISA方便、实用,特异性敏感性均好,无需特殊仪器。-tIgE含量受多种因素影响,分析结果时须建立当地人群的参考区间。(五)血清总IgE检测 齐齐哈尔医学院免疫(六)特异性IgE检测检测方法(1)放射免疫吸附试验(2)免疫印迹(3)荧光酶免疫试验 齐齐哈尔医学院免疫l(七)附:其他类型超敏反应 齐齐哈尔医学院免疫附:型超敏反应的发生机制 齐齐哈尔医学院免疫输血反应新生儿溶血症自身免疫性溶血性贫血甲状腺功能亢进重症肌无力药物过敏性血细胞减少症肺出血肾炎综合征附:常见型超敏反应性疾病 齐齐哈尔医学院免疫附:型超敏反应的发生机制 齐齐哈尔医学院免疫附:型超敏反应发生机制 齐齐哈尔医学院免疫1.免疫印迹法的原理?2.血清总IgE检测方法有哪些?思考题
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