吞噬细胞功能检测-PPT-教案
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授课题目小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞教材病原生物与免疫学实验授课方式实验课学时4学时授课时间2016.4-2016.5教学手段多媒体教学教学目的掌握: 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理熟悉:细胞吞噬的基本过程教学重点小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的原理教学难点小鼠腹腔注射的方法,结果观察教学过程及时间分配教 学 内 容教学方法5分30分讲 授+学生操作20分钟 非特异性免疫中发挥重要作用的细胞巨噬细胞巨噬细胞的功能 实验原理:小鼠腹腔内注射2% 糖原水溶液,可刺激巨噬细胞的聚集。4d后小鼠腹腔内注入鸡红细胞悬液,1h后解剖收集腹腔吞噬细胞,染色、镜检可观察对鸡红细胞的吞噬现象。实验材料:1.实验动物:小鼠 20g左右2.试剂:5%鸡红细胞悬液、2%糖原溶液、 PH6.4PBS液、生理盐水3.其他:注射器、剪刀、镊子、吉姆萨瑞特染液、吸管、玻片、显微镜实验方法:1. 试验前一天,给小鼠腹腔注射2%糖原溶液1.0ml,使巨噬细胞从腹膜血管渗到腹腔2.制备2%鸡红细胞悬液3.小鼠腹腔注射2%鸡红细胞悬液1ml,轻柔腹部。30min-1h后脱颈处死小鼠,吸出腹腔液滴加在玻片上,每片0.2ml4.将玻片置37温箱孵育30分钟5.取出玻片,用PH6.4PBS液轻轻冲洗玻片6.晾干玻片,用吉姆萨瑞特染液染色 液 1分30秒 液5分钟7.油镜观察鸡红细胞被吞噬及消化情况实验结果:观察时将视野调暗。在高倍镜下,先分辨清楚鸡红细胞和巨噬细胞。鸡红细胞为淡红色、椭圆形、有核的细胞。而体积较大圆形或不规则的细胞其表面有许多似毛刺状的小突起、伪足。细胞质中有数量不等的蓝色颗粒,为吞入的含台盘蓝淀粉形成的吞噬泡,即为巨噬细胞。变换视野,仔细观察巨噬细胞吞噬吞噬鸡红细胞的过程。可见有的鸡红细胞,一至多个,紧贴附于巨噬细胞的表面,有的巨噬细胞已将1至数个红细胞部分吞入,有的巨噬细胞已吞入1个或几个红细胞在胞质中刚刚形成椭圆形的吞噬泡,有的局势细胞内的吞噬体积缩小并呈现圆形,这是与初级溶酶体发生融合,泡内物正在被消化分解。在油镜下查找巨噬细胞200个,算出吞噬百分率。注意事项1.正确进行腹腔注射,不要刺伤小鼠内脏2.充分揉搓小鼠腹腔,尽可能将吞噬细胞冲洗下来完成实验报告导入新课讲授法演示操作启发式总结本课题方面的新进展例 题作 业 题1. 巨噬细胞在非特异性免疫应答中如何发挥作用?专业外语词 汇Macrophage devour digestionChicken red blood cell主要参考资 料病原生物学与免疫学实验 科学出版社课 堂 总 结小鼠腹腔注射的方法;巨噬细胞的生物学作用课 后 记(课后总结)培养学生严谨的实验操作意识,培养科研思维,注意教学方法,引起学生学习兴趣。实施情况及分析教研室审阅意见 免疫检验实验小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞免疫教研室巨噬细胞的功能?(1)清除、杀伤病原体(2)参与和促进炎症反应(3)杀伤靶细胞(4)加工、提呈抗原(5)免疫调节实验目的n掌握:小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞 的检测方法n熟悉:小鼠腹腔注射的方法 n了解:巨噬细胞吞噬鸡红细胞的 作用原理实验原理n小鼠腹腔内注射2%糖原溶液,可刺激巨噬细胞的聚集。4d后小鼠腹腔内注入鸡红细胞悬液,1h后解剖收集腹腔吞噬细胞,染色、镜检可观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象。实验器材1.实验动物:小鼠 20g2.试剂:5%鸡红细胞悬液、2%糖原溶液、PH6.4PBS液、生理盐水3.其他:注射器、剪刀、镊子、吉姆萨 瑞特染液、吸管、玻片、显微镜实验方法1.试验前一天,给小鼠腹腔注射2%糖原溶液1.0ml,使巨噬细胞从腹膜血管渗到腹腔2.制备5%CRBC悬液3.小鼠腹腔注射5%CRBC1ml,轻柔腹部。40min-1h后脱颈处死小鼠,吸出腹腔液滴加在玻片上,每片0.2ml。小鼠腹腔注射小鼠腹腔注射4.将玻片置37温箱30分钟孵育5.取出玻片,用PH6.4PBS液轻轻冲洗玻片6.晾干玻片,用吉姆萨瑞特染液染色 液 45-60秒 液5分钟 III 液 PBS 30秒7.油镜观察鸡红细胞被吞噬及消化情况实验方法结 果n在油镜下查找巨噬细胞200个,算出吞噬百分率。结 果注意事项1.正确进行腹腔注射,不要刺伤小鼠内脏2.充分揉搓小鼠腹腔,尽可能将吞噬细胞冲洗下来
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