高中生物第1章微生物培养技术(课件习题)(打包12套)中图版.zip
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第1章 微生物培养技术 第1节 微生物的分离和纯培养学业达标测评一、选择题1在光亮处用一种培养液分别培养绿藻和酵母菌,其结果如图所示,造成这种结果的原因是培养液中()A缺少无机盐B含氧量太高C缺少有机养分D不含二氧化碳【解析】绿藻(自养)增多,酵母菌(异养)数量减少,说明培养基中缺少有机碳源。【答案】C2下表是某同学培养微生物时配制的培养基,关于此培养基的说法中,错误的是()编号成分(NH4)2SO4KH2PO4FeSO4CaCl2H2O含量0.4 g4.0 g0.5 g0.5 g100 mLA.此培养基可用来培养自养型微生物B此表中的营养成分共有三类,即水、无机盐、氮源C表中各成分的重量按照所培养的微生物的营养需要来确定D若除去,此培养基可用于培养大肠杆菌【解析】由表格可知,该培养基不含有机物,且无碳源,因此可培养自养型微生物,大肠杆菌为异养型,除去之后,培养基中缺少碳源和氮源,大肠杆菌无法生长。【答案】D3如何判断制作的培养基是否灭菌彻底()A看培养基是否透明B有没有消灭细菌菌体C未接种的培养基在恒温箱中保温12天后有无菌落生长D是否消灭了微生物的芽孢、孢子【解析】配制好的培养基,是否灭菌彻底,通常在使用前在恒温箱中保温12天后检验有无菌落生长,若无则说明灭菌彻底。【答案】C4无菌技术包括以下几个方面的叙述,其中错误的是()A对实验操作的空间、操作者的衣物和手进行灭菌B将用于微生物的培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌C为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行D实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触【解析】对实验操作的空间、操作者的衣物和手进行清洁是消毒而不是灭菌。【答案】A5培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是()化学消毒灼烧灭菌干热灭菌紫外线灭菌高压蒸汽灭菌巴氏消毒法ABC D【解析】培养基用高压蒸汽灭菌;培养皿能耐高温,用干热灭菌法;接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底灭菌的效果;实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒,如用酒精擦拭双手;空气可用紫外线消毒;为不破坏其营养成分,牛奶可采用巴氏消毒法。【答案】A6下列所述环境条件下的微生物,能正常生长繁殖的是()A在缺乏生长素的无氮培养基中的圆褐固氮菌B在人体表皮擦伤部位的破伤风杆菌C在新配制的植物矿质营养液中的酵母菌D在灭菌后的动物细胞培养液中的禽流感病毒【解析】圆褐固氮菌能够产生生长素,因此可以在缺乏生长素的无氮培养基中正常生长繁殖。破伤风杆菌是一种厌氧型细菌,人体表皮擦伤部位是有氧的环境,因此,破伤风杆菌不能正常生长繁殖;酵母菌是一种异养型微生物,新配制的植物矿质营养液中缺少有机碳,因此酵母菌不能正常生长繁殖;禽流感病毒不能独立生活,只能寄生在活的细胞中,因此禽流感病毒不能在灭菌后的动物培养液中正常生长繁殖。【答案】A7某生物兴趣小组到野外采集能分解纤维素的细菌,他们在一段枯木上采集到部分细菌,如何将分解纤维素的细菌分离出来()A用牛肉膏蛋白胨培养基B用不含氮的培养基C用以纤维素为唯一碳源的培养基D不含氮的培养基上用平板划线法也可以选出【解析】牛肉膏蛋白胨培养基为全营养培养基,细菌都可以生长;不含氮的培养基上,分解纤维素的细菌也不能生长。【答案】C8根据生物与环境的相互依存关系判断,下列寻找目标菌株的思路不正确的是()A从热泉中寻找耐热细菌B从成熟的葡萄皮上寻找酵母菌C从贫瘠的土壤中寻找分解尿素的细菌D从树林的腐殖土壤中寻找分解纤维素的细菌【解析】贫瘠的土壤中没有分解尿素的细菌,较肥沃的土壤中才有。【答案】C二、非选择题9某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了如下实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了_和_。除此之外,培养基还必须含有的基本成分是_和_。(2)对培养基进行灭菌,应该采用的方法是_。(3)为了使该实验所得结果可靠,还应该同时在另一平板上接种_作为对照进行实验。(4)培养20小时后,观察到平板上有形态和颜色不同的菌落,这说明湖水样品中有_种细菌。一般说来,菌落总数越多,湖水遭受细菌污染的程度越_。【解析】(1)蛋白胨可提供碳源、氮源、维生素,而淀粉可提供碳源,除此之外,微生物的生长还需无机盐和水。(2)对培养基的灭菌,在实验室内常用高压蒸汽灭菌法。(3)在实验的过程中,除实验变量以外其他各变量均应适宜且相同,以利于更好地实现实验目的。(4)不同的菌落具有各自的菌落特征(如硬度、颜色、透明度、光滑度等)。【答案】(1)氮源、生长因子(碳源不作要求)碳源无机盐水(后两空顺序可颠倒)(2)高压蒸汽灭菌法(3)无菌水(4)多高(或严重)10检验饮用水中大肠杆菌的含量是有效监控疾病发生的必要措施。下图表示相关的检验过程。(横线上填文字,内填编号)(1)图中需要无菌操作的过程有。(2)经过过程,样品被稀释了_倍,其目的是_。(3)在进行过程之前,需要随机取若干灭菌后的空平板先行培养一段时间,这样做的目的是_。接种微生物的方法有很多,图中过程的方法为_。下列示意图与过程方法对应的结果是。ab【解析】(1)在稀释和涂布操作中,为避免杂菌污染,都需进行无菌操作。(2)过程样品被稀释了10倍,过程进行了4次共稀释了104倍,因此样品被稀释了105倍。经稀释后的样液涂布到平板上才能形成单个菌落。(3)随机取若干灭菌后的空平板先行培养一段时间,如果无菌落出现,说明平板灭菌彻底,否则不彻底。图中过程方法为稀释涂布法,a、b两个培养结果示意图分别是用平板划线法和稀释涂布法接种所得。【答案】(1)(2)105培养后形成单个菌落(3)检测培养基平板灭菌是否合格稀释涂布法b4第1章 微生物培养技术章末复习提升课微生物技术1.培养基的制备计算称量溶化灭菌倒平板。2无菌技术主要指消毒和灭菌。实验室中常用紫外线或化学药物消毒,如用酒精棉球擦拭双手。灭菌的方法主要有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。另外,实验操作应在无菌环境中,例如酒精灯火焰旁。3倒平板操作待培养基冷却至50 左右时,在酒精灯火焰附近倒平板,严格遵循课本上的操作步骤。4平板划线操作平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线或交叉划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。5稀释平板涂布法先将菌悬液进行系列稀释然后涂布平板,在稀释度足够高的菌悬液里,聚集在一起的微生物被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个的菌落。6应用选择培养基分离某种特定的微生物选择培养基是指允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。本专题中有选择分解尿素的细菌和纤维素分解菌的两种培养基。测定某种微生物的数量每克样品中的菌落数(CV)M。总之,在实验室培养微生物中一方面需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件,另一方面需要确保无处不在的其他微生物无法混入。章末综合测评(一)(时间:45分钟满分:100分)一、选择题(每小题6分,共60分)1不同培养基的具体配方不同,但一般都含有()A碳源、磷酸盐和维生素B氮源和维生素C水、碳源、氮源和无机盐D碳元素、氧元素、氢元素、氮元素【解析】培养基中一般都含有水、无机盐、碳源、氮源,有的培养基中还含有生长因子。【答案】C2下列对四种微生物的相关叙述,错误的是()ACO2和NH3分别是硝化细菌的碳源和氮源,该生物所需的能源来自NH3的氧化BCO2和硝酸盐分别是褐藻的碳源和氮源,该生物所需的能源来自太阳能C糖类和N2是乳酸菌的碳源和氮源,该生物所需的能源来自乳酸的氧化分解D葡萄糖既是酵母菌的碳源也是其能源,但CO2一定不是酵母菌的碳源【解析】乳酸菌的代谢类型是异养厌氧型,生命活动所需能源主要来自糖类氧化分解形成乳酸时释放的能量,其生命活动过程中不能直接利用N2作为氮源。【答案】C3产生标准菌落的最初数目和培养基分别是()A同种少数细菌,液体培养基B许多细菌,液体培养基C同种少数细菌,固体培养基D许多细菌, 固体培养基【解析】在液体培养基中生活的细菌,无论是一个还是许多,都是肉眼不可见的。在固体培养基上的细菌,当数目较少时也是不可见的。而菌落是一个细菌或几个细菌的子细胞群体,形成于固体培养基上,有一定的形态结构,所以肉眼可见。同种细菌形成的菌落,形态结构是相同的。如果有许多细菌形成的菌落, 就不可能有比较标准的形态。【答案】C4.(2013江苏高考)某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是()A培养基分装到培养皿后进行灭菌B转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D培养过程中每隔一周观察一次【解析】微生物分离中培养基的制备应是先灭菌再倒平板,A项错误;每一次划线前都要灼烧接种环,以杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种,B项正确;接种后的培养皿应在恒温培养箱中进行培养,光照会影响温度等条件,C项错误;培养过程中观察的间隔时间不能太长,适宜条件下一般不超过24 h,D项错误。【答案】B5固氮菌可以从豆科植物的根瘤中分离出来,有关说法错误的是()A选用大且红润的豆科植物根瘤B分离培养固氮菌的关键是杀死表面杂菌C因材料过大,不能采用平板培养基分离技术D可以利用选择培养基进行纯化【解析】题目中的固氮菌应是根瘤菌。可以在缺氮的培养基上选择培养,也可以利用琼脂平板划线法进行分离。当然,杀死根瘤表面杂菌,将内部根瘤菌制成菌落是实验的关键。【答案】C6把乳酸菌、酵母菌、硝化细菌三种不同类型的微生物分别培养在三个半固体培养基中,几天后观察结果如图所示(图中阴影表示微生物的生长状况),下列叙述正确的是()A甲管中培养的微生物的异化作用类型是自养型B从结构上看,丙管中培养的微生物具有成形的细胞核C乙管中培养的微生物可以进行出芽生殖D这三种微生物所需的碳源均为有机碳源【解析】乳酸菌是原核生物,属异养厌氧型生物,酵母菌是真核生物,属兼性厌氧型,生殖方式有出芽生殖和分裂生殖两种,硝化细菌是原核生物,属自养需氧型生物。【答案】C7细菌培养过程中,分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法,这些方法可依次用于消毒或杀灭哪些部位的杂菌()A接种针、手、培养基B高压锅、手、接种针C培养基、手、接种针 D接种针、培养基、手【解析】培养基、手和接种针都可以接触空气而被空气中的微生物污染,因此都应消毒和灭菌,但消毒和灭菌的方法不同。【答案】C8某混合样品中微生物R含量极少,要得到大量的微生物R,比较理想的方法是采用()A天然培养基B稀释平板计数法C利用适合R生长但同时抑制或阻止其他种类微生物生长的选择培养基D用显微镜直接观察、寻找,再培养【解析】本题考查微生物的选择培养。在培养过程中可以通过选择该微生物能生长繁殖而抑制其他微生物生长繁殖的培养基,使微生物R能在该培养基上成为优势菌种而大量繁殖。【答案】C9将酵母菌的培养液由富氧状态变为缺氧状态,下面能加快这一变化过程的一项是()ACO2的释放B丙酮酸转化成酒精C葡萄糖的利用 DATP的形成【解析】由富氧状态变为缺氧状态是将氧气消耗,消耗氧气的过程为有氧呼吸葡萄糖的利用。【答案】C10甲、乙、丙是三种微生物,下表、是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在中正常生长繁殖;甲能在中正常生长繁殖,而乙和丙都不能;乙能在中正常生长繁殖,甲、丙都不能。下列说法正确的是()粉状硫K2HPO4FeSO4蔗糖10 g(NH4)2SO404 gH2O100 mLMgSO4925 gCaCl205 gA.甲、乙、丙都是异养微生物B甲、乙都是自养微生物,丙是异养微生物C甲是固氮微生物,乙是自养微生物,丙是异养微生物D甲是异养微生物,乙是固氮微生物,丙是自养微生物【解析】分析表中的三种培养基,甲能在无氮源的中正常生长繁殖,说明甲具有固氮能力,属于固氮微生物;乙能在无碳源的中正常生长繁殖,说明乙能利用空气中的CO2,属于自养微生物;丙只能在含碳源和氮源的中正常生长繁殖,说明丙为异养微生物。【答案】C二、非选择题(共40分)11(20分)临床使用抗生素前,有时需要做细菌耐药实验。实验时,首先要从病人身上获取少量样本,然后按照一定的实验步骤操作,以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题: (1)为了从样本中获取致病菌单菌落,可用_法或_法将样本接种于固体培养基表面,经过选择培养、鉴别等步骤获得。(2)取该单菌落适当稀释,用_法接种于固体培养基表面,在37 培养箱中培养24 h,使其均匀生长,布满平板。(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性,将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置,培养一段时间后,含A的滤纸片周围出现透明圈,说明该致病菌对抗生素A_;含B的滤纸片周围没有出现透明圈,说明该致病菌对抗生素B_;含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小,说明 _;含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小,且透明圈中出现了一个菌落,在排除杂菌污染的情况下,此菌落很可能是抗生素D的 _。(4)根据上述实验结果,为达到抗菌目的,最好应选用抗生素 _。【解析】(1)实验室中对微生物纯化培养时,常用的接种方法有划线法和稀释涂布法。(2)若让已经获得的单个菌落在固体培养基上大量且均匀繁殖,常用涂布器把稀释的菌液均匀涂满整个平板。(3)对某种抗生素越敏感的致病菌,在该抗生素存在的范围内,越不易生存,形成的透明圈就越大。但是,如果在透明圈中还有菌落生存,则说明这个菌落的细菌耐药性很强。(4)通过(3)可知,在应用时,要想杀死某致病菌,就得选择能使该致病菌大量死亡,即产生的透明圈大的那种抗生素。【答案】(1)划线稀释涂布(或涂布)(2)涂布(3)敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A的弱耐药菌(4)A12(20分)为了调查某河流的水质状况,某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量,并进行了细菌分离等工作。回答下列问题:(1)该小组采用了稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前,随机取若干灭菌后的空白平板,先行培养了一段时间,这样做的目的是_。然后,将1 mL水样稀释100倍,在三个平板上用涂布法分别接入0.1 mL的稀释液;经适当培养后,三个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出,每升水样中的活菌数为_。(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时,接种环通过_灭菌,在第二次及以后的划线时,总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的_。(3)示意图A和B中,_表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。 (4)该小组将得到菌株接种到液体培养基中,并混匀,一部分进行静置培养,另一部分进行震荡培养。结果震荡培养的细菌比静止培养的细菌生长的速度快。分析其原因是:震荡培养能提高培养液中_的含量,同时可使菌体与培养液充分接触,提高_的利用率。【解析】(1)检测一个培养基是否合格的方法是放在恒温培养箱中培养一段时间,看是否有菌落产生。计算三个平板的平均值是38,0.1 mL的稀释液是38个菌落,则1 mL 100倍的稀释液含有活菌数为3.8103。(2)接种环等金属用具用灼烧灭菌,平板划线法将聚集的菌落逐步分散成单个。(3)图B的菌落分布均匀。(4)震荡的目的是增加培养液中的溶氧量,使菌体和培养液接触更充分,从而提高了营养物质的利用率【答案】(1)检测培养基是否被杂菌污染3.8103(2)灼烧将聚集的菌落逐步稀释以获得单个菌落(3)B(4)溶解氧营养物质6知识网络构建 专题归纳提升 微生物技术 测定某种微生物的数量 第1章 微生物培养技术章末综合测评(时间:45分钟满分:100分)一、选择题(每小题6分,共60分)1不同培养基的具体配方不同,但一般都含有()A碳源、磷酸盐和维生素B氮源和维生素C水、碳源、氮源和无机盐D碳元素、氧元素、氢元素、氮元素【解析】培养基中一般都含有水、无机盐、碳源、氮源,有的培养基中还含有生长因子。【答案】C2下列对四种微生物的相关叙述,错误的是()ACO2和NH3分别是硝化细菌的碳源和氮源,该生物所需的能源来自NH3的氧化BCO2和硝酸盐分别是褐藻的碳源和氮源,该生物所需的能源来自太阳能C糖类和N2是乳酸菌的碳源和氮源,该生物所需的能源来自乳酸的氧化分解D葡萄糖既是酵母菌的碳源也是其能源,但CO2一定不是酵母菌的碳源【解析】乳酸菌的代谢类型是异养厌氧型,生命活动所需能源主要来自糖类氧化分解形成乳酸时释放的能量,其生命活动过程中不能直接利用N2作为氮源。【答案】C3产生标准菌落的最初数目和培养基分别是()A同种少数细菌,液体培养基B许多细菌,液体培养基C同种少数细菌,固体培养基D许多细菌, 固体培养基【解析】在液体培养基中生活的细菌,无论是一个还是许多,都是肉眼不可见的。在固体培养基上的细菌,当数目较少时也是不可见的。而菌落是一个细菌或几个细菌的子细胞群体,形成于固体培养基上,有一定的形态结构,所以肉眼可见。同种细菌形成的菌落,形态结构是相同的。如果有许多细菌形成的菌落, 就不可能有比较标准的形态。【答案】C4.(2013江苏高考)某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是()A培养基分装到培养皿后进行灭菌B转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D培养过程中每隔一周观察一次【解析】微生物分离中培养基的制备应是先灭菌再倒平板,A项错误;每一次划线前都要灼烧接种环,以杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种,B项正确;接种后的培养皿应在恒温培养箱中进行培养,光照会影响温度等条件,C项错误;培养过程中观察的间隔时间不能太长,适宜条件下一般不超过24 h,D项错误。【答案】B5固氮菌可以从豆科植物的根瘤中分离出来,有关说法错误的是()A选用大且红润的豆科植物根瘤B分离培养固氮菌的关键是杀死表面杂菌C因材料过大,不能采用平板培养基分离技术D可以利用选择培养基进行纯化【解析】题目中的固氮菌应是根瘤菌。可以在缺氮的培养基上选择培养,也可以利用琼脂平板划线法进行分离。当然,杀死根瘤表面杂菌,将内部根瘤菌制成菌落是实验的关键。【答案】C6把乳酸菌、酵母菌、硝化细菌三种不同类型的微生物分别培养在三个半固体培养基中,几天后观察结果如图所示(图中阴影表示微生物的生长状况),下列叙述正确的是()A甲管中培养的微生物的异化作用类型是自养型B从结构上看,丙管中培养的微生物具有成形的细胞核C乙管中培养的微生物可以进行出芽生殖D这三种微生物所需的碳源均为有机碳源【解析】乳酸菌是原核生物,属异养厌氧型生物,酵母菌是真核生物,属兼性厌氧型,生殖方式有出芽生殖和分裂生殖两种,硝化细菌是原核生物,属自养需氧型生物。【答案】C7细菌培养过程中,分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法,这些方法可依次用于消毒或杀灭哪些部位的杂菌()A接种针、手、培养基B高压锅、手、接种针C培养基、手、接种针 D接种针、培养基、手【解析】培养基、手和接种针都可以接触空气而被空气中的微生物污染,因此都应消毒和灭菌,但消毒和灭菌的方法不同。【答案】C8某混合样品中微生物R含量极少,要得到大量的微生物R,比较理想的方法是采用()A天然培养基B稀释平板计数法C利用适合R生长但同时抑制或阻止其他种类微生物生长的选择培养基D用显微镜直接观察、寻找,再培养【解析】本题考查微生物的选择培养。在培养过程中可以通过选择该微生物能生长繁殖而抑制其他微生物生长繁殖的培养基,使微生物R能在该培养基上成为优势菌种而大量繁殖。【答案】C9将酵母菌的培养液由富氧状态变为缺氧状态,下面能加快这一变化过程的一项是()ACO2的释放B丙酮酸转化成酒精C葡萄糖的利用 DATP的形成【解析】由富氧状态变为缺氧状态是将氧气消耗,消耗氧气的过程为有氧呼吸葡萄糖的利用。【答案】C10甲、乙、丙是三种微生物,下表、是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在中正常生长繁殖;甲能在中正常生长繁殖,而乙和丙都不能;乙能在中正常生长繁殖,甲、丙都不能。下列说法正确的是()粉状硫K2HPO4FeSO4蔗糖10 g(NH4)2SO404 gH2O100 mLMgSO4925 gCaCl205 gA.甲、乙、丙都是异养微生物B甲、乙都是自养微生物,丙是异养微生物C甲是固氮微生物,乙是自养微生物,丙是异养微生物D甲是异养微生物,乙是固氮微生物,丙是自养微生物【解析】分析表中的三种培养基,甲能在无氮源的中正常生长繁殖,说明甲具有固氮能力,属于固氮微生物;乙能在无碳源的中正常生长繁殖,说明乙能利用空气中的CO2,属于自养微生物;丙只能在含碳源和氮源的中正常生长繁殖,说明丙为异养微生物。【答案】C二、非选择题(共40分)11(20分)临床使用抗生素前,有时需要做细菌耐药实验。实验时,首先要从病人身上获取少量样本,然后按照一定的实验步骤操作,以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题: (1)为了从样本中获取致病菌单菌落,可用_法或_法将样本接种于固体培养基表面,经过选择培养、鉴别等步骤获得。(2)取该单菌落适当稀释,用_法接种于固体培养基表面,在37 培养箱中培养24 h,使其均匀生长,布满平板。(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性,将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置,培养一段时间后,含A的滤纸片周围出现透明圈,说明该致病菌对抗生素A_;含B的滤纸片周围没有出现透明圈,说明该致病菌对抗生素B_;含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小,说明 _;含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小,且透明圈中出现了一个菌落,在排除杂菌污染的情况下,此菌落很可能是抗生素D的 _。(4)根据上述实验结果,为达到抗菌目的,最好应选用抗生素 _。【解析】(1)实验室中对微生物纯化培养时,常用的接种方法有划线法和稀释涂布法。(2)若让已经获得的单个菌落在固体培养基上大量且均匀繁殖,常用涂布器把稀释的菌液均匀涂满整个平板。(3)对某种抗生素越敏感的致病菌,在该抗生素存在的范围内,越不易生存,形成的透明圈就越大。但是,如果在透明圈中还有菌落生存,则说明这个菌落的细菌耐药性很强。(4)通过(3)可知,在应用时,要想杀死某致病菌,就得选择能使该致病菌大量死亡,即产生的透明圈大的那种抗生素。【答案】(1)划线稀释涂布(或涂布)(2)涂布(3)敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A的弱耐药菌(4)A12(20分)为了调查某河流的水质状况,某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量,并进行了细菌分离等工作。回答下列问题:(1)该小组采用了稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前,随机取若干灭菌后的空白平板,先行培养了一段时间,这样做的目的是_。然后,将1 mL水样稀释100倍,在三个平板上用涂布法分别接入0.1 mL的稀释液;经适当培养后,三个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出,每升水样中的活菌数为_。(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时,接种环通过_灭菌,在第二次及以后的划线时,总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的_。(3)示意图A和B中,_表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。 (4)该小组将得到菌株接种到液体培养基中,并混匀,一部分进行静置培养,另一部分进行震荡培养。结果震荡培养的细菌比静止培养的细菌生长的速度快。分析其原因是:震荡培养能提高培养液中_的含量,同时可使菌体与培养液充分接触,提高_的利用率。【解析】(1)检测一个培养基是否合格的方法是放在恒温培养箱中培养一段时间,看是否有菌落产生。计算三个平板的平均值是38,0.1 mL的稀释液是38个菌落,则1 mL 100倍的稀释液含有活菌数为3.8103。(2)接种环等金属用具用灼烧灭菌,平板划线法将聚集的菌落逐步分散成单个。(3)图B的菌落分布均匀。(4)震荡的目的是增加培养液中的溶氧量,使菌体和培养液接触更充分,从而提高了营养物质的利用率【答案】(1)检测培养基是否被杂菌污染3.8103(2)灼烧将聚集的菌落逐步稀释以获得单个菌落(3)B(4)溶解氧营养物质5第一节 微生物的分离和纯培养一、培养基1含义由于微生物代谢方式的不同,因而对营养物质的需求也是有差异的。根据微生物生长繁殖和代谢的需要,将各种营养物质混合在一起而配制的营养基质。2平板培养基将溶化后的固体培养基基质倒入无菌培养皿中,冷却凝固后制成的培养基。二、无菌技术1目的和要求在微生物的分离和纯培养中,一定不能有外来的污染性杂菌,所以必须采用无菌技术进行操作。因此,在实验过程中,要对所用的器材、培养基进行严格的灭菌,对工作场所要进行消毒。2灭菌和消毒(1)灭菌:用强烈的理化因素杀死环境或物体内外所有的微生物,常用的方法是高温灭菌法。(2)消毒:用相对温和的理化方法杀死环境或物体上的病原微生物和有害微生物的营养细胞,常用的方法是射线消毒法和化学药剂消毒法。三、接种技术1含义把相应的研究对象移入培养基中的过程。2分类在平板培养基上接种的方法有平板划线法、稀释平板涂布法、稀释混合平板法等。预习完成后,请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中问题1问题2问题3问题4一、微生物的概念及特点1概念微生物是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。2特点微生物微生物二、微生物的营养及功能微生物的化学组成成分与其他生物大体相同,也是由C、H、O、N、P、S等元素组成,其中C、H、O、N占细胞干重的90%以上,这些元素最终来自外界环境中的各种无机化合物和有机化合物。这些化合物可归纳成碳源、氮源、生长因子、无机盐和水这五大类营养要素。营养物质定义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质构成生物体的细胞物质和一些代谢产物,有些是异养生物的能源物质无机化合物:CO2、NaHCO3等;有机化合物:糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物:N2、NH3、铵盐、硝酸盐;有机化合物:尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子生长必不可少的微量有机物酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等水在生物体内含量很高,在低等生物体内含量更高不仅是优良的溶剂而且可维持生物大分子结构的稳定外界摄入无机盐为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素,包括大量元素细胞内的组成成分,生理调节物质,某些化能自养菌的能源,酶的激活剂无机化合物微生物最常利用的碳源是糖类,尤其是葡萄糖;最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。在微生物所需要的化合物中需要量最大的是碳源,新陈代谢同化作用类型的划分也是根据是否能合成含碳有机物为依据,能合成含碳有机物的是自养型,反之则为异养型。对异养微生物来说,含C、H、O、N的有机化合物既是碳源又是氮源、能源。微生物之所以需要补充生长因子,往往是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等可为微生物提供生长因子。三、大肠杆菌的分离方法和实验过程1实验原理微生物的分离与纯化就是将待检测微生物样品通过划线或涂布接种在固体培养基上,样品中的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个菌落。将单个菌落接种到斜面培养基上,经培养后,即可得到一个微生物的纯种。2材料用具培养1624 h的大肠杆菌(E.coli)培养液,灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基斜面和平板,盛有9 mL无菌水的试管,无菌玻璃涂棒,无菌吸管,接种环等。3方法步骤微生物的分离包括样品稀释、划线或涂布及培养三个步骤。微生物分离操作流程图(1)稀释用1 mL无菌吸管吸取 1 mL大肠杆菌培养液,加入到盛有9 mL无菌水的大试管中,充分混匀,然后用无菌吸管从此试管中吸取1 mL加入另一支盛有9 mL无菌水的试管中,混合均匀,依次制成101、102、103、104、105、106系列稀释度的大肠杆菌稀释液。(2)划线或涂布平板划线分离法:在近火焰处,左手拿皿底,右手拿接种环,沾取大肠杆菌培养液在平板上划线,常用的划线方法有交叉划线和连续划线两种(如下图)。交叉划线时,每转一个角度烧一次接种环。划线完毕后,盖上培养皿盖,做好标记。划线法示意图涂布分离法:取3个平板,底面分别用记号笔写上104、105和106三种稀释度,然后用无菌吸管分别吸取相应稀释度的稀释液各0.1 mL,放入已标记好的平板上,用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀,室温下静置510 min,使菌悬液吸附进培养基(如下图)。涂布法示意图(3)培养将划线或涂布接种的平板倒置于培养箱或温室中37 培养1624 h,即可长出单个的菌落。四、平板划线操作应注意的问题第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌,划线操作结束仍需灼烧接种环,每次灼烧目的如下表:第一次灼烧每次划线之前灼烧划线结束灼烧目的避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种,使每次划线的菌种来自上次划线末端杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者灼烧接种环之后,要等其冷却后才能伸入菌液,以免温度太高杀死菌种。划线时最后一区域不要与第一区域相连。画线用力要大小适当,防止用力过大将培养基划破。培养基的营养成分下表是某微生物实验室的培养基配方。据表回答:编号成分含量(NH4)2SO40.4 gKH2PO44.0 gFeSO40.5 gCaCl20.5 gH2O100 mL(1)上表中培养基可培养的微生物类型是_。(2)此培养液能否用于植物的无土栽培?_,理由是_,若用于无土栽培,还应注意培养液中_的含量。(3)若除去,加入(CH2O),该培养基可用于培养_。【解析】培养基中未提供碳源,据此可判定该生物应为自养型,但对植物来说,无土栽培时所用培养液必须是全素培养液(即含所有必需元素),因此,该培养液不可直接用于植物的无土栽培。从培养基中除去(NH4)2SO4(氮源),加入(CH2O)(有机碳源),该培养基可用于培养固氮微生物。【答案】(1)自养型微生物(2)不能缺乏Mg等矿质元素氧气(3)固氮微生物自养微生物和异养微生物的营养比较微生物自养型微生物异养型微生物碳源CO2、NaHCO3糖类、脂肪酸等氮源NH3、铵盐、硝酸盐等铵盐、硝酸盐、蛋白质等生长因子一般不需要有些种类需要举例硝化细菌乳酸菌1关于培养基配制的说法不正确的是()A配制的培养基需要进行灭菌B微生物的适应性强,配制培养基时可以不考虑pHC虽然各种培养基的具体配方不同,但一般都含有碳源、氮源、水和无机盐D配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例【解析】pH影响微生物的生长、代谢和繁殖,因此配制培养基时pH一定要适宜。【答案】B微生物的纯化氯苯化合物是重要的有机化工原料,不易降解,会污染环境。某研究小组依照下列实验方案(如图)筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌,培养基配方如表。图a表b培养基的组成液体培养基蛋白胨牛肉膏氯苯氯化钠硝酸铵无机盐(无碳)蒸馏水号10 g5 g5 mg5 g1 L号50 mg5 g3 g适量1 L号2080 mg5 g3 g适量1 L下列有关说法正确的是()A图中有筛选作用的只有号培养基B号、号培养基中无碳源只能培养自养微生物C、号培养基中氯苯含量逐渐增加,是为了逐步选择降解氯苯能力强的微生物D微生物中原来就存在能降解氯苯的SP1菌,因此可以直接用号培养基进行一次性选择【审题导析】【精讲精析】、号培养基都对SP1菌有筛选作用;从培养基配方可以看出,、号培养基的碳源为氯苯;号培养基中氯苯的含量太高,直接使用,可能无法得到SP1菌(自然状态下具高效降解能力的变异很少)。【答案】C2上题将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的号培养基中培养,得到生长曲线(如下图),下列叙述不正确的是()A随着氯苯含量升高,SP1菌体数增多B在20 mg/L氯苯的培养基中菌体数最先达到最高C氯苯为SP1菌提供碳源DSP1菌在只含氯苯的培养基中就可以生长【解析】培养基中除了含有氯苯外,还应含有氮源、无机盐等营养物质。【答案】D1据食品产业网报道,近些年出现的一种膨化食品,合格率仅为76.2%,这两年不断有名牌企业出现食品质量问题,其主要原因大部分为铝含量超标,以及微生物超标。下列关于微生物的叙述中,正确的是()A所有的微生物都是形体微小、结构简单、对人类有害的B微生物包含了除动物界、植物界的其他生物C微生物的结构简单到没有细胞核D微生物的结构简单到没有细胞结构【答案】B2有关平板划线法操作的叙述不正确的是()A第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物B每次划线前,灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后,接种环上残留的菌种C在每一区域内划线时,接种环上的菌种直接来源于菌液D划线结束后,灼烧接种环,能及时杀死接种环上的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者【解析】在用平板划线法分离大肠杆菌的实验中,接种环取菌种前灼烧的目的是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残留的菌种;划线结束后仍需灼烧接种环,是为了避免细菌污染环境和感染操作者。从第二次划线开始,每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。【答案】C3(2016全国乙卷改编)空气中的微生物在重力等作用下,可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物,以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下:配制培养基(成分:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O);制作无菌平板;设置空白对照组和若干实验组,进行相关操作;将各组平板置于37 恒温箱中培养一段时间,统计各组平板上菌落的平均数。回答下列问题:(1)该培养基中微生物所需的氮来源于_。若要完成步骤,该培养基中的成分X通常是_。(2)步骤中,实验组的操作是_。(3)若在某次调查中,某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板,而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落,这种结果说明在此次调查中出现了_现象。【解析】(1)牛肉膏和蛋白胨中均含有氮元素,因此微生物所需的氮来源于牛肉膏和蛋白胨。若要完成步骤,需要进行倒平板操作,用到的是固体培养基,所以培养基中要有琼脂。(2)该实验的空白对照组为不进行处理的无菌平板,实验组的操作为将各无菌平板分别放置在教室不同高度的位置上,开盖暴露相同时间。(3)若空白对照组的平板上出现了菌落,说明实验过程中出现了污染现象。【答案】(1)牛肉膏、蛋白胨琼脂(2)将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上,开盖暴露一段时间(3)污染学业达标测评(一)一、选择题1在光亮处用一种培养液分别培养绿藻和酵母菌,其结果如图所示,造成这种结果的原因是培养液中()A缺少无机盐B含氧量太高C缺少有机养分D不含二氧化碳【解析】绿藻(自养)增多,酵母菌(异养)数量减少,说明培养基中缺少有机碳源。【答案】C2下表是某同学培养微生物时配制的培养基,关于此培养基的说法中,错误的是()编号成分(NH4)2SO4KH2PO4FeSO4CaCl2H2O含量0.4 g4.0 g0.5 g0.5 g100 mLA.此培养基可用来培养自养型微生物B此表中的营养成分共有三类,即水、无机盐、氮源C表中各成分的重量按照所培养的微生物的营养需要来确定D若除去,此培养基可用于培养大肠杆菌【解析】由表格可知,该培养基不含有机物,且无碳源,因此可培养自养型微生物,大肠杆菌为异养型,除去之后,培养基中缺少碳源和氮源,大肠杆菌无法生长。【答案】D3如何判断制作的培养基是否灭菌彻底()A看培养基是否透明B有没有消灭细菌菌体C未接种的培养基在恒温箱中保温12天后有无菌落生长D是否消灭了微生物的芽孢、孢子【解析】配制好的培养基,是否灭菌彻底,通常在使用前在恒温箱中保温12天后检验有无菌落生长,若无则说明灭菌彻底。【答案】C4无菌技术包括以下几个方面的叙述,其中错误的是()A对实验操作的空间、操作者的衣物和手进行灭菌B将用于微生物的培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌C为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行D实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触【解析】对实验操作的空间、操作者的衣物和手进行清洁是消毒而不是灭菌。【答案】A5培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是()化学消毒灼烧灭菌干热灭菌紫外线灭菌高压蒸汽灭菌巴氏消毒法ABC D【解析】培养基用高压蒸汽灭菌;培养皿能耐高温,用干热灭菌法;接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底灭菌的效果;实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒,如用酒精擦拭双手;空气可用紫外线消毒;为不破坏其营养成分,牛奶可采用巴氏消毒法。【答案】A6下列所述环境条件下的微生物,能正常生长繁殖的是()A在缺乏生长素的无氮培养基中的圆褐固氮菌B在人体表皮擦伤部位的破伤风杆菌C在新配制的植物矿质营养液中的酵母菌D在灭菌后的动物细胞培养液中的禽流感病毒【解析】圆褐固氮菌能够产生生长素,因此可以在缺乏生长素的无氮培养基中正常生长繁殖。破伤风杆菌是一种厌氧型细菌,人体表皮擦伤部位是有氧的环境,因此,破伤风杆菌不能正常生长繁殖;酵母菌是一种异养型微生物,新配制的植物矿质营养液中缺少有机碳,因此酵母菌不能正常生长繁殖;禽流感病毒不能独立生活,只能寄生在活的细胞中,因此禽流感病毒不能在灭菌后的动物培养液中正常生长繁殖。【答案】A7某生物兴趣小组到野外采集能分解纤维素的细菌,他们在一段枯木上采集到部分细菌,如何将分解纤维素的细菌分离出来()A用牛肉膏蛋白胨培养基B用不含氮的培养基C用以纤维素为唯一碳源的培养基D不含氮的培养基上用平板划线法也可以选出【解析】牛肉膏蛋白胨培养基为全营养培养基,细菌都可以生长;不含氮的培养基上,分解纤维素的细菌也不能生长。【答案】C8根据生物与环境的相互依存关系判断,下列寻找目标菌株的思路不正确的是()A从热泉中寻找耐热细菌B从成熟的葡萄皮上寻找酵母菌C从贫瘠的土壤中寻找分解尿素的细菌D从树林的腐殖土壤中寻找分解纤维素的细菌【解析】贫瘠的土壤中没有分解尿素的细菌,较肥沃的土壤中才有。【答案】C二、非选择题9某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了如下实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了_和_。除此之外,培养基还必须含有的基本成分是_和_。(2)对培养基进行灭菌,应该采用的方法是_。(3)为了使该实验所得结果可靠,还应该同时在另一平板上接种_作为对照进行实验。(4)培养20小时后,观察到平板上有形态和颜色不同的菌落,这说明湖水样品中有_种细菌。一般说来,菌落总数越多,湖水遭受细菌污染的程度越_。【解析】(1)蛋白胨可提供碳源、氮源、维生素,而淀粉可提供碳源,除此之外,微生物的生长还需无机盐和水。(2)对培养基的灭菌,在实验室内常用高压蒸汽灭菌法。(3)在实验的过程中,除实验变量以外其他各变量均应适宜且相同,以利于更好地实现实验目的。(4)不同的菌落具有各自的菌落特征(如硬度、颜色、透明度、光滑度等)。【答案】(1)氮源、生长因子(碳源不作要求)碳源无机盐水(后两空顺序可颠倒)(2)高压蒸汽灭菌法(3)无菌水(4)多高(或严重)10检验饮用水中大肠杆菌的含量是有效监控疾病发生的必要措施。下图表示相关的检验过程。(横线上填文字,内填编号)(1)图中需要无菌操作的过程有。(2)经过过程,样品被稀释了_倍,其目的是_。(3)在进行过程之前,需要随机取若干灭菌后的空平板先行培养一段时间,这样做的目的是_。接种微生物的方法有很多,图中过程的方法为_。下列示意图与过程方法对应的结果是。ab【解析】(1)在稀释和涂布操作中,为避免杂菌污染,都需进行无菌操作。(2)过程样品被稀释了10倍,过程进行了4次共稀释了104倍,因此样品被稀释了105倍。经稀释后的样液涂布到平板上才能形成单个菌落。(3)随机取若干灭菌后的空平板先行培养一段时间,如果无菌落出现,说明平板灭菌彻底,否则不彻底。图中过程方法为稀释涂布法,a、b两个培养结果示意图分别是用平板划线法和稀释涂布法接种所得。【答案】(1)(2)105培养后形成单个菌落(3)检测培养基平板灭菌是否合格稀释涂布法b12
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