生物选修三第一章和第二章复习

专题专题1 基因工程基因工程1、基因工程又叫做基因工程又叫做 _ _ 或或_。基因工程基因工程基因拼接技术基因拼接技术DNA重组技术重组技术2、基本工具：、基本工具：“分子手术刀分子手术刀”“分子缝合针分子缝合针”基因进入受体细胞的载体基因进入受体细胞的载体3、基本操作步骤：基本操作步骤：1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建（核心）3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 例例1.下列有关下列有关DNA重组技术的基本工具的相关叙述，重组技术的基本工具的相关叙述，不正确的是不正确的是 A.DNA重组技术的基本工具有三种：限制酶、重组技术的基本工具有三种：限制酶、DNA连接酶和载体连接酶和载体 B.载体需要具有多个限制酶切点，以便于目的基载体需要具有多个限制酶切点，以便于目的基因的鉴定和选择因的鉴定和选择 C.限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的 D.DNA连接酶根据其来源分为两类：连接酶根据其来源分为两类：E.coli DNA连接酶和连接酶和T4 DNA连接酶连接酶B（一）目的基因的提取（一）目的基因的提取获取方法：获取方法：1、_中获取目的基因中获取目的基因2、人工合成法：化学方法合成、人工合成法：化学方法合成DNA片段（片段（DNA合成仪）合成仪）3、PCR反应扩增反应扩增DNA基本操作步骤基本操作步骤从基因文库从基因文库原理：原理：DNADNA复制复制 （二）基因表达载体构建二）基因表达载体构建1、基因表达载体由、基因表达载体由_、_、_四部分组成。四部分组成。目的基因目的基因启动子启动子标记基因标记基因 终止子终止子2、启动子作用：、启动子作用：3、标记基因的作用：、标记基因的作用：RNA聚合酶识别和结合的位点聚合酶识别和结合的位点 鉴别受体细胞中是否含有目的基因鉴别受体细胞中是否含有目的基因 筛选出含目的基因的细胞筛选出含目的基因的细胞例例2普通牛奶赖氨酸含量低，未来提高牛奶中普通牛奶赖氨酸含量低，未来提高牛奶中赖氨酸的含量，吉林大学农学部利用现代赖氨酸的含量，吉林大学农学部利用现代生物工程技术，得到一头转入赖氨酸基因生物工程技术，得到一头转入赖氨酸基因的克隆奶牛，预计将来其分泌的乳汁中含的克隆奶牛，预计将来其分泌的乳汁中含有更多的赖氨酸。有更多的赖氨酸。（1）获得外源赖氨酸基因所需要的工具酶）获得外源赖氨酸基因所需要的工具酶是是 ，该基因不能从人体细胞中获得，该基因不能从人体细胞中获得，原因是原因是 。（2）右图是基因表达载体示意图，构建基因表达载体的目）右图是基因表达载体示意图，构建基因表达载体的目的的 ,图中图中A片段表示片段表示 ，B片段表示片段表示 。其中，抗生素。其中，抗生素抗性基因的作用是抗性基因的作用是 .。限制酶限制酶赖氨酸为人体必需氨基酸，赖氨酸为人体必需氨基酸，在人体内不能合成（没有相关基因）在人体内不能合成（没有相关基因）使目的基因在受体细胞内稳定存在并进行复制，使目的基因在受体细胞内稳定存在并进行复制，同时使目的基因能够表达和发挥作用同时使目的基因能够表达和发挥作用终止子终止子启动子启动子作为标记基因作为标记基因（或有利于对含有目的基因的细胞进行鉴别与筛选）（或有利于对含有目的基因的细胞进行鉴别与筛选）（3）人体蛋白质基因之所以能）人体蛋白质基因之所以能“插入插入”到羊的染色体内，原因是到羊的染色体内，原因是 ，空间结构、化学组成相同；有互补的碱基序列空间结构、化学组成相同；有互补的碱基序列导入植物导入植物 细胞：细胞：（三）将目的基因导入受体细胞（三）将目的基因导入受体细胞导入动物导入动物 细胞：细胞：导入微生物细胞：导入微生物细胞：受体细胞受体细胞 导入方法导入方法体细胞体细胞 受精卵受精卵受精卵受精卵 显微注射法显微注射法Ca2处理法处理法农杆菌转化法农杆菌转化法 基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法例例3 3在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因afpafp对提高农作物的抗寒对提高农作物的抗寒能力有较好的应用价值。右图所示是获得转基因莴苣的技术能力有较好的应用价值。右图所示是获得转基因莴苣的技术流程，请据图回答下列问题：流程，请据图回答下列问题：(1)(1)获取目的基因的主要途径包括从自然界已有获取目的基因的主要途径包括从自然界已有的物种中分离和的物种中分离和_。(2)(2)过程需要的酶有过程需要的酶有_、_。(3)(3)重组质粒除了带有抗冻蛋白基因重组质粒除了带有抗冻蛋白基因afpafp以外，还必以外，还必须含有启动子、终止子和须含有启动子、终止子和_，这样才能构，这样才能构成一个完整的基因表达载体。成一个完整的基因表达载体。(4)(4)如果受体细胞如果受体细胞C1C1是土壤农杆菌，则将目的基因是土壤农杆菌，则将目的基因导入它的目的是利用农杆菌的导入它的目的是利用农杆菌的_，使目的，使目的基因进入受体细胞基因进入受体细胞C2C2，并将其插入到受体细胞，并将其插入到受体细胞C2C2中中_上，使目的基因的遗传特性得以上，使目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达，形成转基因莴苣。经过程获得稳定维持和表达，形成转基因莴苣。经过程获得的转基因莴苣中的目的基因是否表达，在分子水平的转基因莴苣中的目的基因是否表达，在分子水平上可用上可用_法进行检测，如果出现杂交带，法进行检测，如果出现杂交带，说明目的基因已经表达蛋白质产品，转基因莴苣培育成功。说明目的基因已经表达蛋白质产品，转基因莴苣培育成功。(用逆转录等方法进行用逆转录等方法进行)人工合成人工合成限制酶限制酶DNADNA连接酶连接酶标记基因标记基因转化作用转化作用染色体染色体DNADNA抗原抗原抗体杂交抗体杂交将目的基因导入微生物细胞 原核生物原核生物繁殖快、多为单细繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，故早胞、遗传物质相对较少，故早期常作为受体细胞。期常作为受体细胞。大肠杆菌细胞大肠杆菌细胞用用Ca2+处理处理感受态细胞感受态细胞重组表达载体重组表达载体DNA溶于缓冲液溶于缓冲液混合混合转入转入目的基因是否插入转基目的基因是否插入转基因生物染色体的因生物染色体的DNA：（四）目的基因的检测与鉴定四）目的基因的检测与鉴定目的基因是否表达目的基因是否表达：目的基因是否转录目的基因是否转录：方法方法:DNADNA分子杂交分子杂交方法方法:分分 子子 杂杂 交交方法方法:抗原抗体杂交抗原抗体杂交鉴定鉴定抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等检测检测例例4下列关于目的基因的检测与鉴定的叙述，错下列关于目的基因的检测与鉴定的叙述，错误的是误的是()A目的基因在真核细胞中能否稳定遗传的关键是目的基因在真核细胞中能否稳定遗传的关键是目的基因是否插入质目的基因是否插入质DNA中中B检测受体细胞是否含有目的基因及其是否成功检测受体细胞是否含有目的基因及其是否成功转录的方法都是分子杂交法转录的方法都是分子杂交法C目的基因的鉴定通常是在个体水平上进行的目的基因的鉴定通常是在个体水平上进行的D如在受体细胞内检测到目的基因表达的蛋白质，如在受体细胞内检测到目的基因表达的蛋白质，可确定目的基因首端含有启动子可确定目的基因首端含有启动子A用转基因动物生产药物用转基因动物生产药物-动物乳腺生物反应器动物乳腺生物反应器获取目的基因获取目的基因（药用蛋白基因）（药用蛋白基因）构建基因表达载体构建基因表达载体（在药用蛋白基因前加在药用蛋白基因前加乳腺蛋白基因的启动子乳腺蛋白基因的启动子）显微注射导入哺乳显微注射导入哺乳动物受精卵中动物受精卵中形成早期形成早期胚胎胚胎将胚胎送入母体动物将胚胎送入母体动物发育成转基因动物（只有在产下的雌性动物个体中，转入发育成转基因动物（只有在产下的雌性动物个体中，转入的基因才能表达）的基因才能表达）（二）动物基因工程前景广阔（二）动物基因工程前景广阔 用转基因动物作器官移植的供体用转基因动物作器官移植的供体供体动物：供体动物：存在的难题：存在的难题：解决方法：解决方法：猪猪免疫排斥免疫排斥将供体基因组导入某种基因调节因子，以将供体基因组导入某种基因调节因子，以抑制抗原抑制抗原决定基因的表达，或设法除去抗原决定基因，决定基因的表达，或设法除去抗原决定基因，再结再结合克隆技术，培育出合克隆技术，培育出没有免疫排斥反应没有免疫排斥反应的转基因克的转基因克隆猪器官。隆猪器官。（三）、基因工程药品异军突起（三）、基因工程药品异军突起工程菌：用基因工程的方法，使外源基因得到高效率表达的菌类细工程菌：用基因工程的方法，使外源基因得到高效率表达的菌类细胞株系。胞株系。我国已生产的产品我国已生产的产品：白细胞介素白细胞介素-2、干扰素、乙肝疫苗等、干扰素、乙肝疫苗等（四）基因诊断与基因治疗（四）基因诊断与基因治疗 基因诊断：基因诊断：用放射性同位素用放射性同位素等标记的等标记的“DNADNA探针探针”检测肝检测肝炎病毒等病毒感染及遗传缺陷，炎病毒等病毒感染及遗传缺陷，不但准确而且迅速。不但准确而且迅速。我国研究人员正在制备我国研究人员正在制备用于基因治疗的基因工用于基因治疗的基因工程细胞程细胞基因治疗：基因治疗：把健康的外源基因把健康的外源基因导入有基因缺陷的细胞中，达到导入有基因缺陷的细胞中，达到治疗疾病的目的。治疗疾病的目的。体外基因治疗体外基因治疗体内基因治疗体内基因治疗基因治疗的形式基因治疗的形式例例5下列说法不正确的是下列说法不正确的是()A干扰素是动物或人体细胞受到病毒侵染时产生干扰素是动物或人体细胞受到病毒侵染时产生的一种糖蛋白的一种糖蛋白B基因治疗是治疗遗传病的最有效手段基因治疗是治疗遗传病的最有效手段C体内基因治疗是基因治疗的一种形式体内基因治疗是基因治疗的一种形式D体外基因治疗仅指体外完成基因转移这个环节体外基因治疗仅指体外完成基因转移这个环节 D例例6.科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄细胞的耐寒能力科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄细胞的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有Pst、Sma、Hind、Alu等四种限制酶切割位点，下图是转基等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图因抗冻番茄培育过程的示意图(ampr为抗氨苄青霉素基因为抗氨苄青霉素基因)，其，其中是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，中是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，、表表示相关结构或细胞。请据图回答问题。示相关结构或细胞。请据图回答问题。(1)在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用在此实例中，应该选用_限制酶，分别对限制酶，分别对_进行切割，切割后产生的进行切割，切割后产生的DNA片段分别为片段分别为_种。种。Pst、Sma含鱼抗冻蛋白基因的含鱼抗冻蛋白基因的DNA、质粒、质粒4、2(2)培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入鱼抗冻蛋白基因的番长，要利用该培养基筛选已导入鱼抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体中含有茄细胞，应使基因表达载体中含有_，作为标记基因。，作为标记基因。(3)研究人员通常采用农杆菌转化法将鱼抗冻蛋白基因导研究人员通常采用农杆菌转化法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用入番茄细胞内。通常采用_技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。的蛋白质。(4)利用组织培养技术将导入鱼抗冻蛋白基因的番茄组织利用组织培养技术将导入鱼抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中、依次表示组织培养过程细胞培育成植株。图中、依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的中番茄组织细胞的_过程。过程。脱分化、再分化脱分化、再分化抗氨苄青霉素基因抗氨苄青霉素基因(ampr)抗原抗原抗体杂交抗体杂交蛋白质工程流程图蛋白质工程流程图1.从预期的蛋白质从预期的蛋白质功能功能出发出发2.设计预期的蛋白质设计预期的蛋白质结构结构3.推测应用的推测应用的氨基酸氨基酸序列序列4.找到相应的找到相应的脱氧核苷酸脱氧核苷酸序列序列板书：用干扰素例子，反推过程。第4步后接着做什么？基因基因DNA DNA mRNA mRNA 氨基酸序列氨基酸序列多肽链多肽链 蛋白质蛋白质三维结构三维结构转录转录 翻译翻译 折叠折叠 生物功能生物功能 预期功能预期功能 分子分子设计设计 DNADNA合成合成 中心法则中心法则 蛋白质工程蛋白质工程 例例7.下图为蛋白质工程操作的基本思路，请据图回答下图为蛋白质工程操作的基本思路，请据图回答下列问题：下列问题：(1)代表蛋白质工程操作思路的过程是代表蛋白质工程操作思路的过程是_；代表；代表中心法则内容的是中心法则内容的是_。(填写数字填写数字)(2)写出图中各数字代表的生物学过程的名称或内容：写出图中各数字代表的生物学过程的名称或内容：_；_；_。(3)蛋白质工程的目的是蛋白质工程的目的是_，通过通过_实现。实现。(4)从图中可以看出蛋白质工程的基本途径与中心法则从图中可以看出蛋白质工程的基本途径与中心法则是是_的。的。折叠折叠分子设计分子设计DNA合成合成对蛋白质的结构进行分子设计对蛋白质的结构进行分子设计基因合成或修饰基因合成或修饰相反相反例例8.运用某生物工程技术将毒性肽融合进入运用某生物工程技术将毒性肽融合进入抗体分子，制造出抗体分子，制造出“导弹药物导弹药物”，它可自，它可自动瞄准和攻击体内的靶组织或靶细胞动瞄准和攻击体内的靶组织或靶细胞(如癌如癌细胞细胞)。此技术是。此技术是()A基因工程基因工程 B细胞工程细胞工程C蛋白质工程蛋白质工程 D胚胎工程胚胎工程c比较：基因工程和蛋白质工程比较：基因工程和蛋白质工程基因工程基因工程蛋白质工程蛋白质工程相同点相同点都要改造基因，都属于分子水平都要改造基因，都属于分子水平产生新的产生新的基因型，无新基因基因型，无新基因基因（型）基因（型）产生的蛋白质产生的蛋白质原有的原有的新的新的联系联系蛋白质工程以基因工程为基础，蛋白质工程以基因工程为基础，是基因工程的应用和延伸是基因工程的应用和延伸专题专题2 细胞工程细胞工程(离体的植物离体的植物器官、组织或细胞器官、组织或细胞)脱分化脱分化再分化再分化愈伤组织愈伤组织根、芽根、芽（胚状体）（胚状体）植物体植物体 培养条件：培养条件：离体、含有离体、含有全部营养成分全部营养成分的培养基、一定的的培养基、一定的温度、空气、温度、空气、无菌环境无菌环境、适合的、适合的PHPH、适合的、适合的光照等光照等外植体外植体举例：举例：花药离体培养花药离体培养基因工程培育的抗棉铃虫的棉花植株基因工程培育的抗棉铃虫的棉花植株细胞工程中培育的细胞工程中培育的“番茄番茄-马铃薯马铃薯”杂种植株杂种植株1 1、植物组织培养、植物组织培养 植物植物A A细胞细胞植物植物B B细胞细胞去壁去壁原生质体原生质体A A原生质体原生质体B B原生质原生质体融合体融合融合细胞融合细胞再生壁再生壁杂种细胞杂种细胞脱分化脱分化去壁的常用方法：去壁的常用方法：酶解法酶解法（纤维素酶、果胶酶等）（纤维素酶、果胶酶等）原生质体融合方法：原生质体融合方法：物理法：物理法：离心、振动、电刺激等离心、振动、电刺激等 化学法：化学法：聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）融合成功的标志融合成功的标志人工诱导人工诱导筛选筛选愈伤组织愈伤组织杂种植株杂种植株再分化再分化2 2、植物体细胞杂交的过程、植物体细胞杂交的过程例例9 9下图为植物体细胞杂交过程示意图。据图回下图为植物体细胞杂交过程示意图。据图回答：答：（1 1）步骤是）步骤是 ，最常用的方法是最常用的方法是 。（2 2）步骤一般常用的化学试剂是）步骤一般常用的化学试剂是 ，目的，目的是是 。（3 3）在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程）在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中，运用的技术手段是中，运用的技术手段是 ，其中，其中步骤相当于步骤相当于 ，步骤相当，步骤相当于于 。*（4 4）植物体细胞杂交的目的是获得新的杂种植）植物体细胞杂交的目的是获得新的杂种植株。使株。使 能够在新的能够在新的植物体上有所表现，其根本原因植物体上有所表现，其根本原因是是 。（5 5）若远源杂交亲本）若远源杂交亲本A A和和B B都是二倍体，则杂种都是二倍体，则杂种植株为植株为 倍体。倍体。（6 6）从理论上讲，杂种植株的育性为）从理论上讲，杂种植株的育性为 。若运用传统有性杂交方法能否现？若运用传统有性杂交方法能否现？，原因是原因是 。因此，这项研究对于培养作物新品种方面的重大因此，这项研究对于培养作物新品种方面的重大意义在于意义在于 。去掉细胞壁，分离出有活力的原生质体去掉细胞壁，分离出有活力的原生质体酶解法酶解法PEG诱导不同植物体细胞的原生质体融合诱导不同植物体细胞的原生质体融合植物组织培养植物组织培养脱分化脱分化再分化再分化远源杂交亲本的遗传特征远源杂交亲本的遗传特征杂种植株获得双亲的遗传物质杂种植株获得双亲的遗传物质四四可育可育不能不能因为不同种生物之间存在生殖隔离因为不同种生物之间存在生殖隔离克服远源杂交不亲和的障碍克服远源杂交不亲和的障碍例例10.A种植物的细胞和种植物的细胞和B种植物细胞的结构如右图种植物细胞的结构如右图所示（仅显示细胞核），将所示（仅显示细胞核），将A、B两种植物细胞两种植物细胞去掉细胞壁后，诱导二者的原生质体融合，形成去掉细胞壁后，诱导二者的原生质体融合，形成单核的杂种细胞，若经过组织培养后得到了杂种单核的杂种细胞，若经过组织培养后得到了杂种植株，则该杂种植株是（植株，则该杂种植株是（）A二倍体；基因型是二倍体；基因型是DdYyRr B三倍体；基因型是三倍体；基因型是DdYyRrC四倍体；基因型是四倍体；基因型是DdYyRr D四倍体；基因型是四倍体；基因型是DDddYYyyRRrrC例例11多聚半乳糖醛酸酶多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果胶使细胞壁破损。成熟的番茄果实中，能降解果胶使细胞壁破损。成熟的番茄果实中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程减少合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到基因反向接到Ti质粒上，导质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如图。入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如图。(1)若已获取若已获取PG的的mRNA，可通过，可通过_获取获取PG基因。重组质粒转移到大肠基因。重组质粒转移到大肠杆菌中的目的是杆菌中的目的是_。(2)用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有_的培养基进的培养基进行筛选，理由是行筛选，理由是_。之后，还需将其置于质量分数为之后，还需将其置于质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞的蔗糖溶液中，观察细胞_现象来鉴别细胞壁是否再生。现象来鉴别细胞壁是否再生。(3)由于导入的目的基因能转录出反义由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能，且能与与_互补结合，因此可抑制互补结合，因此可抑制PG基因表达的翻译过程。基因表达的翻译过程。若若_，则可确定转基因番茄培育成功。，则可确定转基因番茄培育成功。番茄果实的保质期延长番茄果实的保质期延长逆转录法逆转录法大量复制目的基因大量复制目的基因(或克隆目的基因或克隆目的基因)卡那霉素卡那霉素重组质粒中含卡那霉素抗性基因而四环素抗性基因被破坏重组质粒中含卡那霉素抗性基因而四环素抗性基因被破坏是否发生质壁分离是否发生质壁分离天然的天然的PG基因转录的基因转录的mRNA（1 1）植物繁殖的新途径）植物繁殖的新途径1 1）微型繁殖（快速繁殖）微型繁殖（快速繁殖）2 2）作物脱毒）作物脱毒3 3）神奇的人工种子）神奇的人工种子（2 2）作物新品种的培育）作物新品种的培育1 1）单倍体育种）单倍体育种2 2）突变体的利用）突变体的利用3 3）转基因植物的培育）转基因植物的培育 （3 3）细胞产物的工厂化生产）细胞产物的工厂化生产3 3、植物细胞工程的实际应用、植物细胞工程的实际应用动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞工程常用的技术手段：植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养、植物组织培养、植物体细胞杂交植物体细胞杂交强调：强调：是其他动物是其他动物细胞工程技术的基础。细胞工程技术的基础。动物细胞培养动物细胞培养 动物细胞核移植动物细胞核移植 动物细胞融合动物细胞融合 单克隆抗体单克隆抗体 动物细胞培养技术动物细胞培养技术 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官胰蛋白酶剪碎单个细胞加培养液制成细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代部分细胞遗传物质改变动物细胞培养不能最终培养成动物体随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖1 动物细胞培养 2 体细胞核移植的过程（以高产奶牛为例）（以高产奶牛为例）体细胞体细胞培养培养甲牛甲牛乙牛乙牛M卵卵母细胞母细胞去除核去除核去核卵去核卵母细胞母细胞重组重组细胞细胞核植入核植入早期早期胚胎胚胎代孕母牛丙代孕母牛丙移植移植体细胞群体细胞群克隆牛克隆牛细胞核移植细胞核移植胚胎移植胚胎移植物理或化学方法激活物理或化学方法激活例例12科学家通过转基因技术获得了含有人生长激素基因的奶牛，科学家通过转基因技术获得了含有人生长激素基因的奶牛，如果要加速转基因奶牛的繁育，可以对此转基因奶牛进行克隆如果要加速转基因奶牛的繁育，可以对此转基因奶牛进行克隆(如图所示如图所示)，(1)在进行细胞培养之前，要对取自转基因奶牛的组织细胞进行分在进行细胞培养之前，要对取自转基因奶牛的组织细胞进行分离，形成单个细胞，这个过程中需要利用离，形成单个细胞，这个过程中需要利用_酶处理。酶处理。(2)用于核移植的供体细胞，一般都选用传代用于核移植的供体细胞，一般都选用传代10代以内的细胞，原代以内的细胞，原因是因是_。(3)在进行原代培养时，细胞增殖的方式是在进行原代培养时，细胞增殖的方式是_，此外，细，此外，细胞增殖还表现出胞增殖还表现出_和接触抑制等特点。和接触抑制等特点。(4)将进行培养的供体细胞注入去核的卵母细胞中，去除卵母细胞将进行培养的供体细胞注入去核的卵母细胞中，去除卵母细胞细胞核的目的是细胞核的目的是_。胰蛋白胰蛋白该种细胞代谢旺盛、分裂能力强，且遗传物质没有发生改变该种细胞代谢旺盛、分裂能力强，且遗传物质没有发生改变有丝分裂有丝分裂贴壁生长贴壁生长使克隆出的动物个体的遗传物质几乎全部来自供体细胞使克隆出的动物个体的遗传物质几乎全部来自供体细胞(5)将重组细胞在培养液中培养成的重组胚胎移入受将重组细胞在培养液中培养成的重组胚胎移入受体母牛后，该母牛就会生出与供体奶牛遗传物质体母牛后，该母牛就会生出与供体奶牛遗传物质相同的牛犊，但也不是相同的牛犊，但也不是100%的复制，原因最可的复制，原因最可能是能是_。(6)上述动物细胞工程中涉及的技术有上述动物细胞工程中涉及的技术有_。转基因奶牛的克隆成功，说明了动物的转基因奶牛的克隆成功，说明了动物的_具有全能性。具有全能性。体细胞的细胞核体细胞的细胞核生物的性状受细胞核基因和细胞质基因共同控制；生物的性状受细胞核基因和细胞质基因共同控制；生物的性状还受环境因素的影响生物的性状还受环境因素的影响核移植、动物细胞培养、胚胎移植技术核移植、动物细胞培养、胚胎移植技术例例13.下列关于动物细胞培养的叙述，说法正确的选项有下列关于动物细胞培养的叙述，说法正确的选项有几个几个()动物细胞培养的原理是动物细胞的全能性动物细胞培养的原理是动物细胞的全能性需要对细胞进行一次脱分化处理和两次蛋白酶处理需要对细胞进行一次脱分化处理和两次蛋白酶处理原代培养的细胞是指贴壁生长到发生接触抑制之间的细原代培养的细胞是指贴壁生长到发生接触抑制之间的细胞胞恒温条件下，细胞周期持续时间长短不随细胞培养进程恒温条件下，细胞周期持续时间长短不随细胞培养进程而改变而改变传代培养的细胞因为以有丝分裂方式增殖，所以在传代传代培养的细胞因为以有丝分裂方式增殖，所以在传代过程中其遗传物质保持不变过程中其遗传物质保持不变只要培养条件适宜，细胞都可在体外无限繁殖只要培养条件适宜，细胞都可在体外无限繁殖可用于检测有毒物质、构建人造皮肤、大量生产药物蛋可用于检测有毒物质、构建人造皮肤、大量生产药物蛋白白为防止培养过程中微生物的污染，应将培养箱抽成真空为防止培养过程中微生物的污染，应将培养箱抽成真空以消毒、灭菌以消毒、灭菌A1 B2 C3 D4A细胞细胞A细胞细胞B杂种细胞杂种细胞物理法、物理法、化学法化学法灭活灭活的仙台病毒的仙台病毒 3 3、动物细胞融合、动物细胞融合过程过程诱导动物细胞融合与植物原生质体融合的诱导动物细胞融合与植物原生质体融合的原理原理和和方法方法是否是否基本相同？基本相同？制备单克隆抗体不具有繁殖性不具有繁殖性但具有抗原性但具有抗原性抗原注入小鼠体内抗原注入小鼠体内已免疫的已免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞筛选筛选出出杂交瘤细胞杂交瘤细胞筛选筛选出能产生特异性抗体的细胞群出能产生特异性抗体的细胞群体外培养体外培养体内培养体内培养从培养液中提取从培养液中提取从小鼠腹水中提取从小鼠腹水中提取单克隆抗体单克隆抗体细胞融合细胞融合动物细胞培养动物细胞培养4 4 单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备(特定的特定的选择培养基选择培养基)例例14下图为单克隆抗体制备流程示意图。下图为单克隆抗体制备流程示意图。(1)单克隆抗体制备技术的基础是单克隆抗体制备技术的基础是 。(2)细胞融合是随机的过程，在细胞融合是随机的过程，在HAT培养基中培养，目的培养基中培养，目的是是 。在细胞培养过程中，培养液中需要添。在细胞培养过程中，培养液中需要添加无机盐，但要注意无机盐的加无机盐，但要注意无机盐的 ，以保，以保证生命活动的正常进行。证生命活动的正常进行。(3)为选育出能产生高特异性抗体的细胞，要将从为选育出能产生高特异性抗体的细胞，要将从HAT培培养基上筛选出的细胞稀释到养基上筛选出的细胞稀释到710个细胞个细胞ml，每孔滴，每孔滴入入0.1ml细胞稀释液，其目的是细胞稀释液，其目的是 。(4)若用若用15N标记的氨基酸培养能产生单克隆抗体的细胞，标记的氨基酸培养能产生单克隆抗体的细胞，放射性物质在细胞结构中出现的先后顺序放射性物质在细胞结构中出现的先后顺序是是 。核糖体、内质网、高尔基体、细胞膜核糖体、内质网、高尔基体、细胞膜动物细胞培养动物细胞培养筛选杂交瘤细胞筛选杂交瘤细胞种类和数量（浓度）种类和数量（浓度）使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的 主要用于疾病的诊断、治疗和预防。主要用于疾病的诊断、治疗和预防。若在单抗上带上抗癌药物制成若在单抗上带上抗癌药物制成“生物导弹生物导弹”，将药物，将药物定向定向带到癌细胞所在部位，既消灭了癌细胞又不会伤害健康细带到癌细胞所在部位，既消灭了癌细胞又不会伤害健康细胞。胞。特点：与常规抗体相比，具有特点：与常规抗体相比，具有特异性强、灵敏度高、化学特异性强、灵敏度高、化学性质单一性质单一的优点。的优点。单克隆抗体的应用单克隆抗体是指：单克隆抗体是指：杂交瘤细胞产生的单一抗体杂交瘤细胞产生的单一抗体