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1、DNA精确定量系统简介一、主要用途：DNA精确定量 精确定量检测样品中dsDAN(双链DNA)的含量是高通量测序DNA样品前期必经程序之一，也是购置此设备的主要目的。依靠此设备，在测序样品送交测序公司之前可自行纯化并精确定量，既节省经费，又能加快测序工作进程。当然，该设备还可用于其他样品DNA的定量检测分析，如样品基因组DAN检测，cDNA 文库的构建，克隆DNA 片段的纯化，PCR扩增产物检测,药物中残留DNA 分子的测定等。常规的 DNA 含量的检测方法是在 260nm（A260）处测其吸光值。该方法主要的缺点是单链核苷酸和单核苷酸会产生干扰信号，核酸样品中的杂质也会影响结果。光吸收不能区
2、分 DNA 和 RNA, 灵敏度也相对较低，为g级 (在 A260 值为 0.1 时相对应的双链 DNA 浓度为 5 g/ml )。PicoGreen定量检测方法是与DNA精确定量系统配合使用，该法简便易行，检测灵敏度高，可检测到pg级DNA；检测范围宽，可跨越个数量级；特异性好，基本不受ssDNA和RNA的影响，并且可以耐受一定浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白等干扰。目前使用Picogreen染料定量检测DNA已经广泛用于生物学检测，并被2010年版中华人民共和国药典选为药物残留DNA定量方法。二、其他用途：（1）结合分析：免疫测定，受体分析（2）功能细胞受体配体结合分析，如GPCR
3、受体分析 细胞分析：细胞毒性，细胞存活率，细胞数量测定，细胞增殖，细胞粘附，自然杀伤细胞活性，氧化爆发，钙吸收，报告基因，噬菌作用（3）动力学分析：酶活性，Ca2+和其他离子通道的测量（4）激酶及信号转导通路检测（5）分子相互作用检测： 双比率检测，如BRET(生物发光能量共振转移) （6）微生物细胞生长曲线测定：在96孔培养板中振荡培养同时实时测定细胞光密度值。附一 PicoGreen荧光染料DNA精确定量方法（本室已购置PicoGreen 双链DNA 定量检测相关试剂）附二 DNA精确定量系统(多功能酶标仪) 性能指标1 工作条件1.1 环境：能在1535室温，相对湿度75%环境下运行。1
4、.2 电源及插头：能在 220V10%，50Hz，16A供电条件下连续工作。2 技术指标2.1 检测模式： 能够进行荧光强度（包括FRET等）、时间分辨荧光，吸收光和化学发光（包括BRET，闪光及慢发光等）等四种模式的检测，并通过电脑来控制各个模式的测定。2.2 检测方法 ：终点法，动力学，顺序多发射，顺序多激发，比例（ratiometric）,扫描2.3 光学部件2.3.1. 高能氙闪灯，无需预热，有需要才发射，减少反应受热影响 。2.3.2. 光谱 ：2.3.2.1. 荧光光谱 ：240-740nm（可选配到900nm）2.3.2.2. 吸收光光谱 ： 220-1000nm.；2.3.3
5、2个滤光轮，激发、发射滤光片轮各自具有8个位置，可进行高速、周期性切换滤片。2.4 检测器 ：专业型的侧窗光电倍增器 （PMT）。2.4.1 顶读/ 底读2.4.2 增益控制（Gain）可通过软件调整或自动增益调整。2.4.3 快速检测：96孔板/9s，384孔板/16s2.4.4 内置1公分比色皿修正功能2.5 微孔板混合器：可控制时间、力度和方向以线性， 圆形或双圆形的轨道运行。2.6 温度调整范围 ：上下温控室温+4 C 到 45C，可选配到65C，精度控制为0.1C；温度稳定性 0.2C， 温度均一性 0.5C。2.8 已认证试剂： Promega DLReady, Invitroge
6、n LanthaScreenTM ，Cisbio HTRF，BellBrooks Transcreener FP / FI / TR-FRET2.9 板孔扫描 ： 可进行每孔多达30x30点 扫描2.9.1 每点能单独表示，或用整体扫描图表示 2.9.2 能去掉某点数据， 使数据更理想 2.9.3 独特轨道平均 ：在特定轨道作出阅读2.10 荧光：2.10.1 检测限度：0.2 fmol/孔荧光素；2.10.2 动态范围：8 decades。2.11 时间分辨荧光：2.11.1 检测限度：30 amol/孔Eu；2.11.2 动态范围：6 decades。2.12 吸收光：光谱范围220-10
7、00nm；1nm步调2.12.1 全波长扫描220-1000nm : 1秒/孔2.12.2 范围：0.000-4.000OD；2.12.3 重复性：0-2 OD：0.010OD，2-3OD：0.030OD2.12.4 准确性 （accuracy） : 1% 2OD2.12.5 精确度 （precision） : 0.5%1OD, 0.8%2OD2.13 化学发光：2.13.1 检测限度：20amol/孔ATP；2.13.2 动态范围：9 decades。2.13.3 专用供电器跟电子部件是屏蔽式， 减少背景噪音 2.15 MARS软件： 人性化软件，图像化视窗式设计2.15.1 符合FDA 21 CFR Part 11规格2.15.2 能通过软件全自动控制仪器2.15.3 动态多窗口运行：在同一个实验里以不同的速率收集数据（最多4种速率），慢速及快速动力学-最快可达每秒50次测读。2.15.4 随机选取实验参数分析数据。2.15.5 具备数据分析所需的一切功能软件和计算方法。2.15.6 数据能够以Microsoft Excel等数据软件进行保存。2.15.7 软件不限制用户数量。
DNA精确定量系统简介
