实验十一水中细菌总数和大肠菌群数的检测

实验十一实验十一水中细菌总数和大肠菌群水中细菌总数和大肠菌群数的检测数的检测1一、实验目的一、实验目的1 1、学习并掌握水体细菌学的检验、学习并掌握水体细菌学的检验、学习并掌握水体细菌学的检验、学习并掌握水体细菌学的检验2 2、学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法、学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法、学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法、学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法2二、实验原理二、实验原理1 1、细菌总数的测定：采用稀释平板法（混合平板法）、细菌总数的测定：采用稀释平板法（混合平板法）、细菌总数的测定：采用稀释平板法（混合平板法）、细菌总数的测定：采用稀释平板法（混合平板法）32 2、大肠菌群数的测定：采用多管发酵法（、大肠菌群数的测定：采用多管发酵法（、大肠菌群数的测定：采用多管发酵法（、大肠菌群数的测定：采用多管发酵法（MPNMPN法）法）法）法）大肠菌群以大肠杆菌为主，能在大肠菌群以大肠杆菌为主，能在大肠菌群以大肠杆菌为主，能在大肠菌群以大肠杆菌为主，能在373748h48h内发酵乳糖产酸、内发酵乳糖产酸、内发酵乳糖产酸、内发酵乳糖产酸、产气。大肠菌群数可作为判断水源或食品污染的指标。产气。大肠菌群数可作为判断水源或食品污染的指标。产气。大肠菌群数可作为判断水源或食品污染的指标。产气。大肠菌群数可作为判断水源或食品污染的指标。最大概率数法：最大概率数法：对未知样品进行十倍稀释，然后根据估算取对未知样品进行十倍稀释，然后根据估算取三个连续的稀释度平行接种多支试管，对这些平行试管的微三个连续的稀释度平行接种多支试管，对这些平行试管的微生物生长情况进行统计，长菌的为阳性，未长菌的为阴性，生物生长情况进行统计，长菌的为阳性，未长菌的为阴性，然后根据数学统计计算出样品中的微生物数目。然后根据数学统计计算出样品中的微生物数目。4三、实验材料三、实验材料1 1、水样、水样、水样、水样2 2、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、3 3倍浓缩乳糖蛋白胨培养倍浓缩乳糖蛋白胨培养倍浓缩乳糖蛋白胨培养倍浓缩乳糖蛋白胨培养 基（带指形管）、伊红美兰固体培养基基（带指形管）、伊红美兰固体培养基基（带指形管）、伊红美兰固体培养基基（带指形管）、伊红美兰固体培养基5四、实验方法四、实验方法（一）水中细菌总数的测定（混合平板法）（一）水中细菌总数的测定（混合平板法）（一）水中细菌总数的测定（混合平板法）（一）水中细菌总数的测定（混合平板法）1 1、样品采集和稀释、样品采集和稀释、样品采集和稀释、样品采集和稀释 自来水、纯净水、饮料作原样、自来水、纯净水、饮料作原样、自来水、纯净水、饮料作原样、自来水、纯净水、饮料作原样、1010-1-1 、1010-2-2三个稀释度三个稀释度三个稀释度三个稀释度 污水作污水作污水作污水作1010-1-1 、1010-2-2、1010-3-3三个稀释度三个稀释度三个稀释度三个稀释度2 2、取、取、取、取3 3个稀释度样品各个稀释度样品各个稀释度样品各个稀释度样品各1ml1ml于平皿中，再倒入于平皿中，再倒入于平皿中，再倒入于平皿中，再倒入5050左右牛肉左右牛肉左右牛肉左右牛肉 膏蛋白胨培养基约膏蛋白胨培养基约膏蛋白胨培养基约膏蛋白胨培养基约15ml15ml，轻轻转动混合均匀。凝固后，轻轻转动混合均匀。凝固后，轻轻转动混合均匀。凝固后，轻轻转动混合均匀。凝固后37 37 倒置培养。每个稀释度作倒置培养。每个稀释度作倒置培养。每个稀释度作倒置培养。每个稀释度作3 3个重复。个重复。个重复。个重复。细菌总数同一稀释度平板上菌落平均数细菌总数同一稀释度平板上菌落平均数细菌总数同一稀释度平板上菌落平均数细菌总数同一稀释度平板上菌落平均数 稀释倍数稀释倍数稀释倍数稀释倍数 （最好在（最好在（最好在（最好在3030030300个之间）个之间）个之间）个之间）6（二）水中大肠菌群数的测定（二）水中大肠菌群数的测定（二）水中大肠菌群数的测定（二）水中大肠菌群数的测定1 1、初发酵实验、初发酵实验、初发酵实验、初发酵实验 在在在在3 3倍浓缩乳糖培养基中加入倍浓缩乳糖培养基中加入倍浓缩乳糖培养基中加入倍浓缩乳糖培养基中加入3 3个梯度样品各个梯度样品各个梯度样品各个梯度样品各10ml10ml（5 5个重个重个重个重复），混匀复），混匀复），混匀复），混匀37 37 培养培养培养培养24h24h。2 2、平板分离、平板分离、平板分离、平板分离不产酸不产气和不变浑浊不产酸不产气和不变浑浊不产酸不产气和不变浑浊不产酸不产气和不变浑浊 阴性阴性阴性阴性产酸产气或仅产酸产酸产气或仅产酸产酸产气或仅产酸产酸产气或仅产酸 阳性阳性阳性阳性 菌落为深紫黑色，具菌落为深紫黑色，具菌落为深紫黑色，具菌落为深紫黑色，具 金属光泽或紫黑色不金属光泽或紫黑色不金属光泽或紫黑色不金属光泽或紫黑色不 带金属光泽或淡紫红带金属光泽或淡紫红带金属光泽或淡紫红带金属光泽或淡紫红 色中心较深色中心较深色中心较深色中心较深3 3、结果计算、结果计算、结果计算、结果计算 根据阳性管数查表得大肠菌群数。根据阳性管数查表得大肠菌群数。根据阳性管数查表得大肠菌群数。根据阳性管数查表得大肠菌群数。划线接种划线接种于伊红美于伊红美兰平板，兰平板，37 37 培养培养培养培养24h24h7五、思考题五、思考题1 1、记录每组样品中所测得的细菌总数和大肠菌群数。、记录每组样品中所测得的细菌总数和大肠菌群数。、记录每组样品中所测得的细菌总数和大肠菌群数。、记录每组样品中所测得的细菌总数和大肠菌群数。2 2、典型的大肠杆菌群菌落特征是什么？、典型的大肠杆菌群菌落特征是什么？、典型的大肠杆菌群菌落特征是什么？、典型的大肠杆菌群菌落特征是什么？8