生殖工程研究进展

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1、定义定义：从受精到植入子宫内膜的整个过程中，一个或几个环节经过人为方法，产生新一代的生殖技术。现阶段主要包括人工授精和体外发生胚胎移植。1、定义、定义：是指搜集丈夫或自愿献精者的精液，由 医务工作者注入女性生殖管道达到受孕目的的一种技术。2、发展史、发展史：1890年美国Dulemson R L首先应用，上个世纪三十年代剧增，据统计现阶段美国30，000/年人工授精的婴儿诞生。我国1983年湖南医科大学冷冻精液人工受精成功。3、方式、方式：（1）AIH:Artificial insemination husband.(2)AID:Artificial insemination donor.4、

2、适应症：AIH:丈夫或妻子生殖器及性功能异常不能正常性生活者；或丈夫精液精子少，收集后浓缩以提高授精能力。AID：丈夫无精子，或患显性染色体病，或夫妻双方含同一常染色体隐性杂合病，男方Rh+,女方Rh。5.授精方式：由导管直接注入宫颈周围。将导管插入宫颈管。宫颈盖上塑料帽，将精液注入，留置24h。6.IUI：宫腔内人工授精宫颈原因不孕症,精子活力低,免疫性不孕症,原因不明性不孕症,丈夫精子不能到达子宫腔内者.7.人工授精并发症：出血。腹痛。感染。休克。多胎。卵巢过激综合症。卵巢肿瘤。先兆子痫。1.发展史 1776年Spallanzani 在00C以下对精子生存的影响进行了研究，1866年Mon

3、tezazza 提出建立精子库，1938年Jahnel在-790C 40天复温后发现精子可存活，当时用甘油作保护剂。1981年湖南医科大学卢广琇建立了精子库，并制定了一套适合我国国情AID方法和制度，现在全国共有20多个精子库，每年数千AID出生的婴儿。据统计，美国已有100家冷冻精子库，在法国还建立了国家精子库研究中心。我国湖南医科大学于1988年被卫生部授予国家精子库技术指导中心，现在建立了精子库数据库计算机管理系统，对精子库实行了计算机现代化管理，AID和AIH已成为治疗不育症的有效方法之一。1）提供“生殖保险”促进计划生育，冷冻条件下，精液可储存5年、10年或更长时间而保持受精能力。2

4、）为人类优生开辟新的途径。3）给不育症家庭带来福音。4）开展生殖生理学和低温生物学研究。在一定的低温条件下，以足够的时间作用于生物组织细胞，引起细胞的降温、凝固，非损伤性结冰，使生物细胞内分子运动减慢、停止，使细胞代谢降低处于休眠状态，从而达到储存细胞的目的。1）温度休克：指细胞不是由于直接的冷却作用，而是由于温度急剧变化造成的损害，人精子对冷冻休克有很强的抵抗能力，在冷冻过程中，可以10C/mm的降温速度通过温度休克阶段。2）结冰时的热效应：在通过+50C-50C阶段时，由于精浆形成冰晶而释放热量，温度会突然升高，应快速通过此阶段。3）临界温度范围（致死温度范围）：从-50C-300C，尤其

5、是-50C-150C，精子常被杀死，精液由液相 固体相，伴冰晶形成及由此产生的急剧温度变化，造成精子死亡。添加冷冻保护剂后，以570C/mm的冷冻速度通过此阶段。4）温度波动：在温度低于临界范围时，由于冰晶的生长和相互作用，产生温度变化，称迁移性再结冰，从-300C-1960C，用 20C/mm速度通过此阶段。1）最早的冷冻方法是用干冰作制冷剂和储存剂近几年都用液氮蒸气作制冷剂和储存剂。2）解冻速度快速复温1000C/mm，取出直接370C水中即可。3）冷冻保护剂 为减轻冷冻和复温过程中的损伤，获得理想的冷冻生存率，必须在溶液中添加具有保护作用的物质，即冷冻保护剂，需具备2个基本条件对冷冻的细

6、胞无毒性，具有高水溶性。其保护作用主要是减少冰晶的形成，同时稀释了细胞外液溶质的浓度。分两类：能渗透到细胞内的保护剂甘油最低浓度7-10%，能得到60-90%冷冻后生存率（Mann,1964);二甲亚砜对人精较差。不能渗透到细胞内的保护剂蔗糖、卵黄，还须加青霉素、链霉素。容积2-6ml，密度60106ml,活动力50%，且a级占绝大多数，精子正常状态70%以上，取精1小时或动力50%，取精4小时精子活动力衰减15%，取精4小时直线运动程度无明显降低。1）冷冻储存的精子必须具备良好的冷冻生存率。2）需连续4天人工授精，-1,0,1,2,1ml/天。3）选择人工授精最佳时间。4）进行人工授精的妇女

7、小于40岁（最好小于35岁）5）居住地的远近。6）精神状态。7）对流产的影响。（1523%）1）人类精子的冷冻储存生殖保险服务。2）建立亚洲最大的精子库，向所有需方销售服务。3）AID服务。4）为AID夫妇所生子女提供优生、遗传咨询服务。5）夫精或供精的IUI服务。6）弱精、畸精和不明原因不育精子的体外处理。7）不育精液的系统检查。8）不孕不育夫妇的内分泌学检查服务。9）不孕不育夫妇的微生物学的检查服务。10）男性不育症的中西药物的治疗服务。11）X、Y精子分离服务。（一）定义1、体外发生：（Ectogenesis)用人工的方法，让精子和卵子在体外受精和发育，这种生殖方法称体外发生。2、试管婴

8、儿:(In vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)精子卵子体外受精并进行早，期胚胎发育，到胚泡期，再移植到子宫内，发育到出生，称体外发生-胚胎移植，即试管婴儿。（二）发展史：1890年，Walter Heape 在外科医生Samual buckley 帮助下，把安哥拉白毛雌兔的两个4-卵裂球胚胎移植到另一种有色短毛兔（已与同种雄兔交尾）的子宫内，子代6只幼兔中有2只是白色长毛兔，1947年M.C.Chang将兔受精卵保存在50C-100C水平，一周，移植后均生出正常幼兔。1954年M.C.Chang取加州白兔的2-卵裂球胚，盛于-100C下玻管血

9、清里，装在真空烧瓶内，航寄到伦敦剑桥农学院，80小时后移植到黑兔子宫内，生出加州白兔。1959年兔受卵体外受精-胚胎移植获得成功。1978年7月25日才诞生了第一个试管婴儿（Louise Brown)，这是Edwards&Steptoe的杰作。有力地促进了这门科学的发展。1981年这项研究迅速扩展到英国、澳大利亚、美国、法国、德国、瑞典、奥地利、瑞士、丹麦加拿大等。1983年中国台湾报道了一例试管婴儿，1988年3月北京医科大学诞生了试管婴儿，同年6月，湖南医科大学诞生了供胚胎移植的试管婴儿，90年代，试管婴儿在中国蓬勃发展/现已达国际水平。到目前为止，我国除了人类体外受精-胚胎移植外，还有配

10、子输卵管移植，合子输卵管移植，输卵管胚胎移植，冷冻胚胎移植，卵子和胚胎赠送，显微授精，胚胎植入前遗传学诊断等。（三）人类体外授精的流程：1、预测排卵（自然月经周期）BBT、宫颈粘液 检查、B超监测、激素测定（排卵试纸）。2、诱导排卵 （1）CC&hMG方案 （2）LHRH-a&FSH 应预防OHSS 3、取卵（1）腹腔镜（2）B超导向 4、卵母细胞体外孵育。5、体外授精。6、受精标准监测（PN）。1、胚前期发育：在体外，经相差显微镜检查，证明已受精的卵子，转移到卵裂培养基（生长培养基，GM）中，受精卵进行卵裂，先后发育成桑椹胚和胚泡，此期称胚前期。2、胚胎质量形态学评估：（1）卵裂速度和时间关

11、系：在生长基中 培养24小时后，3942h,16.7%2-细胞期，55.6%34-细胞期，27.%68-细胞期。（2）形态学评估：一级 卵裂球等大，均质透明，无碎片。二级 卵裂球不等大，均质，无碎片。三级 卵裂球等大，均质，有少许碎片。二级 卵裂球不等大，均质，无碎片。三级 卵裂球等大，均质，有少许碎片。四级 卵裂球不等大，变黑，颗粒不均。一三级适用于移植。1、移植时机：（1）胚龄 2-细胞期到胚泡均可，现阶段2-8细胞期。（2）子宫内膜处于分泌期（可用药物调节）。2、移植过程：胚胎在微滴培养基中，经导管输入宫底附近。3、移植后监测：测血中 hCG:是判断胚胎优劣和发育好坏的有效指标。测17-

12、雌二醇也是一个良好的指标。用第三者提供的精子、卵子、胚胎或子宫以保证不育的个人或夫妇成为父母。供者可以是已知的，也可以是匿名的。最有争议的，最容易引起纠纷的生殖方式是代理妊娠。1、第一种代理：妊娠代理者接受的胚胎来自于另一对不孕夫妇，与孩子无任何亲缘和血统关系。2、第二种代理：也称传统的代孕。妻子无排卵能力，代孕者用不孕夫妇男性的精子进行人工授精出生的孩子归这对夫妇，必须办理适当的法律手续，正式收养孩子。美国有关法律：按照“出售身体的法律”，签订合同代孕者可获得一定的报酬。为无卵巢或卵巢不能产生有受孕能力的卵子的妇女提供妊娠机会。程序：从供者卵巢获得卵子，受者丈夫提供精子，体外受精，产生胚胎，在移植到受者子宫。这些胚胎移植到受者的子宫后，出生的孩子与受者夫妇无任何生物遗传学关系，相当于胚胎时期过继。冷冻胚胎赠送的成功率明显低于新鲜胚胎。供者、受者经月经同步激素治疗，用受者丈夫的精液人工授精，在供者排卵4-5天用特殊的导管注入灌洗液冲洗宫腔并回收液体取 受精卵，然后再将胚胎移植到受者子宫，这类胚胎赠送，精子来自父方，卵子由第三者提供，受孕者只担当孕育和哺育的责任。1、卵母细胞体外培养2、胚胎分割3、转胞浆治疗4、胚泡期以后体外发生