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1、LOGO 克隆载体 表达载体 定义： 可携带插入的 外源 DNA片段 并可 转入受体细胞中 大量扩增 的 DNA分子。该分子 中含有能够在受体细胞中 自主复制的序列和筛 选标记 ，常用于外源基因的克隆，如噬菌体或 质粒。 通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞 中获取的 DNA作为克隆载体，在载体上插入合 适大小的外源 DNA片段，并 注意不能破坏载体 的自我复制性质 。将重组后的载体引入到宿主 细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。 克隆载体 克隆载体必须具备什么条件 ? 具有使外源 DNA片段插入 的限制性酶识 别位点（外源 性 DNA能组入） 能将外源 DNA 导入到受体细 胞并进行自我 复制（能
2、繁殖） 必须具有选择 标记（能筛选 出来） A C B 常用的克隆载体 质粒载体 病毒载体 (噬菌体载体 ) 混合载体（由以上三类中的两种以上相 互组合或与其他基因组 DNA组合而成） 高质量的克隆载体所必须具备的一些特征： 拷贝数不能太低，以保证转化效率 应该有两个以上用来克隆外源 DNA的单一的限制性 内切酶识别位点； 应该有一个或多个易于检出的选择标记基因 1 2 3 专用载体 染色体定位整合载体 启动子探针载体 诱导型表达载体 组织特异性表达载体 反义表达载体 定义： 在克隆载体基本骨架的基础上 增加表达元件 （如启动子、 RBS、终止子 等），使 目的基因能够表达 的载体。 包括 原
3、核表达载体 和 真核表达载体 ， 可以是质粒、噬菌体或病毒等。典型的表 达载体带有能使基因表达的 调控序列 ，并 在适当位置有可插入外源基因的 限制性内 切酶位点 。 表达载体 LOGO 常用细菌质粒进行构建，构建过程中运 用限制性核酸内切酶切割出与目的基因 相合的末端（多为黏性末端，也有平末 端），采用 DNA连接酶连接，导入生物 体实现表达。标记基因可帮助识别质粒 并检测是否成功整合到染色体 DNA中。 表达载体四部分：目的基因、启动子、终止子、标 记基因 表达载体必须具备的条件： 1.载体能够 独立的复制 ； 2.应具有灵活的克隆位点和方便的 筛选标记 ， 以利于外源基因的克隆、鉴定和筛选； 3.应具有很 强的启动子 ，能被 RNA聚合酶所识 别； 4.应具有 阻遏子 ，使启动子受到控制，只有当 诱导时才能进行转录； 5.应具有很 强的终止子 ，以使 RNA聚合酶集中 力量转录克隆的外源基因，同时使很强的终止 子所产生的 mRNA较为稳定； 6.所产生的 mRNA必须具 有翻译的起始信号 ， 以便转录后能顺利翻译。 LOGO
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