显微鉴定的基本操作技能

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1、第 三 章 显 微 鉴 定 的 基 本 操 作 第一节 显微标本片的制作n一、组织透化剂及应用n（一）定义n（二）作用n（三）常见的透化剂 n二、组织封藏剂及应用n三、显微标本片的制法n四、粉末标本片n五、表面标本片n六、切片制片法n七、解离组织标本片 第二节 显微测量法n一、目镜测微尺n二、载物台测微尺n三、两尺的关系及应用n四、目微尺的标定n五、测量方法 一 、 目 镜 测 微 尺 放 在 目 镜 筒 内 的 一 种 标 尺 ， 为 一 个直 径 1820mm的 圆 形 玻 璃 片 ， 中 央有 相 互 垂 直 的 两 条 线 ， 其 上 刻 有 精确 的 刻 度 ， 常 为 50格 或

2、100格 ， 如 图（ a） n二 、 载 物 台 测 微 尺 n 在 特 制 的 载 玻 片 中 央 粘 贴 一 刻 有精 细 尺 度 的 圆 形 玻 片 ， 通 常 将 长 1mm（ 或 2mm） 精 确 等 分 成 10（ 或 20）大 格 ， 100（ 或 200） 小 格 。 每 小 格长 为 0.01mm即 10 m， 用 以 标 定 目镜 测 微 尺 ， 如 图 （ b） 三 、 两 尺 的 关 系 及 应 用 台 微 尺 是 标 定 目 微 尺 的 ， 不 能 直 接 用 来 测 量 显微 镜 下 物 体 。 其 每 小 格 10 m， 是 定 值 。 目 微尺 是 测 量 尺

3、 。 每 一 格 的 长 度 是 变 值 ， 是 随 目 镜和 物 镜 的 倍 数 变 化 而 改 变 的 ， 只 有 在 放 大 倍 数固 定 之 后 才 能 比 量 出 目 微 尺 每 一 格 的 相 当 长 度因 此 ， 必 须 借 助 于 台 微 尺 才 能 比 量 出 目 微 尺 每格 的 相 当 长 度 。 标 定 好 的 目 微 尺 才 是 在 标 定 的倍 数 下 测 量 物 体 的 尺 子 。 四 、 目 微 尺 的 标 定 用 以 确 定 使 用 同 一 显 微 镜 及 特 定 倍 数 的 物 镜 、 目 镜 和 镜 筒 长度 时 ， 目 微 尺 上 每 一 格 所 代 表

4、 的 长 度 。 1.将 台 微 尺 放 置 在 载 物 台 上 、 将 目 微 尺 （ 正 面 向 上 ） 放 入目 镜 镜 筒 内 2.低 倍 物 镜 下 ， 将 台 微 尺 刻 度 移 至 视 野 中 央 3.旋 转 目 镜 ， 使 两 尺 平 行 。 4.移 动 台 微 尺 ， 使 目 微 尺 零 端 与 台 微 尺 的 某 刻 度 线 相 重 合 5.再 找 两 尺 的 第 二 条 重 合 刻 度 线 ， 数 二 条 重 合 线 间 两 尺 的小 格 数 ， 记 录 。 如 图 （ c）6.计 算 出 目 微 尺 每 一 格 在 该 物 镜 条 件 下 相 当 的 长 度（ m） 。

5、 7.计 算 公 式 ： 标 定 值 =两 重 合 线 间 台 微 尺 小 格 数 X10 m/两重 合 线 间 目 微 尺 小 格 数 8.高 倍 物 镜 下 标 定 （ 进 入 高 倍 物 镜 只 调 细 调 ） 当 测 定 时 要 用 不 同 的 放 大 倍 数 时 ， 应 分 别 标 定 。 五 、 测 量 方 法 1.将 需 测 量 的 目 的 物 显 微 制 片 置 显 微 镜 载 物 台 上 2.旋 转 目 镜 ， 使 目 微 尺 与 测 量 目 的 物 平 行 ； 数 小 格 数 ， 记 录 。 3.计 算 实 际 长 度 （ m） =测 得 小 格 数 X标 定 值 通 常

6、是 在 高 倍 镜 下 测 量 ， 但 欲 测 量 较 长 的 目 的 物 ， 如 纤 维 、导 管 、 非 腺 毛 等 的 长 度 时 ， 需 在 低 倍 镜 下 测 量 。 记 录 最 大 值 与最 小 值 （ m） ， 允 许 有 少 量 数 值 略 高 或 略 低 于 规 定 。 例 ： 目 镜 为 10*， 物 镜 为 40*时 ， 测 得 淀 粉 粒 直 径 占 目 微 尺 9小 格 ， 则 该 淀 粉 粒 直 径 为 3.8m*9=34.2m 第三节 显微绘图法一、平描二、纤维描绘器描绘 No Image No Image 1、 木 栓 层 2、 石 细 胞 3、 皮 层 4、

7、中 柱 鞘 纤 维 5、 韧 皮 部 6、 形 成 层 7、 木 质 部 8、 射 线 9、 髓 部 10、 髓 部 石 细 胞味连雅连 黄 连 （ 味 连 ） 粉 末 图 黄 柏 （ 关 黄 柏 ） 粉 末 图 No Image No Image 扫 描 电 镜 图 1.花粉粒2.草酸钙簇晶3.种脐4.气孔5.花丝非腺毛6.导管 第四节 常用显微化学分析一、细胞壁性质的鉴别二、细胞内含物性质的鉴别 人 参 显 微 图 1-4-4 八 珍 丸 1. 党 参 (a.乳 汁 管 b.木 栓 石 细 胞 ) 2. 白 术 (草 酸 钙 针 晶 ) 3. 茯 苓 (a.多 糖 团 块 b.菌 丝 )

8、4.甘 草 （ a. 木 栓 细 胞 b.晶 鞘 纤 维 ） 5.当 归 （ 纺 锤 形 韧 皮 薄 壁 细 胞 ， 示 斜向 交 错 网 状 纹 理 ） 6.白 芍 （ 草 酸 钙 簇 晶 ） 7.川 芎 （ 草 酸 钙 圆 簇 状 结 晶 ） 8. 熟地 （ 薄 壁 细 胞 ， 示 核 状 物 ） 典 型 的 植 物 细 胞 的 构 造 图 1.细 胞 壁2.叶 绿 体3.晶 体4.细 胞 质5.液 泡6.线 粒 体7.纹 孔8.细 胞 核9.核 仁10.核 质11.细 胞 间 隙 细 胞 核质 体 ： 叶 绿 体 、 有 色 体 、 白 色 体线 粒 体高 尔 基 体核 糖 体溶 酶 体

9、贮 藏 的 营 养 物 质 ： 淀 粉 、 蛋 白 质 、 脂 肪和 脂 肪 油液 泡 ： 细 胞 液 及 其 内 含 物细 胞 器细 胞 质后 含 物生 理 活 性 物 质 ： 酶 、 维 生 素 、 植 物 激 素 、 杀 菌 剂 等原 生 质 体细 胞 后 含 物 和生 理 活 性 物 质细 胞 壁典型的植物细胞 一 、 细 胞 壁 性 质 的 鉴 别1.木 质 化 细 胞 壁 间 苯 三 酚 +浓 盐 酸 红 色 或 紫 红 色 。 例 ： 导 管 、 木 纤 维 、 石 细 胞 。 甘 草 的 导 管 和 纤 维 肉 桂 的 纤 维 和 石 细 胞 2.木 栓 化 或 角 质 化 苏

10、 丹 试 液 桔 红 色 。 例 ： 蓖 麻 的 种 子 、 甘 蔗 的 茎 皮 。 女贞叶表皮角质 化 3.粘 液 质 化 ：钌 红 试 剂 红 色 ； 玫 红 酸 钠 醇 试 剂 玫 瑰 红 色 。 例 ： 车 前 子 、 亚 麻 子 的 表 皮 细 胞 中 。4.矿 质 化 硅 质 能 溶 于 氟 化 氢 ， 但 不 溶于 醋 酸 或 浓 硫 酸 （ 区 别 于 碳 酸 钙 和 草酸 钙 ） 。 例 ： 禾 本 科 植 物 的 茎 和 叶 ， 木 贼 茎 和 硅 藻 的 细 胞 壁 内 含有 大 量 硅 质 。 二、细胞内含物性质的鉴别 草 酸 钙 结 晶 体 、 碳 酸 钙 钟 乳体

11、、 淀 粉 粒 、 菊 糖 、 油 脂 及 类脂 化 合 物 、 糊 粉 粒 、 粘 液 皆 是一 些 显 微 镜 下 常 见 的 一 些 有 形而 有 鉴 别 意 义 的 植 物 细 胞 内 含物 。 淀 粉 粒 的 形 状 、 大 小 、 脐 点 与层 纹 是 否 显 著 ， 以 及 彼 此 间 的 复 合状 况 ， 皆 随 种 属 而 有 所 不 同 。 常 见的 有 单 粒 淀 粉 、 半 复 粒 淀 粉 、 复 粒淀 粉 。 1. 淀 粉 粒 鉴 别 ： 含 有 直 链 淀 粉 的 淀 粉 粒 遇 稀 碘 液 显 蓝 紫 色 ， 支 链 淀 粉 则 显 紫 红 色 。图 淀 粉 粒

12、1， 2， 3为 山 药 的 淀 粉 粒 ， 三 角 状 卵 圆 形 或 矩 圆 形 ， 脐 点 短 缝 状和 人 字 形 。4， 5为 绞 股 蓝 的 淀 粉 粒 ， 4单 粒 不 规 则 椭 圆 形 ， 5为 复 粒 。 2. 菊 糖 可 把 观 察 材 料 放 在 乙醇 中 浸 渍 数 天 ， 使 之 结晶 析 出 ， 然 后 以 甘 油 装片 进 行 显 微 观 察 。 这 样 ，就 很 易 看 到 球 状 、 半 球状 或 扇 状 或 由 数 个 辐 射瓣 组 成 的 菊 糖 结 晶 。 3.脂 肪 油 、 挥 发 油 、 树 脂 加 苏 丹 溶 液 或 紫草 试 液 ， 均 显 橘

13、 红色 、 红 色 或 紫 红 色 。 在 大 多 数 情 况 下 ， 多 呈 细 小 结 晶 或无 定 形 粒 状 ， 并 密 集 充 斥 于 细 胞 中 （ 如 ：玉 蜀 黍 种 子 中 的 糊 粉 粒 ） 。 由 于 蛋 白 质遇 碘 呈 黄 色 ， 如 加 入 碘 甘 油 溶 液 ， 不 但糊 粉 粒 各 部 更 加 清 晰 ， 同 时 可 进 一 步 确证 糊 粉 粒 为 蛋 白 质 组 成 。 糊 粉 粒 和 淀 粉 粒 常 在 同 一 细 胞 中 互相 混 杂 。 4. 糊 粉 粒 .豌 豆 的 子 叶 细 胞 1. 细 胞 壁 2.糊 粉 粒 3. 淀 粉 粒 4.细 胞 间

14、隙 .小 麦 颍 果 外 部 的 构 造 1.果 皮 2.种 皮 3.糊 粉 层 4.胚 乳 细 胞 .篦 麻 的 胚 乳 细 胞 1.糊 粉 粒 2.蛋 白 质 晶 体 3.基 质 4.球 晶 体 粘液（mucilage）多含于单子叶植物及锦葵目等类植物地下部份的一些细胞中。常为一折光性较强的粘稠状液体，无特定形状。它也是植物体糖类的一种积贮形式。常与草酸钙针晶束同时并存。5.粘 液 6. 草 酸 钙 结 晶 体 常 见 的 草 酸 钙 晶 体 有 簇 晶 、 砂 晶 、块 晶 、 棱 晶 、 针 晶 以 及 由 针 状 结 晶集 合 而 成 的 针 晶 束 。 1.簇 晶 （ 大 黄 根

15、茎 ） 2.针 晶 （ 半 夏 块 茎 ） 3.方 晶 （ 甘 草 ） 4.砂 晶 （ 颠 茄 根 ） 5.棱 形 及 菱 形 晶 体 （ 买 麻 藤 ） 碳 酸 钙 钟 乳 体 碳 酸 钙 沉 积 物 多 存 在 于 植 物 表 皮 细 胞 或毛 茸 中 。 常 呈 钟 乳 状 或 其 它 不 规 则 形 状 （ 如 ： 穿 心 莲 叶 片细 胞 中 的 碳 酸 钙 钟 乳 体 ） 。7.碳 酸 钙 钟 乳 体 无 花 果 叶 内 的 钟 乳 体 .切 面 观1.表 皮 及 皮 下2.栅 栏 组 织3.钟 乳 体 和 细 胞 腔 .表 面 观 第五节 常见显微试剂的配置及其用途n22种试剂