《蛋白质的颜色反应》PPT课件

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1、1 了 解 构 成 蛋 白 质 的 基 本 结 构 单 位 及 主 要 连 接 方 式 ；2 了 解 蛋 白 质 和 某 些 氨 基 酸 的 呈 色 反 应 原 理 ； 3 学 习 几 种 常 用 的 鉴 定 蛋 白 质 和 氨 基 酸 的 方 法 。一、实验目的：实验二、蛋白质的颜色反应 1 原 理 ： 尿 素 加 热 至 180 左 右 ， 生 成 双 缩 脲 并 放 出 一 分 氨 。 双 缩 脲在 碱 性 环 境 中 能 与 Cu2+结 合 生 成 紫 红 色 化 合 物 ， 此 反 应 称 为 双 缩脲 反 应 。 蛋 白 质 分 子 中 有 肽 键 ， 其 结 构 与 双 缩 脲

2、相 似 ， 也 能 发 生此 反 应 。 可 用 于 蛋 白 质 的 定 性 或 定 量 测 定 。 反 应 式 如 下 ：（ 一 ） 双 缩 脲 反 应二、实验内容实验二、蛋白质的颜色反应和沉淀反应二、实验内容：实验二、蛋白质的颜色反应 反 应 式 如 下 ：C NH 2 NH 2OC NH 2NH 2O C NH 2NHC NH 2OO + NH 2180OC C NH2NH2OC NH2NH2O C NHNHCO HNHCu N CO NH2CHNH OO H 2Cu2+OH- 双 缩 脲 反 应 不 仅 为 含 有 两 个 以 上 肽 键 的 物 质 所 有 。 含有 一 个 肽 键

3、和 一 个 CS NH2， CH2 NH2， CRHNH2， CH2 NH2 CHNH2 CH2OH或 CHOHCH2NH2等 基 团 NH2 NH2 以 及 乙 二 酰 二 胺 （ O C C O） 等 物 质 也 有 此 反 应 。 NH3也 干 扰 此 反 应 ， 因 为 NH3与 Cu2+可 生 成 暗 蓝 色 的 络 离子 Cu（ NH3） 42+。 因 此 ， 一 切 蛋 白 质 或 二 肽 以 上 的 多 肽 都有 双 缩 脲 反 应 ， 但 有 双 缩 脲 反 应 的 物 质 不 一 定 都 是 蛋 白 质或 多 肽 。 2 试 剂 ： 尿 素 10%氢 氧 化 钠 溶 液 1

4、%硫 酸 铜 溶 液 2%卵 清 蛋 白 溶 液（ 一 ） 双 缩 脲 反 应二、实验内容：实验二、蛋白质的颜色反应 取 少 量 尿 素 结 晶 ， 放 在 干 燥 试 管 中 。 用 微 火 加 热 使 尿 素 熔 化 。 熔 化 的 尿素 开 始 硬 化 时 ， 停 止 加 热 ， 尿 素 放 出 氨 ， 形 成 双 缩 脲 。 冷 后 ， 加 10%氢氧 化 钠 溶 液 约 1ml， 振 荡 混 匀 ， 再 加 1%硫 酸 铜 溶 液 1滴 ， 再 振 荡 。 观 察 出现 的 粉 红 颜 色 。 要 避 免 添 加 过 量 硫 酸 铜 ， 否 则 ， 生 成 的 蓝 色 氢 氧 化 铜

5、 能掩 盖 粉 红 色 。 向 另 一 试 管 加 卵 清 蛋 白 溶 液 约 1ml和 10%氢 氧 化 钠 溶 液 约 2ml， 摇 匀 ， 再加 1%硫 酸 铜 溶 液 2滴 ， 随 加 随 摇 。 观 察 紫 玫 瑰 色 的 出 现 。（ 一 ） 双 缩 脲 反 应二、实验内容：实验二、蛋白质的颜色反应3 操 作 ： 1 原 理 ： 除 脯 氨 酸 、 羟 脯 氨 酸 和 茚 三 酮 反 应 产 生 黄 色 物 质 外 ， 所 有 氨 基 酸及 一 切 蛋 白 质 都 能 和 茚 三 酮 反 应 生 成 蓝 紫 色 物 质 。 丙 氨 酸 、 氨 和 许 多 一 级 胺 都 呈 阳 性

6、 反 应 。 尿 素 、 马 尿 酸 、 二 酮 吡唪 和 肽 键 上 的 亚 氨 基 不 呈 现 此 反 应 。 因 此 ， 虽 然 蛋 白 质 和 氨 基 酸 均有 茚 三 酮 反 应 ， 但 能 与 茚 三 酮 呈 阳 性 反 应 的 不 一 定 就 是 蛋 白 质 或 氨基 酸 。 在 定 性 、 定 量 测 定 中 ， 应 严 防 干 扰 物 存 在 。 该 反 应 十 分 灵 敏 ， 1 1 500 000浓 度 的 氨 基 酸 水 溶 液 即 能 给 出 反 应 ，是 一 种 常 用 的 氨 基 酸 定 量 测 定 方 法 。 茚 三 酮 反 应 分 为 两 步 ， 第 一 步

7、是 氨 基 酸 被 氧 化 形 成 CO2、 NH3和 醛 ，水 合 茚 三 酮 被 还 原 成 还 原 型 茚 三 酮 ； 第 二 步 是 所 形 成 的 还 原 型 茚 三酮 同 另 一 个 水 合 茚 三 酮 分 子 和 氨 缩 合 生 成 有 色 物 质 。（ 二 ） 茚 三 酮 反 应二、实验内容：实验二、蛋白质的颜色反应 反 应 机 理 ： 此 反 应 的适 宜 pH为 57，同 一 浓 度 的 蛋 白质 或 氨 基 酸 在 不同 pH条 件 下 的颜 色 深 浅 不 同 ，酸 度 过 大 时 甚 至不 显 色 。 蛋 白 质 溶 液2%卵 清 蛋 白 或 新 鲜 鸡 蛋 清 溶

8、液 （ 蛋 清 水 =1 9） 0.5%甘 氨 酸 溶 液 0.1%茚 三 酮 水 溶 液 0.1%茚 三 酮 -乙 醇 溶 液2 试 剂 ：（ 二 ） 茚 三 酮 反 应二、实验内容：实验二、蛋白质的颜色反应 取 2支 试 管 分 别 加 入 蛋 白 质 溶 液 和 甘 氨 酸 溶 液 1ml， 再 各 加 0.5ml0.1%茚 三 酮 水 溶 液 ， 混 匀 ， 在 沸 水 浴 中 加 热 12分 钟 ， 观 察 颜 色 由 粉 色 变紫 红 色 再 变 蓝 。 在 一 小 块 滤 纸 上 滴 一 滴 0.5%甘 氨 酸 溶 液 ， 风 干 后 ， 再 在 原 处 滴 一 滴0.1%茚 三

9、 酮 乙 醇 溶 液 ， 在 微 火 旁 烘 干 显 色 ， 观 察 紫 红 色 斑 点 的 出 现 。3 操 作 ：（ 二 ） 茚 三 酮 反 应二、实验内容：实验二、蛋白质的颜色反应 含 有 苯 环 结 构 的 氨 基 酸 ， 如 酪 氨 酸 和 色 氨 酸 ， 遇 硝 酸 后 ， 可 被 硝 化成 黄 色 物 质 ， 该 化 合 物 在 碱 性 溶 液 中 进 一 步 形 成 橙 黄 色 的 硝 醌 酸 钠 。 反 应 式 如 下 ：1 原 理 ：（ 三 ） 黄 色 反 应二、实验内容实验二、蛋白质的颜色反应和沉淀反应 原 理 ：（ 三 ） 黄 色 反 应二、实验内容：实验二、蛋白质的颜

10、色反应 O NO O Na HO + HNO3 HO NO2 NaOH硝 基 酚 (黄 色 ) 邻 硝 醌 酸 钠 (橙 黄 色 ) 多 数 蛋 白 质 分 子 含 有 带 苯 环 的 氨 基 酸 ， 所 以 有 黄 色 反 应 ， 苯 丙 氨 酸不 易 硝 化 ， 需 加 入 少 量 浓 硫 酸 才 有 黄 色 反 应 。反 应 式 如 下 ： 鸡 蛋 清 溶 液 将 新 鲜 鸡 蛋 的 蛋 清与 水 按 1 20混 匀 ， 然 后 用 6层纱 布 过 滤 。 头 发 指 甲 0.5%苯 酚 溶 液 浓 硝 酸 溶 液 0.3%色 氨 酸 0.3%酪 氨 酸 溶 液 10%氢 氧 化 钠2

11、试 剂 ：（ 三 ） 黄 色 反 应二、实验内容：实验二、蛋白质的颜色反应 管 号 1 2 3 4 5 6材 料 （ 滴 ） 鸡 蛋 清 溶 液4 指 甲少 许 头 发少 许 0.5%苯 酚4 0.3%色 氨 酸4 0.3%酪 氨 酸4浓 硝 酸 （ 滴 ） 2 40 40 4 4 4现 象3 操 作 ：（ 三 ） 黄 色 反 应二、实验内容实验二、蛋白质的颜色反应和沉淀反应 向 6个 试 管 中 分 别 按 上 表 加 入 试 剂 ， 观 察 各 管 出 现 的 现 象 ， 有 的试 管 反 应 慢 可 略 放 置 或 用 微 火 加 热 。 待 各 管 出 现 黄 色 后 ， 于 室温 下

12、 逐 滴 加 入 10%氢 氧 化 钠 溶 液 至 碱 性 ， 观 察 颜 色 变 化 。 操 作 ：（ 三 ） 黄 色 反 应二、实验内容实验二、蛋白质的颜色反应和沉淀反应管 号材 料 （ 滴 ） 鸡 蛋 清 溶 液 指 甲少 许 头 发少 许 苯 酚 色 氨 酸 酪 氨 酸浓 硝 酸 （ 滴 ）现 象向 个 试 管 中 分 别 按 上 表 加 入 试 剂 ， 观 察 各 管 出 现 的 现 象 ， 有 的试 管 反 应 慢 可 略 放 置 或 用 微 火 加 热 。 待 各 管 出 现 黄 色 后 ， 于 室温 下 逐 滴 加 入 氢 氧 化 钠 溶 液 至 碱 性 ， 观 察 颜 色 变 化 。 操 作 ：（ 三 ） 黄 色 反 应二、实验内容：实验二、蛋白质的颜色反应 三、实验报告：列表记录实验现象并加以分析。实验二、蛋白质的颜色反应