免疫学检测技术及其应用ppt课件

免疫学检测技术及其运用免疫学检测技术及其运用抗原-抗体反响：antigen-antibody reaction。是指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合的反响。血清学反响：serological reaction。指体外的抗原-抗体反响。特异性：亲和力、亲合力、交叉反响可逆性可见性阶段性电解质酸碱度温度中和反响凝集反响沉淀反响补体参与的反响免疫标志技术酶免疫测定法免疫荧光法 放射免疫测定法1.直接凝集反响：直接凝集反响：颗粒性抗原颗粒性抗原+相应抗体相应抗体凝集凝集 玻片法：细菌及玻片法：细菌及ABO血型鉴定血型鉴定 试管法：肥达氏反响试管法：肥达氏反响 抗原吸附于载体+相应抗体凝集 常用载体：乳胶颗粒、羊红细胞将可溶性抗原与相应抗体预先作用，再参与相应的致敏颗粒。用途：检测单价抗体直接Coombs实验：检测结合在Rh+红细胞上的单价抗体；间接Coombs实验：检测游离的Rh单价抗体。可溶性抗原可溶性抗原+相应抗体相应抗体沉淀沉淀单向琼脂分散实验：测单向琼脂分散实验：测Ig、补体含量。、补体含量。双向琼脂分散实验：双向琼脂分散实验：火箭电泳：火箭电泳：Ag 置置“极极对流免疫电泳：对流免疫电泳：Ag置置“极，极，Ab置置“极极免疫电泳：免疫电泳：免疫比浊法：免疫比浊法：环状沉淀絮状沉淀原理：将双扩与电泳技术结合在一同，测定可溶 性抗原。阴极 阳极 -+电泳 电渗 AgAb将单向免疫分散与电泳技术结合，可快速测定标本中可溶性抗原的含量。先电泳分别标本中抗原成分，再沿电泳方向挖抗体槽，加抗体，进展双扩。用于血清蛋白及抗体成分的分析及抗原/抗体提取物纯化鉴定。该技术是利用抗原抗体复合物在液相中构成浊度来丈量抗原含量的方法。方法：透射光比浊法散射光比浊法免疫乳胶比浊法速率抑制免疫比浊法此类反响是利用抗体与红细胞外表相应抗原结合后，使反响体系中补体激活导致红细胞破坏，出现溶血景象建立的。补体结合实验：待测抗原待测抗体待测的反响系统 补体 抗体红细胞指示系统溶血空斑实验HLA血清学分型法：即补体依赖的微量细胞毒实验抗原抗体反响与标志技术结合，定位、定量、定性测定。标志物：荧光素、酶、放射性核素、化学发光物质、胶体金等。类型：免疫荧光技术、免疫酶技术、同位素标志技术等。是用酶标志Ab进展的抗原抗体反响。常用的酶：辣根过氧化酶、碱性磷酸酶常用底物：邻苯二胺OPD常用方法：酶联免疫吸附实验(ELISA)免疫组化法夹心法测抗原 间接法测抗体用于效应细胞分泌单一细胞因子的测定。生物素-亲和素系统BAS是终身物放大系统，利用亲和素-生物素-酶的衔接关系，追踪生物素标志的抗原或抗体，经过酶催化底物显色，检测相应的抗体或抗原，灵敏度高。Immunohistochemisty Technique是用标志的知抗体与组织或细胞外表相应抗原结合发生反响，对抗原进展定位、定性或定量检测的技术。直接法直接法：用知荧光标志的抗体检测未知抗原。：用知荧光标志的抗体检测未知抗原。间接法：间接法：用荧光标志的抗抗体，检测未知的抗原用荧光标志的抗抗体，检测未知的抗原/抗体。抗体。补体法：补体法：将放射性核素分析的高度灵敏性与抗原抗体反响的特异性结合起来的技术，测定激素和药物。常用I125和I131快速，敏感pg)，但污染环境，有一定的危害性。Immunological colloidal gold signature是用胶体金颗粒标志抗体或抗原，用以检测未知抗原或抗体的技术，可用于多种液相免疫测定和固相免疫分析。免疫层析法：immunochromatography首先将知特异性抗体固定于硝酸纤维素膜上某一区带；测试时将上述硝酸纤维素膜一端浸入待检样品中尿液或血清，经过毛细管作用样品将沿膜向前挪动；当样品进入特异性抗体固定区带时，假设样品中含有相应抗原即可与该区带抗体特异性结合，进而经过免疫胶体金所呈现的紫红色条带断定实验结果。首先将胶体金致敏抗体胶体金标志的鼠抗人绒毛膜促性腺激素HCG特异性抗体，松弛附着在玻璃纤维上，再将上述玻璃纤维固定在硝酸纤维素膜G处；将鼠抗人HCG特异性抗体固定在硝酸纤维素膜T处；将兔抗鼠IgG抗体二抗固定在硝酸纤维素膜C处；硝酸纤维素膜最下方A处附吸水纸是滴加待检或接触尿液部位，在硝酸纤维素膜最上方B处有吸水纸，有助于构成毛细管层析作用。将待检尿液滴加在检测试纸A区，或将检测试纸A区插入待检尿液中，经过层析作用待检尿液向B区挪动，流经G区时将胶体金标志HCG抗体从玻璃纤维上复溶，假设待检尿液中含有HCG，即构成胶体金标志抗体-HCG复合物；上述复合物迁移至T区时，可被固相HCG抗体识别结合，构成固相HCG抗体-HCG-胶体金标志抗体复合物，胶体金聚集呈现阳性紫红色检测线；剩余胶体金标志抗体迁移到C区与兔抗鼠IgG抗体二抗结合，胶体金聚集呈现紫红色质控线。测试纸条出现两条紫红色反响线：为早孕阳性；测试纸条检测线颜色弱于质控线：为早孕弱阳性；测试纸条仅在质控线呈现紫红色条带：为早孕阴性；测试纸条质控线处无紫色条带出现：为实验无效。Chemiluminescence immunoassay标志物：鲁米诺等。是将化学发光分析和免疫反响相结合而建立的一种新的免疫分析技术。先将抗原经SDS-PAGE电泳分开，再将分开的蛋白质转印到醋酸纤维膜上，然后放入含有抗体的溶液中，洗去未结合抗体，再加标志的二抗，经过显色或发光显示结果。葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法:Before centrifugeAfter centrifugeFig.1Fig.21.玻璃粘附法2.尼龙毛分别法3.E花结分别法T细胞羊红细胞 immune magnetic bead,IMB 将知抗细胞外表标志的抗体交联在磁性微珠上，与细胞悬液作用后置于磁场中，借磁力的作用将磁珠结合的细胞分开。细胞用荧光素标志的抗体染色，经过流式细胞仪检测。检测T细胞总数:抗CD3 检测CD4+/CD8+T细胞:抗CD4/CD8检测B细胞:抗SmIg一一T细胞功能测定：细胞功能测定：1.T细胞增殖实验：淋巴细胞转化实验细胞增殖实验：淋巴细胞转化实验 察看在有丝分裂原察看在有丝分裂原PHA、Con A或特异性或特异性抗原刺激下抗原刺激下T细胞的增殖反响，测定细胞免疫功能。细胞的增殖反响，测定细胞免疫功能。用用3H-TdR法、法、MTT法测法测T细胞增殖。细胞增殖。2.迟发型超敏反响皮肤实验：例如迟发型超敏反响皮肤实验：例如OT实验实验 1.血清免疫球蛋白含量测定2.抗体构成细胞测定实验3.酶联免疫斑点实验ELISPOT溶血空斑构成细胞实验溶血空斑构成细胞实验 Tc和和NK对其靶细胞有直接的细胞毒作用。对其靶细胞有直接的细胞毒作用。方法：方法：51Cr(铬铬)释放法释放法 乳酸脱氢酶释放法乳酸脱氢酶释放法 凋亡细胞检测法凋亡细胞检测法中性粒细胞趋化功能的测定中性粒细胞吞噬功能的测定巨噬细胞吞噬功能的测定巨噬细胞吞噬鸡红细胞巨噬细胞吞噬鸡红细胞常见的凝集反响、沉淀反响及其用途。ELISA夹心法和间接法的步骤溶血空斑实验的方法和用途。