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1、,洁净车间员工 卫生及微生物知识培训,一、微生物的特点,分布范围广 生长速度快 生存能力强,我们所生活的环境中，到处都存在着大量的微生物。在一般空气中，微生物达8003500个/m3，在土壤中达1500108个/g，在严重污染的水中可达107个/ml。（饮用水要求细菌总数100个/ml，大肠杆菌3个/ml。经水塔或贮水池贮存后，短期内可繁殖至105106个/ml。）人的头皮上有140万个/cm2，两手上约有440万个，1g指甲污垢有38亿个，1g粪便可达101000亿个。可以说微生物是无处不在，无处不有。许多以前被人们认为是极端（高温、高压、强酸、强碱、低温等）甚至是致死的环境，现在已发现生活
2、着各种类型的微生物（称为极端微生物）。事实说明，微生物有特别顽强的生存、繁殖和变异能力来适应环境。,二、微生物特点,种类多、分布广 微生物在地球上几乎无处不有，无孔不入，人的皮肤上，口腔，肠道里都有许多微生物。微生物聚集最多的地方是土壤，土壤是各种微生物生长繁殖的大本营，约占微生物总量的70-90%，任意取一把土或一粒土，就是一个微生物世界，不论数量或种类均最多。在肥沃的土壤中，每克土含有20亿个微生物，即使是贫瘠的土壤，每克土中也含有35亿个微生物。空气里悬浮着无数细小的尘埃和水滴，它们是微生物在空气中的藏身之地。哪里尘埃多，哪里的微生物就多。 迄今为止，我们知道的微生物约有10万种，目前已
3、知的种类只占地球上实际存在的微生物总数的20%，人类生产和生活中仅开发利用了已发现微生物种数的1%。,个体小、面积大 生物的个体极其微小，必须借助显微镜放大几倍、几百倍、上千倍，乃至数万倍才能看清。杆菌的宽度是0.5微米，因此80个杆菌“肩并肩”地排列成横队，也只有一根头发丝的宽度。杆菌的长度约2微米，故1500个杆菌头尾衔接起来仅有一颗芝麻长。 物体的表面积和体积之比称为比表面积。大肠杆菌的比表面积是人的30万倍。,吸收多、转化快 微生物有惊人的繁殖速度，大多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代，如细菌一般每2030分钟既可分裂一次； 微生物的食谱非常广泛，凡是动植物能利用的营养，微生物都能利用
4、，大量的动植物不能利用的物质，甚至剧毒的物质，微生物照样可以视为美味佳肴。如大肠杆菌在合适条件下，每小时可以消耗相当于自身重量2000倍的糖，而人体则需要40年之久。,适应强、易变异 多数细菌能耐0196的低温；在海洋深处的某些硫细菌可在250300的高温条件下正常生长；一些嗜盐细菌甚至能在饱和盐水中正常生活；产芽孢细菌和真菌孢子在干燥条件下能保藏几十年、几百年。由于微生物繁殖快，也可在短时间内产生大量变异的后代。正是由于这个特性，人们才能够按照自己的要求不断改良在生产上应用的微生物，如青霉素生产菌的发酵水平由每毫升20单位上升到近10万单位，利用变异和育种得到如此大幅度的产量提高。,三、微生
5、物的类群和形态结构,微生物按其结构、化学组成及生活习性等分为三大类： 原核细胞型：细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体等 真核细胞型：真菌 非细胞型：病毒 噬菌体,芽孢杆菌 （细菌）,淡水中的螺旋菌 spirochetes .,蜡样芽孢杆菌,蜡样芽孢杆菌,蜡样芽孢杆菌,蜡样芽孢杆菌（细菌）,噬菌体,SARS病毒是一类新发现的冠状病毒,禽流感病毒,爱滋病毒,粘质沙雷氏菌的菌落特征,沙门氏菌的菌落特征,铜绿假单孢菌的菌落特征,弗氏志贺氏菌的菌落特征,粘质沙雷氏菌的菌落特征,放线菌的菌落特征 A：诺尔斯氏链霉菌； B：皮疽诺卡氏菌； C：酒红指孢囊菌； D：游动放线菌； E：小单胞菌；
6、F：皱双孢马杜拉放线菌,产抗菌素的放线菌的菌落特征A：卡特利链霉菌； B：弗氏链霉菌； C：吸水链霉菌金泪亚种；D：卡那霉素链霉菌；E：除虫链霉菌； F：生磺酸链霉菌,各种曲霉的菌落,各种病原真菌的菌落,青霉的菌落,青霉的菌落,各种酵母菌的菌落,啤酒酵母的菌落,红酵母的菌落,四、微生物的营养,水分：水占细胞浆的70%90%，是细胞的重要组成成分。较普遍的观点认为，只有在含水的环境中微生物才能存活。但也有人发现在无水碳氢化合物中微生物可长期存活。 碳源：碳源是构成细胞的重要物质。有些微生物的碳源必须来自有机碳化合物如糖、蛋白质、脂肪、有机酸等（同时利用其化学能），属异养型；有些微生物不需有机碳化
7、合物，以CO2为碳源，属自养型（分为光能自养型和化能自养型）。,氮源：氮是组成蛋白质和核酸的重要元素。 无机盐类：细菌所需无机盐包括磷、硫、镁、铁、钾、钠、钙、氯、锰、锌、钴、铜等。其中磷、硫、镁、钾、钠、铁需要量较多，其他只需微量。 生长因子：生长因子是某些微生物生长发育所必需，而其自身又不能合成的一类营养物质。包括维生素、嘌呤和嘧啶。,五、微生物生长的影响因素,1、营养物 2、PH值 3、温度 4、氧气 5、渗透压 6、表面张力,六、消毒与灭菌,消毒与灭菌是微生物实验技术中最基本的操作，从事药品生产和检验的人员都应当了解消毒与灭菌的方法及其意义，严格遵守操作规程，否则会影响产品质量，危害患
8、者安全。,概念,无菌不存在活的生物（GMP指南）。 “无菌”从定义上来说是一个绝对的概念，但遗憾的是，在科学和技术高度发展的今天，药品的绝对无菌即做不到，也无法加以证实。然而，无菌制剂的安全性要求人们设定无菌的相对标准。FDA、欧洲制药工业界曾将百万分之一微生物污染率作为灭菌产品“无菌”的相对标准，它和蒸汽灭菌后产品中微生物存活的概率为 10-6（即产品的无菌保证值为6），系同一标准的不同表示法。这一标准于1980起收录于USP 中，如今已为世界各国普遍接受和采用。,概念,灭菌使达到无菌状态的方法（GMP指南）。用物理或化学方法杀灭传播媒介上所有的微生物，使其达到无菌（GB）。通常是指杀灭或除
9、去全部活的微生物（包括繁殖体和芽孢）。 消毒用物理或化学方法杀灭或清除传播媒介上的病原微生物，使其达到无害化（GB）。通常是指杀死病原微生物的繁殖体，但不能破坏其芽孢。所以消毒是不彻底的，不能代替灭菌。,概念,无菌制剂不存在活的微生物的制剂（GMP指南）。 非无菌制剂所含活的微生物量符合卫生学标准的制剂（GMP指南）。,常用消毒剂, 70%75%乙醇水溶液； 0.5%洗必泰溶于70%乙醇，再加入2%甘油，用于皮肤、器具等消毒； 异丙醇 75%水溶液，用于皮肤、器具等消毒； 甲醛 37%40%甲醛液89ml，再加入45g高锰酸钾，每m3熏蒸量，密闭1224h，刺激性强； 戊二醛 2%水溶液，用于
10、空气、器具等消毒。广谱、高效、低毒，可杀芽孢和病毒，毒性较轻；,常用消毒剂,新洁尔灭（苯扎溴铵） 0.1%水溶液，用于皮肤、粘膜、器具等消毒，有清洁和消毒双重功效，抗菌谱较窄； 杜灭芬（消毒宁） 0.05%0.1%水溶液，用于皮肤、器具等消毒； 过氧乙酸 a、 0.2%0.5%水溶液；b、新配0.5%水溶液；c 、1g/m3； 用于器具等消毒，抗菌谱广，可用于皮肤消毒杀灭某些病毒；熏蒸，但性质不稳定。 乳酸 a、0.331mol/L；b、 11.5ml/m3熏蒸或与等量苯酚合用熏蒸 喷雾，用于空气消毒，有强杀菌作用；熏蒸，密闭12h以上。 麝香草酚 5%麝香草酚溶于50%乙醇，喷洒墙面、地面，
11、杀霉菌。,干热灭菌,常见的有火焰、烧灼、干烤和红外线灭菌等。 火焰、烧灼：通常用于实验室无菌操作中金属或其它耐火材料制成的器具的灭菌。 干烤和红外线：利用干热空气或热辐射进行灭菌。一般135145需35h，160170需2h以上，170180需1h以上，180200需0.51h。除热原，则需25030min，或20045min，1802h。空气传热慢，穿透力不强，故干热灭菌时间长。干热灭菌时烤箱内装入物品应留有空隙，以利空气流动，否则使箱内温度不均，部分物品灭菌不彻底。,湿热灭菌,通过热蒸汽或沸水使蛋白质变性而杀灭微生物的方法。湿热穿透力强，灭菌效果较干热好。 煮沸或流通蒸汽灭菌：常压下沸水和
12、蒸汽的温度是100，一般处理3060min可杀死细菌繁殖体，但不能完全杀灭芽孢。此法适用于不能高压蒸汽灭菌的物品。 低温间隙灭菌（巴斯德灭菌法）：将物品先用6080加热（或煮沸）1h，然后置2025保存24h（或常温过夜），使其中残存的芽孢萌发成繁殖体，再用以上条件灭菌，如此反复三次。本法适用于不耐高温或高温下易变质的物品，但很费时。,高压蒸汽灭菌（热压灭菌）,超过一个大气压时，水的沸点高于100，反之亦然。高压蒸汽灭菌就是通过加压提高蒸汽温度，灭菌效果最好。它简便、经济、可靠、无毒，是最可靠、应用最广泛的灭菌法。此法适用于耐高温和潮湿的物品。 常用条件为：115.5 、30min； 121.
13、5 、20min； 126.5、 15min。,注意事项,a.必须完全排出灭菌器内的空气。否则会影响灭菌器内温度达到规定的要求。 b. 注意被灭菌物品的温度。灭菌器内温度与被灭菌物品的温度一般是一致的，但在蒸汽输入过快时，后者可能低于前者，所以升温时要有一定的预热时间。另外，降温过快易引起玻璃炸裂。因此，对于一种灭菌产品，应制定一固定的灭菌曲线（像冻干曲线一样）。 c. 定期检查灭菌器内温度的准确性。,化学灭菌,利用化学试剂形成的气体来杀灭微生物的方法。常用的灭菌剂为环氧乙烷（又称氧化乙烯）。环氧乙烷是广谱杀菌剂，能杀灭细菌、芽孢和多种病毒，还能杀死昆虫及虫卵。但由于环氧乙烷易燃易爆且有毒（有
14、致变异性），用于药品方面极有限，多用于医疗器械、塑料制品等灭菌。（不能用于橡胶和乳胶手套，能将其溶解。,滤过除菌,利用细菌不能通过致密孔滤材的原理，除去对热不稳定的药品溶液或液体物质中的细菌的方法。过滤法一般只能除菌，不能除去支原体和病毒。过滤除菌的效果与滤膜的性能、孔径的大小、密度、滤膜的厚度等因素有关。滤过除菌法要求最终过滤的滤膜孔径为0.22m。由于各厂家生产的相同规格的滤膜质量并不一致，为了保证除菌效果，在使用前后应检查滤器的完好性（如压力维持试验或起泡点试验）。一个过滤器的使用时间应根据品种验证后确定，一般不应超过8小时。,辐射灭菌,辐射有两种类型： 一种是电磁波辐射，如紫外线、红外线、微波； 一种是电离辐射，如可引起被照射物电离的X射线、射线等。,
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