化学发光检测试卷教案

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1、第一章 化学发光技术一、 免疫学检测发展阶段免疫学检测主要是利用抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段，由于其可以利用同位素、酶、化学发光物质等对检测信号进行放大和显示,因此常被用于检测蛋白质、激素等微量物质。我国免疫学的检测基本历经了以下几个过程，如图1.1所示。化学发光免疫检测(CLA）酶联免疫检测（ELISA)放射免疫检测（RIA)20世纪 60年代 7年代 90年代 时间图1.免疫学检测发展阶段尽管免疫诊断在临床诊断中占据着非常重要的地位,但是从我国临床免疫诊断现状来看,无论是临床应用方面,还是产业化角度，都处于相对比较落后的状态,亟待改进。下表1.就此做一比较：表1.1 中国免疫诊

2、断现状中国国际（欧美为主)放射免疫法 （RIA）兴起于20世纪7年代,现仍普遍使用于县级以上医院；产品处于衰退期;厂商试剂与仪器共同开发，试剂基本系列化。兴起于20世纪60年代,现已基本退出临床应用；产品生命周期已终结；厂商试剂和仪器共同开发，试剂基本系列化。酶联免疫法 （ELSA).兴起于0世纪0年代,现普遍使用于各级临床机构，为我国临床免疫诊断的基本方法；产品处于成熟期；.厂商试剂与仪器共同开发,试剂尚未系列化。.兴起于2世纪70年代,现仍在临床应用；产品处于衰退期;厂商试剂与仪器共同开发,试剂基本系列化。化学发光免疫法(A).导入于0世纪9年代，现个别较大医院开展个别项目;产品处于导入期

3、或成长期;无厂商开发生产,完全依赖进口。兴起于2世纪0年代,现已被临床普遍使用,成为临床免疫诊断的支柱方法;产品处于成熟期；.厂商试剂与仪器共同开发，仪器自动化程度高,试剂系列化状态好。由以上分析不难看出，化学发光免疫检测是大势所趋;而取代进口,发展我国的化学发光检测事业，正是临床检验界着手发展的方向。由此，我公司自198年立项至今，致利于化学发光检测方案设计,自行开发了具有国内领先水平的化学发光底物，与国外知名检测仪器生产商联合开发了化学发光全自动、半自动检测仪，并自行设计开发了化学发光管理软件,而今形成了仪器、试剂、软件全面配套，为我国的临床检验界提供了一套完善的解决方案。二、 化学发光免

4、疫分析技术【概述】本世纪0年代中期Arakwe首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应分析超微量物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。目前,这一技术已从实验室的稀有技术过渡到临床医学的常规检测手段。化学发光免疫分析(hmiluinescence mmunossa，CLA)是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理与放射免疫(RA）和酶免疫(EIA)相似，不同这处是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物，并藉助其自身的发光强度直接进行测定。化学发光免疫分析既具有放射免疫的高灵敏度,又具有酶联免疫的操作简便、快速

5、的特点，易于标准化操作。且测试中不使用有害的试剂,试剂保持期长,应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。【原理】在化学发光免疫分析中包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。免疫反应系统，其基本原理同酶联免疫技术(ELISA)，常采用双抗体夹心法、竞争法、间接法等反应模式,如图.,1.3，.4所示。如图1双抗体夹心法反应原理示意图化学发光系统的原理在于免疫反应中的酶作用于发光底物。发光底物在酶的作用下,底物发生化学反应并释放出大量的能量，产生激发态的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时,可同时发射出光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量

6、子产额，该光量子产额与样品中的待测物质的量成正比。由此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。具体说来，我们采用的是辣根过氧化物酶(HRP)催化鲁米诺（Lumnol）底物发光系统，如图1.所示。我们的核心技术之一在于自行研制开发的发光底物系统,该系统与国外同类产品的比较表明,不仅主要性能指标达到了国外产品水平，并且由于自行生产，因此大大降低了发光底物的成本。在该底物系统中,我们采用特殊的复合型增强剂，发光快，强度高，发光平台期长，可达6分钟，因此完全可以满足临床检测的需要。其发光平台期测定结果如图1.所示(1）与放免(I）产品比较 与放射免疫试剂(IA）比较，化学发光避免了放射性核素的污染

7、以及对操作人员的伤害，大大缩短了反应时间，同时兼具高灵敏度的优势。 (2)与酶免(EISA)产品比较 灵敏度与可测范围远远高于酶免产品，兼具ELISA法简便的操作方法与较短的反应时间。 （3）与进口全自动发光比较试剂成本远远低于进口全自动发光试剂，为开放体系,也可适用其他发光检测仪器检测。【应用】发光免疫分析作为一种非放射性免疫标记技术,除了具有灵敏、特异、标记物稳定等特点外,其检测程序亦简便、快速，只需微量标本,近年来临床上已应用于检测各种激素、肿瘤标志物、药物及其他微量生物活性物质，亦可用于细菌和病毒感染的快速诊断。三、 技术优势【技术路线的确定】为适应中国临床检验的实际需要，我公司确定了

8、以下的技术路线，如下表7所示：【技术鉴定】（1） 化学发光试剂的现状 已通过河北省科委鉴定: 国外进口发光剂对比结果：符合率为9%，部分技术指标超过进口发光剂。 甲胎蛋白（）化学发光定量检测试剂盒:已通过中国药品生物制品检定所检定，各项指标优异。 癌抗原5(CA2）化学发光定量检测试剂盒:已通过中国药品生物制品检定所检定，各项指标优异。 催乳素（PL)化学发光定量检测试剂盒：已通过中国药品生物制品检定所检定,各项指标优异。（2） 化学发光仪及软件 化学发光分析管理软件已开发完成，可实现程序测量、快速测量、单板多项、两点定标、自动打印化验单、工作量统计等功能。表.7技术路线思路确定技术路线思路标

9、准微孔板为反应载体操作简便、易于标准化标记辣根过氧化物酶应用广泛、标记技术稳定鲁米诺底物系统针对辣根过氧化物酶，发光强度大,扩展性强全自动、半自动发光仪适合不同层次用户的需要中文操作软件方便国内临床免疫学检测实验室四、 产品介绍【系列试剂盒】现有试剂盒共有个系列,2余种产品。（1） 肿瘤标志物系列：甲胎蛋白（F）、癌胚抗原(）、血清铁蛋白(SF)、2微球蛋白(2M)、人绒毛膜促性腺激素（C)、前列腺特异性抗原（PSA)、游离前列腺特异性抗原(-PSA）、癌抗原25（CA125）、癌抗原15-3（A15-3）、癌抗原9-9(CA1-)（2） 甲状腺功能系列：甲状腺素（T4）、游离甲状腺素(T）、

10、三碘甲腺原氨酸(T3）、游离三碘甲腺原氨酸（FT)、促甲状腺素（TSH)（3） 生殖内分泌激素系列：催乳素（PRL）、黄体生成素()、卵泡刺激激素(FSH）、孕酮()、睾酮（)、雌二醇(E2)（4） 糖尿病系列:胰岛素、血清肽（5） 其他检测系列:皮质醇、总lE、生长激素(GH）【试剂盒评价标准】从临床应用角度考核检验试剂的可靠性,是以其能否区分健康与疾病的能力作为依据的。目前还很难找到100%可靠的试验,任何试验都会出现假阴性或假阳性。以下指标为评价一个试剂盒的常用指标,不同的试剂盒将根据不同的标准进行评价。（1） 准确性准确性是指测定所得值与真值的一致性。（2） 精密性精密度是指对同一份样

11、品重复测定，每次测定结果和均值的接近程度。（3） 灵敏度灵敏度是指某种试验检出极低免疫物质的能力。（4） 特异性特异性是指以无病者试验，其阴性的百分率。（5） 稳定性是指试剂盒在有效期内保持稳定的程度。【试剂盒操作注意事项】（1） 发光反应最适温度在2528,为保证试验测定的准确性，应严格控制实验室温度在125。（2） 发光反应灵敏度很高,因此需要严格按照说明书要求，控制每步反应时间，操作应紧凑。（3） 处理试剂和样品时需戴一次性手套,操作后应彻底洗手。（4） 所有标本应视为潜在的传染性物质，废弃处理时,请按照当地政府和有关国家规定进行。（5） 操作前仔细阅读使用说明书,不同批号的试剂不得混用

12、。（6） 包被条打开后，应将剩余包被条用密封保存,以免受潮。（7） 加样头不可混用,以免交叉感染。（8） 为避免边缘效应，建议温育过程中将微孔板用封膜覆盖。（9） 洗涤要彻底，洗液应注满每孔，避免产生气泡。每次洗涤均应甩干孔内液体。但不可用水过猛，最后应将孔内液体拍干。（10） 建议各实验室根据自己实际条件建立临界值范围。本试剂盒仅作其他诊断方法的辅助手段之一，供医生参考。（11） 试剂请在有效期内使用。第二章肿瘤标志物检测一、肿瘤标志物简介近年来,肿瘤已成为危害人类生命健康的常见病、多发病。肿瘤根据来源可分为瘤和癌，按照性质可分为良性和恶性。肿瘤的发生直接影响机体的代谢，如改变糖的代谢途径,

13、改变蛋白质与核酸的合成，改变代谢过程中关键酶的活性,以及引起激素代谢异常等。以蛋白质为例,肿瘤组织中的蛋白质含量要比正常组织高。作为可用于肿瘤标志检测蛋白质来讲,属于肿瘤组织自身增值中合成的标志蛋白质或酶均见增高，而属于肿瘤细胞分化标志的蛋白质或酶,其合成往往成减低趋势。并且通过研究发现,在哺乳类动物胚胎期所具有蛋白质，随着年龄增长其结构有所改变，当人体出生后或随着年龄变化，某些基因被关闭,不再表达或很少表达该基因的活性，当癌变时,某些细胞退化成为分化较差的、近似于胚胎细胞时，使得某些基因失活，某些基因被激活，重新合成一些胚胎蛋白,如甲胎蛋白、癌胚抗原等,这一现象称为返祖现象。这即为肿瘤标志物

14、的检测建立了科学基础。所谓肿瘤标志物(tuormarker,M），是指由肿瘤组织产生的存在于肿瘤组织本身,或分泌至血液或其他体液，或因肿瘤组织刺激，由宿主细胞产生而含量明显高于正常参考值的一类物质。肿瘤标志物的检测,对于肿瘤的早期发现,病情的发展、治疗后的评价、监测复发和转移等方面都具有一定的应用价值，可以为患者争取治疗时间，延长患者生命。因而近年来，世界许多医学科学工作者致力于对肿瘤细胞生长各环节、代谢与调控的基本规律和变化研究，寻求新的特异性或相对特异性的肿瘤标志物。二、瘤标志物的分类肿瘤胚胎性抗原标志物该类蛋白质即前文所提到的因返祖现象的出现,而产生的肿瘤标志物。虽然该类标志物与肿瘤组织

15、不一定具有特定的相关性，但与肿瘤的发生存在着内在的联系。例：甲胎蛋白（alha-etopron， P）癌胚抗原(carcnemboni atigen, EA）糖类抗原标志物该类物质是肿瘤细胞表面的抗原物质,或肿瘤细胞所分泌的物质。这类标志物的出现为临床肿瘤的诊断带来方便，但其命名无规律可言。有些是肿瘤细胞株编号,有些是抗体物质的编号。该类标志物又可分为两类糖类高分子粘蛋白抗原例：癌抗原CA125癌抗原A15-32血型类抗原例:癌抗原CA-9癌抗原C50酶类标志物酶及同工酶是最早出现和使用的肿瘤标志物之一。肿瘤状态时,机体的酶活力就会发生较大变化,这主要是因为肿瘤细胞或组织本身诱导其他细胞和组织

16、产生异常含量的酶;肿瘤细胞的代谢旺盛，细胞通透性增加，使得肿瘤细胞内的酶进入血液，或因肿瘤使得某些器官功能不良,导致各种酶的灭活和排泄障碍。例:前列腺特异性抗原（prste spcfic angen,P)神经原特异性烯醇化酶（neuron-specificeoase， SE）激素类标志物当具有分泌激素功能的细胞癌变时，就会使分泌的激素量发生异常。这种现象被称为正位激素异常。而正常情况下不能生成激素的那些细胞,转化为肿瘤细胞后所产生的激素,或者是那些能产生出激素的细胞癌变后，分泌出的是其他激素细胞所产生的激素,这种现象被称为异位激素异常。衡量异位激素异常的条件是:有非内分泌腺细胞合成的激素；某种

17、内分泌细胞却分泌其他分泌腺细胞的激素;肿瘤患者同时伴有分泌异常综合征；这类肿瘤细胞在体外培养时也能产生激素;肿瘤切除或经治疗肿瘤消退时，此种激素含量下降,内分泌综合征的症状改善。例:人绒毛膜促性腺激素（humn crioc gonagton,HC)人胎盘催乳素（PR）其它蛋白质类标志物另外还有一些早期发现的蛋白类肿瘤标志物，特异性稍差,但检测方法相对比较容易，因而常作为常规检测项目，用以肿瘤普查。例：-微球蛋白(2microgobuln，2-G）血清铁蛋白(erFeriti,SF)三、肝癌及甲胎蛋白（AF)原发性肝癌是指由肝细胞或肝内胆管细胞癌变所形成的恶性肿瘤,是我国常见的恶性肿瘤。近年来国

18、内外原发性肝癌的发病率,均有不断增高的趋势。从世界范围来看，各地区发病有较大差别,欧美国家发病率较低(1.9.人10万人),亚非国家发病率较高(4.98.人/10万人)。根据我国一些地区的普查,我国的发病率为14553人1万人，可见我国亦属原发性肝癌的高发区。男性肝癌的死亡率仅次于胃癌和食管癌，占各种恶性肿瘤的第三位，女性则仅次于胃癌、宫颈癌和食管癌，为第四位。肝癌的发病率呈一定的地区分布，沿海高于内地,东南和东北高于西北、华北和西南部,沿海岛屿和江河海口又高于沿海其他地区。肝癌多见于男性，男女发病之比为25:1，年龄大多为404岁。越是肝癌高发区，这种性别差异就越明显,发病年龄也越早。原发性

19、肝癌起病隐匿,早期症状不明显,一旦出现临床病状和体征,诊断多属晚期，难以治疗。因此临床上迫切需要一种能够早期诊断原发性肝癌的检查方法。15年Berstran和zar在人胎儿血清中发现一种胚胎专一性甲种球蛋白,以后证实为甲胎蛋白（F）;96年苏联GlAbele首先在移植肝癌细胞的小鼠血清中发现了甲胎蛋白，并发现甲胎蛋白主要由胎肝合成；1964年ataov证明肝癌病人血清中也存在AP；其后Uriel 等进一步证实FP在原发性肝癌诊断中的价值。190年后，通过广泛的临床应用,证实FP是诊断肝癌的可靠指标之一，从而使肝癌的诊断获得重大突破。大量研究结果表明，原发性肝癌者血清FP含量0%以上超过00ng

20、/ml，最高可达每毫升数毫克,一般正常人血清AFP含量都在0ng/ml以下。世界各国已先后将AF检查作为早期诊断原发性肝癌的有效方法用于临床。我国在十一届国际肝瘤会议上报告了4943人A普查工作,初步肯定了FP普查对原发性肝癌具有早期诊断意义。通过普查在临床上发现了许多无症状、无体征的“小肝癌”,对早期治疗、提高患者的生存率起到了十分重要的作用。FP测定的临床意义:1 原发性肝癌的诊断检测血清AFP含量是诊断原发性肝癌的重要手段之一。由于方法学的不断改进，使原发性肝癌的阳性检出率达到了90%以上。正常成人血清AFP含量各家报告不一致。可能与测定方法、标准品等不同有关。中国肝癌研究协会报导正常人

21、血清AF5%,前列腺癌的可能性极小（10%当P/tPS1%时,则前列腺癌的可能性极大(80%）,必须作前列腺活检以确诊。前列腺特异性抗原速率（PSA oiy,PSA）回顾性研究表明，连续观察血清PSA浓度的变化,前列腺癌组织S速率显著高于良性前列腺增生组和正常人组,正常值上限为每年 0.75g/ml。这样，即使在两次检测中PSA的浓度均在正常范围，但根据PA的速率变化，可进一步检查发现早期前列腺癌。大量的筛选资料证明，如果PS速率超过每年.5ng/m,则可发现47的患者患前列腺癌。五、卵巢癌及癌抗原CA25据统计，每年都约有20,000名妇女被诊断为新的卵巢癌病人。每年死于卵巢癌的妇女超过12

22、，000人。卵巢癌是仅次于宫颈癌、宫体癌的第三位妇科肿瘤,居女性恶性肿瘤的第六位,但其死亡率却明显高于宫颈癌和宫体癌，是恶性程度最高的妇科癌症，且由于大多数卵巢癌均发现于晚期,故其五年生存率仅为0%3%。世界上卵巢癌发病率最高的是瑞典（21/0万）。上海1988年统计,卵巢恶性肿瘤发病率为5.37/10万。卵巢癌的高发年龄在400岁。卵巢癌的组织病理类型复杂，一般而言，卵巢实性肿瘤多属恶性，而囊性肿瘤多属良性。981年,Bast等从人卵巢浆液囊胞腺癌抗原可被单克隆抗体OC12识别,因而被称为CA2,是一种卵巢癌相关抗原。为一种糖蛋白，MW大于000。CA125是研究最多的卵巢癌标记物，在早期筛

23、查、诊断、治疗及预后的应用研究均有报道。在早期筛查方面,虽然血清A125在、期卵巢癌的敏感性只有6%左右，仍被认为是一项经济、方便的早期检查手段。有研究表明,还未被诊断为卵巢癌者血清中即可检测到CA125升高，比临床诊断提前至少1年的时间。在一项用挪威的血清库进行的更大规模的研究中，发现CA125升高早在临床检查前18个月即可出现。更早的CA125变化可出现在临床确诊前5年,那时即有25%的病人高于3U/ml,同年龄段的对照组只有的升高。这表明通过检测血清CA125，上皮性卵巢癌能被提前相当一段时间发现。C在早期筛查方面的敏感性低于阴道超声检查(TV）,连续检测CA15或与阴道超声(TU）联合

24、应用可提高诊断的特异性和敏感性。在一个5500人的健康女性人群中,1人被查到A125升高,连同另外175个健康对照随访者,每三个月做一次CA125,每半年做一次阴道超声和盆腔检查。用这种方式查到个病人,其中人是早期。在连续检测中，A15的初始浓度和上升斜率应考虑在内,以鉴别肿瘤是良性生长还是恶性生长。在一次8688份血清样品的回顾性研究中,发现用这种方式来计算卵巢癌的危险性,其敏感性83%,特异性99%,阳性预见率%,认为这种方式是筛查早期卵巢癌的较好技术。CA1用于卵巢癌筛查假阳性主要出现在妊娠、月经期及妇科炎症等情况。在妊娠头3个月和月经期CA12假阳性分别可达57%和16%。也有认为CA

25、25与月经周期无关,但子宫内膜炎患者CA25升高。CA125的升高与临床分期及病理类型相关，浆液性卵巢上皮癌CA2阳性率89%，粘液性癌6%，卵巢内胚窦瘤CA25不升高。、期卵巢癌C125的阳性率在60%左右，、期患者阳性率在5%以上，甚至接近10。卵巢癌经过手术治疗或综合治疗后,因肿瘤负荷的减少，肿瘤标志物的水平亦有明显变化。通过连续检测肿瘤标志物的变化,可对治疗效果进行评价。CA125在评价疗效方面很有价值。rombac等报道CA1水平的变化与治疗后病情变化的符合率达89。Hilila报道治疗后病情进展者中88%升高，在病情好转者中87降低,总符合率88%。CA2治疗后的下降幅度和下降后的

26、稳定期长短是评价治疗效果的良好指标。对治疗后随访的患者,CA12是较佳的复查指标,其变化比客观证据早16个月，但二次手术探查中C125的阳性率仅有35%40%，复发灶直径大于cm者阳性率较高。但有临床表现的复发患者A125的阳性率可达90%以上。连续动态测定可以提高在复发诊断方面的阳性率,发现CA1升高应考虑复发转移，A5升高的斜度和幅度可预示局部复发或是远处转移。在无症状的绝经后妇女中C125水平升高也是一个重要的危险因素。Jeyarah等随访了从22000名绝经后妇女中筛选出的血清CA5高于U/ml的女性7人，另外随机选择了同等数量的血清CA25低于30U/m女性一起随访164+897天，

27、结果共有84人死亡,其中C125升高组占人,而25正常者仅2人，血清25升高者死亡危险性显著高于正常者。六、乳腺癌及癌抗原CA15-3乳腺癌的发病率居常见癌症的第三位,是妇女中最常见的恶性肿瘤,在我国位于妇女恶性肿瘤的第二位。乳腺癌的发病率在世界各个国家和地区判别很大，北美、北欧最高,亚洲、非洲最低，南欧及拉丁美洲居中。我国的津、京、沪及沿海城市为高发地区，上海最高。乳腺癌好发于女性,发病率是男性的10倍。30岁后，发病逐年增多,5岁达高峰。乳腺癌常在确诊时已经有转移或在治疗后发生转移，而肿瘤细胞的转移是引起患者死亡的主要原因之一。因此乳腺癌从发病开始就是一种全身性疾病,在体内可能隐藏着一些微

28、小转移灶。手术、放化疗及内分泌治疗有助于控制乳腺癌的发展。早期检测乳腺癌转移和治疗后的复发对控制乳腺癌的发展，改善患者的生存质量,养活转移复发和死亡率有重要的意义。1984年，Hikens等人及e等人分别用人乳脂球膜上分离的糖蛋白MA-1和肝转移的乳腺癌细胞免疫小鼠，制成针对相应抗原的单克隆抗体：15-D和DF-。这两株抗体所识别的抗原是上皮细胞上的一种粘蛋白MU-的唾液酸糖抗原，该抗原被命名为C5-。这两株抗体分别与CA15-3抗原上的两个主要决定簇相结合。A15-分子结构还不清楚。该种糖蛋白含有脱辅基蛋白一个跨膜区，一个胞内区和由2个氨基酸纵向排列的胞外区。CA15-分子量约为400D这种

29、粘液性糖蛋白(MC-1）位于乳腺细胞和肺上皮细胞上，也大量表达于乳腺癌,卵巢癌,胰腺癌,胃癌和肝癌上，是一种肿瘤相关抗原。A15-3的血清半衰期不到两周。乳腺良性肿瘤患者术前、术后A15-3水平均正常;乳腺癌患者术前CA5-水平期处于正常水平,、期升高，并以期升高最为明显。、期乳腺癌根治术后C1-3水平降至正常，而姑息性切除术后仍高于正常。术前乳腺癌患者A15-3水平较低与较好的预后呈正相关。血清CA1-在治疗后持续较高或又出现持续性升高，提示体内残留有肿瘤或乳腺肿瘤发生转移或复发。血清C15-水平持续性升高较临床诊断乳腺癌复发转移灶要早几个月。因此一些临床肿瘤专家认为，在乳腺癌术后最初四年中

30、应该每三个月复查一次血清CA15-水平,而五年以上的患者应每六个月复查一次。在正常人群及乳腺良性肿瘤患者中,C-3有一定比例的阳性检出率,在少数良性疾患中,如慢性肝炎，结核,自身免疫疾病中也会有所升高。七、消化道肿瘤及癌抗原C9消化道肿瘤,尤其是胃癌在中国占各种恶性肿瘤发病率及死亡率的第一位，且未见明显下降趋势。据调查，虽然城市人口胃癌死亡率稍有下降，但在农村中则有所升高。统计结果表明在中国胃癌的死亡率由1973-97年的19万增至199-1992年的21./10万。男性的胃癌发病率高于女性，男女发病率之比为-3:。发病的高峰年龄为-9岁，且有年轻化的趋势。结肠癌，胰腺癌发病率也有所升高。结肠

31、癌的发病率,以上海市为例,在这期间以每年10%的速度增加。在20年间增加225倍。199年Koprowk用结肠癌细胞系S111免疫小鼠，与骨髓瘤杂交制备出被命名为16S-9的单克隆抗体。该株抗体能识别肿瘤细胞膜上如糖脂和粘蛋白成分中所表达的唾液酸化的ewis血型抗原（Siosy-fucollactoteaoe)的表位。这种血型抗原是一种异质性的高分子量粘糖蛋白,分子量范围从20-1000Kd。在胚胎上皮组织中有较高表达,但在正常人中表达量很低,该株抗体所识别的肿瘤相关抗原被命名为A19-9。C199在消化道腺癌病人血清中浓度可明显升高，因而又称作胃肠癌抗原。A199是一种与胃肠道恶性肿瘤有关的

32、肿瘤相关抗原。在胰腺癌，胆管细胞癌,肝细胞癌,胃癌,结肠癌以及食管癌,甚至在非胃肠道恶性肿瘤患者，血清A1-循环抗原含量都有不同程度的升高。随着治疗和病情的不同转归,血清中CA99含量会有所变化，因而能较好的反映患者的病变状态。血清CA9-的测定是一种高特异性,高预见性和无害的测定方法，可用于胃肠道恶性肿瘤的早期诊断，及时监测病情的进展、复发和转移,有助于临床肿瘤医师研究和确定对胃肠道恶性肿瘤患者的治疗方案。八、人绒毛膜促性腺激素(HCG）检测及癌症诊断人绒毛膜促性腺激素(HCG)是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素，由100个氨基酸和一些单糖组成，分子量约为0，有和两个亚单位，主要具有刺

33、激黄体发育的功能，从而维持妊娠的继续。HG的检测除了可诊断正常妊娠外，还可对异位妊娠、绒毛膜癌、滋养层肿瘤等进行诊断,并可用于正确指导人工流产。1.正常妊娠检测一般孕妇在停经后060天才知道受孕，而且妊娠症状在头一月往往不是很明显。胚胎极易受到线、放疗、手术麻醉以及药物的损伤，另外烟酒及不良饮食也会影响的发育，为减少由于胚治的损伤，而导致婴儿先天缺陷和避免不必要的人工流产,尽早使医生和孕妇掌握受孕与否就显得非常必要,对落实优生优育尤为重要。2 测异位妊娠和正常指导人工流产HC在受精卵植入子宫后4至48小时就可以出现在血、尿及体液中,可以被检测出来。不同个体及时期HCG含量有极大变化。但总的变化

34、趋势大致相同,一般都在第8-0周达到最高峰,平均上升速度为.10.增加一倍，然后逐渐降低,到18周时降至同第4周水平相近时即维持无较大的波动。但是异位妊娠、先兆流产的HCG水平或增长速度低于正常妊娠时的情况。当受精卵在子宫外植入后,胚胎的发育可受到严重的限制,所以HG的水平与同期正常妊娠相比就显得很低。往往人工流产数天,HCG就会消失。如果HCG继续存在，就说明仍有绒毛组织残存，需进一步清宫。3 检测亚临床自然流产自然流产多为孕卵和发育异常,机体孕激素分泌不足,与着床不同步或脱膜发育不良。HCG水平也大大低于正常妊娠,一般在流产前HCG的水平在20mUml左右，所以自然流产的诊断就需采用高灵敏

35、度的试剂。滋养层细胞肿瘤的诊断滋养层细胞肿瘤系由绒毛膜的滋养层细胞和合体滋养细胞过度增生而来,根据滋养层细胞增生的程度，有无绒毛，侵蚀能力及其它生物学特性，分为良性葡萄胎、恶性葡萄胎,CG水平持续升高，可提示这类疾病的存在。 G与肿瘤近年来的研究调查提示，HCG不仅是滋养层细胞肿瘤标志,而且还可为许多其它肿瘤的重要标志。如胃癌、胰腺癌、肝癌、多发性骨髓癌、卵巢癌、乳癌等。九、肿瘤普查肿瘤发生常常无明显症状，因而无法早期治疗,常常因此延误了最佳治疗时机目前一些地区已将甲胎蛋白(AP）癌胚抗原(CEA）、2微球蛋白（2MG）、血清铁蛋白（SF)作为体检的检查项目，用以肿瘤普查，从而提高了癌症的早期

36、诊断率。以上肿瘤标志物多属于非组织特异性肿瘤相关标志物,但是联合检测可弥补非特异性的不足，提高肿瘤的检出率。以下就这几种肿瘤标志物进行分别介绍。甲胎蛋白（AFP)：见前文所述。癌胚抗原(CEA）是96年Gold和Freeman首先从胎儿及结肠癌组织中发现的，CEA是一种分子量为22000道尔顿的多糖蛋白复合物，4%为蛋白质。一般情况下,CE是由胎儿胃肠道上皮组织、胰和肝的细胞所合成，通常在妊娠前6个月内CEA含量增高,出生后血清含量降至很低。CEA属于非器官特异性肿瘤相关抗原，分泌CEA的肿瘤大多位于空腔脏器,如胃肠道、呼吸道、泌尿道等。正常情况下，E经胃肠道代谢,而肿瘤状态时的EA则进入血液

37、和淋巴循环,引起血清CEA异常增高,使上述各种肿瘤患者的血清CEA均增高。如肺癌、乳腺癌、膀胱癌和卵巢癌患者血清CEA量会明显升高,大多显示为肿瘤浸润,其中约有70%为转移性癌。一般来说,手术切除后6周，CEA水平恢复正常，否则提示有残存肿瘤，若CE浓度持续不断增高，或其数值超过正常56倍者均提示预后不良。连续随访定量检测血清CEA含量，对肿瘤病情判断更具有意义。2-微球蛋白(2-MG）由ergard和Besrn于996年从肾脏患者尿中分离出的一种蛋白质,由于它的分子量仅为1.2KU，电泳是显于-区带,故被命名为-微球蛋白。2-微球蛋白是人体有核细胞产生的一种由1个氨基酸残基组成的单链多肽地分

38、子蛋白。2-微球蛋白是恶性肿瘤的辅助标志物，也是一些肿瘤细胞上的肿瘤相关抗原。2微球蛋白是人类白细胞抗原(HA）的轻链部分,链内含有一对二硫键，2-MG与HLA-A、抗原的重链非共价的相结合而存在于细胞膜上。一般认为除成熟红细胞和胎盘滋养层细胞外，其它细胞均含有-MG。它可从有核细胞中脱落进入血循环,使血液中的2-MG升高。血清2M不但可以在肾功能衰竭、多种血液系统疾病及炎症时升高，而且在多种疾病中均可增高，故应排除由于某些炎症性疾病或肾小球滤过功能减低所致的血清2-M增高。肿瘤患者MG含量异常增高，在淋巴系统中如慢性淋巴细胞白血病、淋巴细胞肉瘤、多发性骨髓瘤等尤为明显，在肺癌、乳腺癌、胃肠道

39、癌及子宫颈癌等也可见增高。由于在肿瘤早期，血清2-G可明显高于正常值，故有助于鉴别良、恶性肿瘤。脑脊液中的2-MG的检测对膜白血病的诊断有特别的意义。铁蛋白（frtn）是Lfbeer于937年从马脾中发现的一种储铁蛋白质，分子量约45D，每个铁蛋白分子由24个亚基组成,亚基分L(light， ler,baic）和H（heav, hrt, acic)种,储铁组织(如肝、脾)中的铁蛋白主要由L亚基组成,等电点较高;而心脏、胎盘中的铁蛋白含H亚基较多,等电点较低。195年ihter的报道引起了人们对肿瘤细胞铁蛋白的极大兴趣,与肝、脾铁蛋白不同,肿瘤细胞的铁蛋白含H亚基较多,习惯上称之为酸性铁蛋白（a

40、cidc isoerrtins）。免疫学研究确立了铁蛋白为一种肿瘤相关蛋白质,多数肿瘤病人血清中铁蛋白浓度升高,而组织铁储量并未发生相应的增加，血清铁蛋白浓度升高通常说明病人预后不良。在荷有移植性人肿瘤的裸鼠血清中可检测到人铁蛋白的存在,而肿瘤摘除后人铁蛋白从血清中迅速消失,这说明肿瘤细胞可分泌胞外铁蛋白，肿瘤病人血清中铁蛋白水平的升高可能是肿瘤组织泄漏所致。十、肿瘤标志物检测图谱肿瘤标志物的检测可依照表1进行选择表.1肿瘤标志物的选择癌肿部分肿瘤标志物选择顺序肝AF SF CEA 结直肠CEA A-9 CA5胰腺C-9 CEA A50胃GAg CA724 CEA CA9-9食道SCC肺CA5

41、0 EA A19-9 SCC A21 NE乳房CA1- CA125 CEA卵巢CA12 FP -HC CE子宫SC SF -HC前列腺fSA PSA PAP甲状腺HG CEA CA19-血液病S -CG项目名称主诊阳性顺序C50广谱胰、肝、卵巢、肠、胃、肺CA125卵巢卵巢、胰、肺、乳、肠A15-3乳房乳房CA1-9消化道胰、胆、胃、肠MGAgCA72胃胃、肠、肺、乳SC/SYFRA21鳞癌肺、食道、上鄂、宫颈、皮肤 注：以上表格摘自中国检验医学用品2001年第一期,仅供参考。第三章 甲状腺激素检测人体生理功能的调节系统包括神经系统和内分泌系统,神经系统通过神经纤维传导信息实现调节功能，内分泌

42、通过血液和组织液运输激素，作用于某些靶细胞而达到调节功能,二者关系密切。所有的内分泌腺都直接或间接受神经系统的影响，激素也可以影响神经功能,如甲状激素能明显影响脑的发育和正常功能。甲状腺是一个内分泌腺体,它分泌具有生物活性的甲状腺激素。甲状腺激素对机体的代谢、生长发育、神经系统、心血管及消化系统等具有重要作用；甲腺激素分泌量增加或减少均可导致甲状腺功能失调，内分泌代谢紊乱。因此，正确检测甲状腺相关激素,对于诊断治疗甲状腺疾病具有重要意义。一、甲状腺基本知识甲状腺分泌有生理活性的甲状腺素(T4)和三碘甲腺原氨酸（T）及无生理活性的反T3等。血浆中4来自甲状腺,而80-90%的T和反3是T4在外周

43、组织经脱碘作用，脱去一个碘原子而生成的。血液中的T3和4,以结合和游离两种形式存在。绝大部分的甲状腺激素（T4 999%,T .7%）可逆性的结合于血浆蛋白上；游离的甲状腺激素在血中含量甚微,与蛋白结合的激素和微量游离激素处于动态平衡中,然而正是这些微量的游离激素才能进入靶组织细胞，与细胞中受体结合，发挥其生物学作用,它还在垂体部分反馈地调节促甲状腺激素(TSH）的分泌。结合型的甲状腺激素是没有生物学作用的，它对稳定血中游离激素含量起着贮存与缓冲作用。与甲状腺功能密切相关的另一激素为垂体所分泌的TH。TH是由垂体前叶嗜碱细胞所分泌，它是一种糖蛋白，分子量为5000-2800,糖类分子占总分子量

44、的15%，包括岩藻糖、甘露糖、半乳糖、氨基葡萄糖和氨基半乳糖等。TSH的分子是由两条肽链组成，一条是链,由89个氨基酸组成;另一条是链，由12个氨基酸组成，两条肽链靠非共价键结合在一起。激素的生物学活性由肽链决定。两个亚基必须结合才具生物活性，分开则无活性。SH分泌受神经和体液的调节，包括：下丘脑促甲状腺素释放素(T）的促进与靶腺激素(T、）反馈抑制的影响,二者互相拮抗,构成下丘脑腺垂体甲状腺轴;神经系统对TS分泌控制，在中枢神经系统的控制下，生长介素可降低TH分泌,多巴胺可抑TH释放,雌激素可升高TSH基础分泌,糖皮质激素可通过抑制TS的释放，使垂体分泌TSH减少；SH分泌受机体反应调节；T

45、SH分泌有昼夜节律性变化,高峰于午夜2：00-24:0，上午11:00时最低；冷刺激TS分泌增加,再促进T3、T4分泌以适应冷环境。(一）甲状腺功能的调节生理情况下，甲状腺功能有两种调节方式。即下丘脑垂体甲状腺之间的反馈性调节和甲状腺的自身调节。第一种调节是最主要的调节方式（见图.1）下丘脑RH垂体TSH甲状腺T3、T4图1 下丘脑垂体甲状腺轴的调节1.脑的神经分泌细胞产生促甲状腺激素释放激素(R）。TRH到达垂体前叶,促进合成和释放TS。SH在血液中浓度小于U/m。S有兴奋甲状腺的功能：能使甲状腺激素的合成增加；促进甲状腺激素分泌;使甲状腺上皮细胞增生肥大。2血液中甲状腺激素浓度,对下丘脑和

46、垂体功能也具有负反馈调节作用。血液中甲状腺激素尤其是T浓度升高,可反馈性抑制TSH分泌，反之,甲状腺激素浓度降低时,则TH分泌增强,从而兴奋甲状腺，使之分泌更多的甲状腺激素。3.血中和甲状腺激素水平可以反馈性的影响H的释放。T增加,可以使TRH分泌减少。当血液中游离甲状腺激素，主要是游离3（f）的浓度升高,可刺激RH合成增加，并贮存于下丘脑,待FT3、FT4降低时,可兴奋TH的释放，从而增加TSH的分泌,以提高血中甲状腺激素的浓度。因此，机体通过这一调节系统，以满足周围组织对甲状腺激素的需要;并使血中甲状腺激素浓度保持在正常范围之内。(二）甲状腺激素的生理作用1.代谢的影响产热效应：甲状腺激素

47、能使细胞内氧化速度提高，耗氧量增加,产热增加,使人体能量代谢维持在一定水平，调节体温恒定。糖、脂肪、蛋白质代谢糖代谢：生理剂量甲状腺激素能促进肠道对葡萄和半乳糖的吸收，促进肝糖原的合成。超生理剂量能促进肝糖原分解。脂肪代谢:甲状腺激素具有刺激脂肪合成和促进脂肪分解的双重功能,但总的作用是减少脂肪储存,降低血脂浓度。故甲亢时血胆固醇低于正常，机能低下时则高于正常。蛋白质代谢：甲状腺激素能促进蛋白质及各种酶的生成,T3或T分泌不足时，蛋白质合成减少,但细胞间的粘蛋白增多,引起浮肿,称为粘液性水肿。T3或T4分泌过多时，蛋白质分解大大增强,基础代谢率增加。对发育与生长的影响甲状腺激素是人类生长发育必

48、须的物质,可促进生长发育及成熟。还能促进生长激素的分泌。婴幼儿甲低可导致“呆小症”。3对神经系统的影响甲状腺对中枢神经系统的影响不仅表现在发育成熟，也表现在维持其正常功能。即神经系统机能的发生与发展,均有赖于适量甲状腺激素的调节。在胎儿和出生后早期缺乏甲状腺激素，脑部的生长成熟受影响,可造成不可逆转的智力障碍。对成人,甲状腺激素主要表现在提高中枢神经的兴奋性。成人的甲亢所致兴奋性症状和甲低所致的低机能性症状都是可逆的,经治疗后大都可消失。4对心血管系统的影响适量的甲状腺激素为维持正常的心血管功能所必需。过多的甲状腺激素对心血管系统的活动有明显的加强作用。5对消化系统的影响甲状腺激素能使胃肠排空

49、增快、小肠转化时间缩短、蠕动增加。故甲亢患者食量明显超过常人,但仍感饥饿，且明显消瘦。6对水、电解质代谢的影响甲状腺激素具有利尿作用,促进电解质的排泄。过多的甲状腺激素可引起钙磷紊乱。甲状腺激素不足时,水、钠及粘蛋白潴留于皮下组织,则可形成黏液性水肿。7.对维生素代谢的影响甲状腺激素是多种维生素代谢和多种酶合成所必需的激素,故其过多或过少均能影响维生素的代谢。8.对其他内分泌腺的影响人体是一个有机的整体,生理状态下一个腺体的功能活动常受到多个腺体影响。同时它也影响多个腺体的功能活动。甲状腺激素对维持正常的性腺功能及生殖机能是必需的，甲亢时可抑制雌激素的分泌,甲状腺功能低下时，可致性腺发育及功能

50、障碍。甲状腺激素对肾上腺皮质激素有刺激作用。(三)常见的甲状腺疾病甲状腺疾病是内分泌疾病中最常见的一类，所占比例约为8左右。该类疾病的发生没有固定的年龄段,在欧美国家约有五千万患者，在我国也占有相当大的比例。常见的甲状腺疾病主要有甲状腺功能亢进和甲状腺功能低下。1甲状腺功能亢进与甲状腺毒症:由于甲状腺分泌过多的甲状腺激素或由于各种原因引起机体内甲状腺激素含量增高所引起的甲状腺功能亢进的一组疾病征候群。甲状腺毒症是由血循环中过高水平的甲状腺激素作用于全身组织所引起的一种综合征。临床表现基本相似，但其病因却各异。临床症状主要有:眼突，食欲亢进而体重下降,体力减退，心悸,怕热，神经质等。表3.1 临

51、床常见疾病种类主要临床表现弥漫性毒性甲状腺肿（Graves病)弥漫性甲状腺肿、突眼，及胫前粘液性水肿是Grave病突出体征。毒性腺瘤（Plum氏病)主要症状包括体重减轻、虚弱、气短、心悸及怕热多汗。毒性多结性甲状腺肿多见于老年病人,临床表现主要有心悸、心律不齐及心衰,常伴有体重下降、神经质、颤抖及多汗。甲状腺功能低下(甲低):幼年发病者又称克汀病或呆小病。是由于体内甲状腺分泌激素不足或缺乏所引起的一种综合病症。引起甲低的病因及疾病也很多。缺碘引起的严重地方性甲状腺肿、桥本氏甲状腺炎和先天性甲状腺激素生成障碍性克汀病是甲低最常见的病因(表2）。3甲状腺激素抵抗症:1967年feof首次报道了甲状

52、腺激素抵抗症,即血清中游离甲状腺激素水平增高，而患者非但没有相应的代谢加快及TH受抑制的现象，反而具有典型的甲减临床症状。甲状腺激素抵抗症一般可分为全身型(GTH)、垂体型(PRH）和外周型三种。表32 临床常见甲低疾病种类主要临床表现新生儿甲低(呆小病或克汀病)患儿身材矮小，智力低下，表情迟钝及聋哑。儿童甲低生长发育迟缓,智力减退。少年期患者可有性早熟和乳溢症。成年人甲低疲劳乏力、畏寒，皮肤和毛发干燥,心率缓慢、舒张压高。女性伴有月经过多。二、甲状腺功能的血清学检查甲状腺功能血清学检查包括,T4，fT3，f，SH,另外还有TG，T等。（一)甲状腺血清学检查的意义：如前所述,无论从甲状腺激素的

53、生理作用还是从甲状腺疾病的危害程度都可以看出,甲状腺血清学检查在临床上是十分有意义的。它的临床意义如下:（1)辅助诊断甲状腺疾病通过血清学并配合其他检查方法,可以判断甲状腺功能异常的患者的病因和部位，诊断甲状腺功能低下或亢进。()指导治疗和疗效观察通过检测,可便于医生给出治疗方案。在治疗过程中,及时的掌握甲状腺激素水平,对于用药量的掌握、减小药物的副作用也能起到积极的作用。（3）诊断非甲状腺疾病非甲状腺疾病患者所表现的甲状腺功能改变，通常为T3和T水平降低 3水平升高；TSH水平正常,但是在临床上无甲状腺功能减低的表现，又被称为正常甲状腺疾态综合症。如肝脏疾病、糖尿病、颅脑损伤、精神病、肾脏疾病、心血管疾病等都有一定程度的甲状腺激素改变,因此测定甲状腺相关激素可作为病情评估观察和预后判断的一种辅助指标。（4)用于鉴别排