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1、糖组成分析（PMP-HPLC混合单糖标准品的准备：称取各单糖标准品（L-Fuc;L-Rha;L-Ara;L-Xyl;D-Man;D-Gal;D-GIc;D-GalA;D-GIcA）溶于去离子水中，配成1mg/ml以待分析。多糖的水解称取2-4mg多糖样品于鸡心瓶（10ml）中，加入1mlH2O预溶，再加入1ml4M的TFA，橡皮膏封闭瓶口，置110C烘箱中水解（中性多糖水解2h,酸性多糖水解4h）;冷却至室温后，加甲醇多次（4次）除去多余的TFA至无酸味；水解的多糖样品复溶于200卩LfO。单糖的PMP衍生化取50L多糖水解液或50讥混合单糖标准品溶液于2mlEP管中，分别与50L的0.6mo
2、l/L的NaOH溶液充分混合，加入100卩L0.5mol/L的PMP（0.2613g/3ml）甲醇溶液，塞紧塞子封紧后，漩涡振荡仪混匀；在70C水浴中反应100min，取出冷却至室温。加入100卩L0.3mol/L的HCI中和，再加700卩l去离子水以及1ml氯仿萃取，漩涡振荡，静置1-2h。吸取上层水相900卩I,再加入900卩l的氯仿萃取一次，静置1h,再去上层水相800卩l，再加入800卩l的氯仿萃取一次，或用低速离心代替静置处理。用带有0.22微孔滤膜的注射器过滤后，装入液相瓶中待HPLC进样分析。HPLC分析糖组成Agilent1260高效液相色谱系统色谱柱：ZORBAXEclipseXDB-C18,250mrhC4.6mm,5ym;流动相：BufferA:15汇腈+85%磷酸盐缓冲液BufferB:40%乙腈+60%磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液：0.05M磷酸二氢钾缓冲液（pH6.7）KH2PO413.6g及NaOH1.8g溶液2L水中；乙腈（HPLC级）；时间（min）BufferABufferB0100010901030802035802045802045.011000551000柱温：20C;紫外检测波长：254nm；流速：1ml/min;进样体积：20y。
PMP柱前衍生高效液相色谱法
