原料药质量研究课件

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1、原料药质量研究第一页，共九十六页。原料药质量研究特性研究特性研究(ynji)-理化、稳定性理化、稳定性对照品研究对照品研究- -标化、校正标化、校正(jiozhng)(jiozhng)因子因子方法研究方法研究(ynji)(ynji)- -建立、验证建立、验证原料药研究的特点原料药研究的特点 杂质研究杂质研究- -工艺、残留溶剂工艺、残留溶剂1432第二页，共九十六页。原料药质量研究其他其他(qt)参考资料参考资料 化学药物杂质研究的技术化学药物杂质研究的技术(jsh)(jsh)指导原则指导原则 化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则 第三页，共九十六页

2、。原料药质量研究建立标准时要考虑建立标准时要考虑(kol)的问题的问题200820072006 200520042003 200220012000 常见常见(chn jin)研究误区以及供研究误区以及供参考的经验和体会参考的经验和体会 新版药典新版药典(yodin)(yodin)动态对化动态对化学原料药质量研究的影响学原料药质量研究的影响 研发原始记录中常见问题及研发原始记录中常见问题及改进建议改进建议 主要讨论内容主要讨论内容第四页，共九十六页。原料药质量研究Page 5碘值碘值(din zh)(din zh)、皂化值、酸值、皂化值、酸值 折光率折光率比旋度比旋度熔点熔点(rngdin)(r

3、ngdin)相对相对(xingdu)(xingdu)密度密度馏程馏程吸收系数吸收系数黏度黏度凝点凝点物理常数研究物理常数研究第五页，共九十六页。原料药质量研究吸收系数吸收系数 新药尽可能详细、全面、规范新药尽可能详细、全面、规范 注意测定方法的准确性注意测定方法的准确性 实验样品的纯度实验样品的纯度 SOPSOP、温度、温度(wnd)(wnd)校正、仪器台间差校正、仪器台间差 实验环境的温湿度并实验环境的温湿度并记录！记录！ 仿制药与文献核对一致性仿制药与文献核对一致性物理物理(wl)(wl)常数研究常数研究第六页，共九十六页。原料药质量研究吸收系数吸收系数 物理意义为当溶液浓度为物理意义为当

4、溶液浓度为1%1%（g/mlg/ml）, ,液层厚液层厚度为度为1cm1cm时的吸光度时的吸光度(gungd)(gungd)数值。数值。 研究意义及应用趋势的改变研究意义及应用趋势的改变 原始记录问题原始记录问题第七页，共九十六页。原料药质量研究Page 8干燥干燥(gnzo)(gnzo)失重失重 重金属重金属溶液溶液(rngy)的澄清度的澄清度硫酸盐硫酸盐酸碱度酸碱度氯化物氯化物水分水分(shufn)铵盐铵盐结晶性结晶性一般检查项研究一般检查项研究第八页，共九十六页。原料药质量研究药典变化药典变化(binhu)提示提示pHpH测定法：测定法： 氢氧化钙标准氢氧化钙标准(biozhn)(bio

5、zhn)缓冲液缓冲液 是要用是要用2525时取饱和溶液的上清液，所以临用时需核对温度才时取饱和溶液的上清液，所以临用时需核对温度才能取用上清液！）能取用上清液！） 纯化水：取本品纯化水：取本品100ml100ml，加饱和氯化钾溶液，加饱和氯化钾溶液0.3ml0.3ml。 极弱电解质品种极弱电解质品种(pnzhng)(pnzhng)的的pHpH值测定可采用相同的测定方法值测定可采用相同的测定方法第九页，共九十六页。原料药质量研究药典附录通用检测方法变化药典附录通用检测方法变化(binhu)提示提示重金属检查法：重金属检查法： 甲管（标准）乙管（供试品）甲管（标准）乙管（供试品） + +丙管（标准

6、丙管（标准+ +供试品）供试品） 如丙管颜色浅于甲管则将一法改为二法进行检查如丙管颜色浅于甲管则将一法改为二法进行检查 勘误勘误(knw)(knw)！第二法规定乙管（标准）中显出的颜！第二法规定乙管（标准）中显出的颜色与甲管（供试品）比较，不得更深。色与甲管（供试品）比较，不得更深。 第十页，共九十六页。原料药质量研究药典药典(yodin)附录通用检测方法的使用附录通用检测方法的使用 氯化物氯化物 5.0ml5.0ml常用常用 硫酸盐硫酸盐 2.0ml2.0ml检查法检查法 铵盐铵盐 2.0ml2.0ml 铁盐铁盐 1.0ml1.0ml注意标准液的取用量！注意标准液的取用量！应保证灵敏检测的需

7、要！应保证灵敏检测的需要！建议建议(jiny)(jiny)：必要时改用仪器法判断：必要时改用仪器法判断 第十一页，共九十六页。原料药质量研究Click to edit title style杂质杂质(zzh)控制控制微粒微粒(wil)控制控制安全性安全性控制控制(kngzh)注射剂所用的原辅料应从注射剂所用的原辅料应从来源及工艺来源及工艺等等生产环节进行严格控制并应符合注生产环节进行严格控制并应符合注射用的质量要求。射用的质量要求。标准标准增项增项杂质谱的比较杂质谱的比较供注射用原料质控重点供注射用原料质控重点应在制剂申报资料中体现！应在制剂申报资料中体现！第十二页，共九十六页。原料药质量研究

8、杂质杂质(zzh)控制力度大幅度提高控制力度大幅度提高 未修订未修订(xidng)(xidng)品种品种有关物质有关物质（常规）（常规）增项增项增指标增指标严限度严限度改方法改方法TLCHPLC等度等度 梯度梯度理论板数理论板数 分离度分离度特定杂质特定杂质增订单列项增订单列项第十三页，共九十六页。原料药质量研究盐酸盐酸(yn sun)(yn sun)阿糖胞苷阿糖胞苷项目项目20052005年版年版20102010年版年版含量限度含量限度97.097.0103.0103.0鉴别鉴别3 3项项检查检查干燥失重干燥失重-含量测定含量测定UVUV吸收系数法吸收系数法* 性状性状(xngzhung)项

9、下还有熔点和比旋度项项下还有熔点和比旋度项，第十四页，共九十六页。原料药质量研究第一次飞跃第一次飞跃(fiyu)第二次飞跃第二次飞跃(fiyu)纯度控制纯度控制杂质控制杂质控制杂质谱杂质谱控制控制有关物质的研究有关物质的研究 杂质杂质(zzh)质控理念的变迁质控理念的变迁第十五页，共九十六页。原料药质量研究杂质杂质(zzh)谱的定义谱的定义 Impurity Profile （杂质谱杂质谱）: A description of the identified and unidentified impurities present in a drug substance. 对存在于药品中所有对存在

10、于药品中所有(suyu)(suyu)已知杂质和未知杂质已知杂质和未知杂质的总的描述。的总的描述。 第十六页，共九十六页。原料药质量研究已鉴定已鉴定(jindng)杂质杂质Identified Impurity特定特定(tdng)杂杂质质Specified Impurity潜在潜在(qinzi)杂杂质质PotentialImpurity杂质谱杂质谱Impurity Profile已确证了结已确证了结构特征的杂构特征的杂质质在质量标准中规在质量标准中规定检查并有自己定检查并有自己限度标准的杂质限度标准的杂质。已鉴定或未鉴。已鉴定或未鉴定定理论推测在理论推测在生产或贮藏生产或贮藏过程中可能过程中可能

11、产生的杂质产生的杂质实际产品中实际产品中不一定存在不一定存在存在于药品存在于药品中的所有杂中的所有杂质组成或模质组成或模式式第十七页，共九十六页。原料药质量研究Click to edit title style选择选择(xunz)最最优优多种互补多种互补(h b)结构结构(jigu)确证确证比较杂质的比较杂质的数数与与量量，一致或基本一致，物，一致或基本一致，物质基础相同决定可否桥接已上市药品的质基础相同决定可否桥接已上市药品的安全有效性结果安全有效性结果杂质谱杂质谱比较比较杂质谱的比较杂质谱的比较第十八页，共九十六页。原料药质量研究项目项目原研厂标准原研厂标准拟定标准拟定标准EP7.0EP7

12、.0USP34USP34JP15JP15含量限度按干燥品计算，每1mg的效价不得少于150单位按干燥品计算，每1mg的效价不得少于150单位按干燥品计算，每1mg效价不得少于150I.U.（非口服制剂），每1mg效价不得少于120I.U.（口服制剂按干燥品计算，每1mg中效价不得少于180USP 肝素单位每1mg的效价不得少于110单位。性状白色或类白色的粉末，有引湿性白色或类白色的粉末，极具引湿性白色或几乎白色的粉末，有适度的引湿性白色到灰棕色的粉末或颗粒溶解度在水中易溶在水中易溶，在乙醚中不溶在水中易溶在水中溶解，在乙醚中不溶比旋度不小于+35(40mg/ml,水)应不小于+50(40mg

13、/ml,水)鉴别1、电泳法2、钠盐1、电泳法2、钠盐A、具有抗凝血作用B、比旋度C、电泳法：D. 钠盐A、H-NMRB、IC法C、抗Xa/抗IIa：D、钠盐酸碱度5.07.5（0.10g到10ml水）5.07.5（0.10g到10ml水）5.58.0（0.10g到10ml水）5.07.5（0.10g到10ml水）6.08.0第十九页，共九十六页。原料药质量研究新方法新方法(fngf)分析方法的有效性（氨苄西林钠分析方法的有效性（氨苄西林钠/舒巴坦钠）舒巴坦钠）原方法原方法(fngf)在对各国药典方法比较的基础上确定分析方法第二十页，共九十六页。原料药质量研究杂质谱的比较杂质谱的比较(bjio)

14、多种互补多种互补 不同色谱不同色谱(s p)系统（流动相、色谱系统（流动相、色谱(s p)柱、波长）柱、波长） 不同检测器（不同检测器（uv、DAD） 不同原理的方法不同原理的方法 -分离或检测分离或检测 第二十一页，共九十六页。原料药质量研究新杂质的研究新杂质的研究(ynji)(ynji) 药物杂质的可能来源药物杂质的可能来源第二十二页，共九十六页。原料药质量研究1.原料：原料：红霉素红霉素 A、红霉素、红霉素 B、红霉素、红霉素 C、红霉素、红霉素D、红霉素、红霉素 E、红霉素、红霉素 F、阿奇霉素阿奇霉素B、阿奇霉素、阿奇霉素C、阿奇霉素、阿奇霉素E、阿奇霉素、阿奇霉素F2.中间体：中间

15、体：红霉素红霉素A肟（肟（Z）、）、6，9-亚胺醚、氮红霉素亚胺醚、氮红霉素A、红霉素、红霉素A肟（肟（E）、红霉素）、红霉素 C肟（肟（E）、）、9，11-亚胺醚、红霉素亚胺醚、红霉素C 6，9-亚胺醚、红霉素亚胺醚、红霉素A内酰胺内酰胺 3.副产物：副产物：红霉素红霉素-N-氧化物、氧化物、N-去甲基红霉素去甲基红霉素A、N-去甲基阿奇霉素去甲基阿奇霉素A、氨基阿奇霉素氨基阿奇霉素A、N-甲酰基甲酰基-N去甲基阿奇霉素去甲基阿奇霉素A、N-去甲基去甲基-N-苯磺酰基阿奇苯磺酰基阿奇霉素、阿奇霉素霉素、阿奇霉素N-氧化物、氧化物、3-去（二甲氨基）去（二甲氨基）- 3,4-去氢阿奇霉素、去氢

16、阿奇霉素、 O-甲苯甲苯磺酰基红霉素肟、红霉素磺酰基红霉素肟、红霉素Z肟重排物、氮红霉素肟重排物、氮红霉素11，12-硼酸酯、硼酸酯、 N，N-去去二甲基二甲基N-甲酰基阿奇霉素甲酰基阿奇霉素A、丙基阿奇霉素、丙基阿奇霉素、3-N， N-去二甲基氨基去二甲基氨基-酮酮基阿奇霉素基阿奇霉素A、阿奇霉素、阿奇霉素11，12-硼酸酯硼酸酯4.降解降解(jin ji)产物：产物：去克拉克定糖阿奇霉素去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮红霉素、红霉素、去克拉克定糖氮红霉素、红霉素8， 9-脱水脱水-6，9-半缩酮、红霉素半缩酮、红霉素6，9：9，12-螺缩酮螺缩酮阿奇霉素中可能阿奇霉素中可能(knng

17、)存在的杂质：存在的杂质：37种种第二十三页，共九十六页。原料药质量研究Company Logo结构确证(qu zhn)常用的方法热分析热分析粉末衍射粉末衍射核磁核磁元素分析元素分析质谱质谱紫外紫外红外红外第二十四页，共九十六页。原料药质量研究杂质杂质(zzh)谱的比较谱的比较 平行列表平行列表(li bio)、逐峰比较、逐峰比较 新杂质个数新杂质个数 单一新杂质量（单一新杂质量（0.1%） 新杂质总量所占比例（新杂质总量所占比例（2.0%） 第二十五页，共九十六页。原料药质量研究毒性快速评价(pngji)平台 斑马鱼斑马鱼毒性快速评价平台，对杂质的胚胎毒性、神经毒性，心脏毒性等进行评价。优点

18、：优点： 杂质用量少杂质用量少 无需知道无需知道(zh do)杂质结构杂质结构 实验周期短实验周期短（34天一个周期）天一个周期）第二十六页，共九十六页。原料药质量研究第二十七页，共九十六页。原料药质量研究药物耳毒性检测药物耳毒性检测利用利用(lyng)一种特殊染料对斑马鱼幼体头部耳蜗区神经丘毛细胞的染色，检测毛细胞的一种特殊染料对斑马鱼幼体头部耳蜗区神经丘毛细胞的染色，检测毛细胞的存活状态，来判断检测物的耳毒性。存活状态，来判断检测物的耳毒性。下图中红色圈示耳蜗区域；给药组中红色箭头示给药后毛细胞减少，黄色圈示给药后下图中红色圈示耳蜗区域；给药组中红色箭头示给药后毛细胞减少，黄色圈示给药后1

19、神经神经丘消失。丘消失。给药后给药后系统对照组（正系统对照组（正常常(zhngchng)幼体）幼体）第二十八页，共九十六页。原料药质量研究原始记录中常见问题原始记录中常见问题 溶剂的选择无依据：溶剂的选择无依据：溶液稳定性考察溶液稳定性考察 - 溶解度高且稳定溶解度高且稳定 8小时不需提示小时不需提示(tsh) 4小时提示临用现配或立即进样小时提示临用现配或立即进样 2小时改换溶剂小时改换溶剂 - 无背景干扰或小无背景干扰或小 溶剂峰、倒峰溶剂峰、倒峰 - 低毒价廉低毒价廉第二十九页，共九十六页。原料药质量研究 检出杂质检出杂质(zzh)(zzh)的数与量的数与量 干扰因素干扰因素 操作的便捷

20、性操作的便捷性 检测检测(jin c)波长的选择波长的选择-薄弱点薄弱点第三十页，共九十六页。原料药质量研究色谱色谱(s p)柱的选择柱的选择-常见问题常见问题 色谱柱与流动相性质不匹配色谱柱与流动相性质不匹配 100%的水或的水或Buffer最好选水相柱（最好选水相柱（AQ柱柱 ） 普通普通C18柱柱流动相中用到离子对试剂，用后应好好冲流动相中用到离子对试剂，用后应好好冲 最好专用！最好专用！ 因色谱柱填料性质已与原来因色谱柱填料性质已与原来(yunli)有所不同有所不同 在该柱上所摸索的色谱条件，可能在其它同类柱子上得不到重在该柱上所摸索的色谱条件，可能在其它同类柱子上得不到重现！现！ 第

21、三十一页，共九十六页。原料药质量研究柱温的确定柱温的确定(qudng) - 不规定不规定 （不需加温且对温度不敏感）（不需加温且对温度不敏感） - 25或或30 （不需加温但对温度敏感，需保持（不需加温但对温度敏感，需保持(boch)恒温）恒温） - 35 70 （需加温且对温度敏感，需保持恒温）（需加温且对温度敏感，需保持恒温） 50 以上要加预热管以上要加预热管第三十二页，共九十六页。原料药质量研究增设增设(zn sh)的特色项目的特色项目 结合药品的制法和工艺特点，以及杂质的结合药品的制法和工艺特点，以及杂质的特殊性特殊性设立设立特色特色有针对性有针对性检测项目，最大限度检测项目，最大限

22、度(xind)(xind)解决安全隐患。解决安全隐患。 人尿制品增加人尿制品增加乙肝表面抗原乙肝表面抗原检查：如检查：如尿激酶、尿尿激酶、尿促性素、绒促性素、乌司他丁促性素、绒促性素、乌司他丁等等重组品种增加重组品种增加菌体蛋白残留量、外源性菌体蛋白残留量、外源性DNADNA残留量残留量如如重组人生长激素、重组人胰岛素重组人生长激素、重组人胰岛素等。等。含不饱和脂肪酸的品种增加含不饱和脂肪酸的品种增加甲氧基苯胺值甲氧基苯胺值检查：检查：如如多烯酸乙酯（多烯酸乙酯（P P272272）等。等。第三十三页，共九十六页。原料药质量研究增设增设(zn sh)的特色项目的特色项目-甲氧基苯胺值甲氧基苯胺

23、值 含有含有不饱和脂肪酸不饱和脂肪酸的药物在生产和贮藏过程中的药物在生产和贮藏过程中易被氧化，初级氧化产物一般不稳定，又可进易被氧化，初级氧化产物一般不稳定，又可进一步生成一步生成醛类醛类等化合物，而甲氧基苯胺值（也等化合物，而甲氧基苯胺值（也称称p-茴香胺值）就是茴香胺值）就是ISO推荐推荐(tujin)的一种对此的一种对此类降解产物进行评价的手段，欧洲药典附录收类降解产物进行评价的手段，欧洲药典附录收载了此测定方法。药物的甲氧基苯胺值越高，载了此测定方法。药物的甲氧基苯胺值越高，说明其劣变程度越严重。说明其劣变程度越严重。 测定原理：测定原理：甲氧基苯胺甲氧基苯胺与与醛醛反应生成醇胺，醇反

24、应生成醇胺，醇胺脱水生成的胺脱水生成的醛亚胺醛亚胺可采用紫外可采用紫外-可见分光光度可见分光光度法在法在350nm波长处测定。波长处测定。 第三十四页，共九十六页。原料药质量研究增设有效项目指标增设有效项目指标(zhbio)-甲氧基苯胺值甲氧基苯胺值 注意：注意： 甲氧基苯胺试剂为无色结晶，具有一定毒性，使用时甲氧基苯胺试剂为无色结晶，具有一定毒性，使用时应避免接应避免接触皮肤触皮肤，一旦失误，需用水冲洗，一旦失误，需用水冲洗1515分钟以上。甲氧基苯胺的分钟以上。甲氧基苯胺的冰醋酸溶液不稳定，冰醋酸溶液不稳定，需当天配制使用需当天配制使用。以异辛烷作空白做基线。以异辛烷作空白做基线校正时，如

25、果测得的甲氧基苯胺冰醋酸溶液的吸光度超过了校正时，如果测得的甲氧基苯胺冰醋酸溶液的吸光度超过了0.20.2，则需重新配制试剂。则需重新配制试剂。 供试品溶液中加入供试品溶液中加入0.250.25的的4-4-甲氧基苯胺冰醋酸溶液后应注甲氧基苯胺冰醋酸溶液后应注意意避光避光，在，在350nm350nm波长处的吸光度随时间的延长缓慢增加，需波长处的吸光度随时间的延长缓慢增加，需准确放置准确放置1010分钟后测定，尽量减小误差。分钟后测定，尽量减小误差。 本试验受水分影响较大本试验受水分影响较大(jio d)(jio d)，样品及试剂中水分的存在会导致反，样品及试剂中水分的存在会导致反应不完全，测定值

26、偏低，当样品中水分含量超过应不完全，测定值偏低，当样品中水分含量超过0.1%0.1%时，可按时，可按10g10g样品加样品加1 12 g2 g无水硫酸钠无水硫酸钠的比例脱除水分后测定。另外，应取的比例脱除水分后测定。另外，应取用用新开启包装新开启包装的供试品。的供试品。增设的特色增设的特色(ts)项目项目-甲氧基苯胺值甲氧基苯胺值 第三十五页，共九十六页。原料药质量研究2-2-乙基己酸乙基己酸 -内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素对生产工艺过程对生产工艺过程(guchng)(guchng)中使用中使用2-2-乙基乙基己酸己酸的原料，增加此项检查，采用气相色谱法测定；方法增订的原料，增加此项检查，采用

27、气相色谱法测定；方法增订为附录为附录20102010年版药典二部（附录年版药典二部（附录 L L）；）； 如如: :头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄西林钠头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄西林钠等。等。第三十六页，共九十六页。原料药质量研究2-2-乙基己酸乙基己酸 勘误：勘误： -内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素对生产工艺过程中使用对生产工艺过程中使用2-2-乙基己酸乙基己酸的的原料，增加此项检查，采用气相色谱法测定；方法增订原料，增加此项检查，采用气相色谱法测定；方法增订(zngdng)(zngdng)为附录为附录20102010年版药典二部（附录年版药典二部（附录 L L）；

28、）； 如如: :头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄西林钠头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄西林钠等。等。勘误：勘误：第三十七页，共九十六页。原料药质量研究 目前中国不仅接受了目前中国不仅接受了ICHICH对化学药品中残留溶剂控制对化学药品中残留溶剂控制的理念，而且结合中国国情，建立了具有的理念，而且结合中国国情，建立了具有(jyu)(jyu)中国中国特色的残留溶剂检查方法。特色的残留溶剂检查方法。 中国药典中国药典20052005版中，对残留溶剂的分类及限度标准已经版中，对残留溶剂的分类及限度标准已经与与ICHICH的要求完全一致，但仅在附录中作为原则性统一要求。的要求完全一致

29、，但仅在附录中作为原则性统一要求。 中国药典中国药典20102010版中，原料药要求在各论项下根据其生产工艺制版中，原料药要求在各论项下根据其生产工艺制定残留溶剂检查方法定残留溶剂检查方法 抗生素原料药几乎所有品种均在各论项下增订了详细的残留溶剂抗生素原料药几乎所有品种均在各论项下增订了详细的残留溶剂检查方法检查方法p 从附录走向各论从附录走向各论残留残留(cnli)溶溶剂剂第三十八页，共九十六页。原料药质量研究 如：头孢泊肟酯如：头孢泊肟酯 残留溶剂残留溶剂 照残留溶剂测定法（附录照残留溶剂测定法（附录 P P）测定。）测定。 甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、异丙醇、丁酮、乙酸乙酯、四氢呋喃甲醇

30、、乙腈、丙酮、二氯甲烷、异丙醇、丁酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙酸丁酯、乙酸丁酯、1,2-1,2-二氯乙烷、乙酸异丙酯、苯、四氯化碳、环己烷二氯乙烷、乙酸异丙酯、苯、四氯化碳、环己烷、二氧六环、甲基异丁基酮、吡啶、二氧六环、甲基异丁基酮、吡啶(bdng)(bdng)、甲苯、甲苯 色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 略略 内标溶液的制备内标溶液的制备 取正丙醇适量，用二甲基亚砜稀释制成每取正丙醇适量，用二甲基亚砜稀释制成每1ml1ml中约含中约含200g200g的溶液，作为内标溶液。的溶液，作为内标溶液。残留残留(cnli)溶剂溶剂第三十九页，共九十六页。原料药质量研究残留残留(cnl

31、i)(cnli)溶剂检查方法及验证溶剂检查方法及验证 ！ 除正文已明确列有除正文已明确列有“残留溶剂残留溶剂”检查的品种必检查的品种必须依法进行检查外，其他未在须依法进行检查外，其他未在“残留溶剂残留溶剂”项项下明确列出的有机溶剂与未在正文中列有此项下明确列出的有机溶剂与未在正文中列有此项的品种，如生产过程中引入或产品中残留有机的品种，如生产过程中引入或产品中残留有机溶剂，均应按附录溶剂，均应按附录“残留溶剂测定法残留溶剂测定法”检查并检查并应符合相应应符合相应(xingyng)溶剂的规定溶剂的规定第四十页，共九十六页。原料药质量研究 检测方法进行了相应的调整：检测方法进行了相应的调整： 顶空

32、进样甲烷气体顶空进样甲烷气体(qt)(qt)，记录死时间，记录死时间(t(t0 0) ) 顶空进样供试品溶液，记录色谱图，按公式计算诸色谱峰的保留时间顶空进样供试品溶液，记录色谱图，按公式计算诸色谱峰的保留时间( ( t tR R ) )相对于参考物质保留时间相对于参考物质保留时间( t( tR R ) )的相对调整保留时间的相对调整保留时间( ( Relative adjustment retention timeRelative adjustment retention time，RARTRART) )法替代法替代RRTRRT法法 tR为组分的保留时间为组分的保留时间;tR为参比物的保留时

33、间。为参比物的保留时间。 t0为为甲烷甲烷保留时间。保留时间。00ttttRARTRR残留残留(cnli)溶溶剂剂第四十一页，共九十六页。原料药质量研究 检测方法选择：检测方法选择： 直接进样？顶空进样？等温？程序升温？限度比较？直接进样？顶空进样？等温？程序升温？限度比较？对照品法？标准对照品法？标准(biozhn)(biozhn)加入法？内标？外标？加入法？内标？外标？ 验证项目确定验证项目确定： 回收试验？最低定量限？最低检测限？线性？耐用性回收试验？最低定量限？最低检测限？线性？耐用性试验？试验？残留溶剂方法残留溶剂方法(fngf)建立、验证与常见问题建立、验证与常见问题第四十二页，共

34、九十六页。原料药质量研究 检测方法选择：检测方法选择： 直接进样？顶空进样？等温？限度比较？对照品法？直接进样？顶空进样？等温？限度比较？对照品法？标准加入法？内标？外标？标准加入法？内标？外标？ 验证验证(ynzhng)(ynzhng)项目确定项目确定： 回收试验？最低定量限？最低检测限？线性？耐用性回收试验？最低定量限？最低检测限？线性？耐用性试验？试验？残留溶剂方法建立残留溶剂方法建立(jinl)、验证与常见问题、验证与常见问题第四十三页，共九十六页。原料药质量研究原始记录较常发现的问题原始记录较常发现的问题(wnt)(wnt) 连带问题：连带问题：按无水无溶剂计算按无水无溶剂计算残留溶

35、剂残留溶剂(rngj)方法建立、验证与常见问题方法建立、验证与常见问题第四十四页，共九十六页。原料药质量研究高聚物高聚物凝胶色谱法（凝胶色谱法（20102010年版新增的年版新增的1919个标准个标准(biozhn)(biozhn)）原料原料 制剂制剂 头孢唑肟钠头孢唑肟钠 注射用头孢唑肟钠注射用头孢唑肟钠 头孢替唑钠头孢替唑钠 注射用头孢替唑钠注射用头孢替唑钠 头孢尼西钠头孢尼西钠注射用头孢尼西钠注射用头孢尼西钠 头孢噻吩钠头孢噻吩钠 注射用头孢噻吩钠注射用头孢噻吩钠 磺苄西林钠磺苄西林钠 注射用磺苄西林钠注射用磺苄西林钠 阿洛西林钠阿洛西林钠 注射用阿洛西林钠注射用阿洛西林钠 美洛西林钠美

36、洛西林钠 注射用美洛西林钠注射用美洛西林钠 氯唑西林钠氯唑西林钠 注射用氯唑西林钠注射用氯唑西林钠 苯唑西林钠苯唑西林钠 注射用苯唑西林钠注射用苯唑西林钠 普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素 第四十五页，共九十六页。原料药质量研究高聚物高聚物-高分子杂质高分子杂质-有关物质有关物质2010版：品种增加版：品种增加,方法多元化方法多元化 1、 自填柱和商品玻璃柱：填料常用自填柱和商品玻璃柱：填料常用葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶G-10（Sephadex G 10）；短柱子的使用，减少分离时间）；短柱子的使用，减少分离时间 2、 商品凝胶柱商品凝胶柱TSK-GEL G2000SWXL ：头孢地嗪（北京所：头孢地

37、嗪（北京所） 3、ODS柱，聚合物柱，聚合物-氨苄西林钠舒巴坦钠（浙江所氨苄西林钠舒巴坦钠（浙江所) 4、柱切换、柱切换（中检所），实现凝胶色谱（中检所），实现凝胶色谱(s p)与反相色谱与反相色谱(s p)的的统一统一第四十六页，共九十六页。原料药质量研究盐酸盐酸(yn sun)头孢替安聚合物分析方法的比较头孢替安聚合物分析方法的比较Sephadex G-10系统系统(xtng)TSK-Gel G2000swxl系统系统(xtng) 0.8ml/min第四十七页，共九十六页。原料药质量研究头孢羟氨苄高分子杂质头孢羟氨苄高分子杂质(zzh)分析图谱分析图谱Sephadex G-10系统系统(x

38、tng)TSK-Gel G2000swxl系统系统(xtng) 0.8ml/min1 - 头孢羟氨苄；2 - 高分子杂质第四十八页，共九十六页。原料药质量研究供注射用原料供注射用原料(yunlio)(yunlio)可见异物检查可见异物检查 头孢他啶：头孢他啶：取本品取本品5 5份，每份份，每份3.0g3.0g，加，加1%1%碳酸钠溶液（经碳酸钠溶液（经0.45m0.45m滤膜滤过）滤膜滤过）溶解溶解(rngji)(rngji)，依法检查（附录，依法检查（附录 H H），应符合规定。），应符合规定。 头孢地嗪钠：头孢地嗪钠：取本品取本品5 5份，每份份，每份2.02.0g g，分别加，分别加微粒

39、检查用水微粒检查用水溶解，依法检查（附溶解，依法检查（附录录 H H），应符合规定。），应符合规定。第四十九页，共九十六页。原料药质量研究有些品种如碱性药物与玻璃容器久置起反应有些品种如碱性药物与玻璃容器久置起反应(fnyng)(fnyng)，产生白点、白块和玻璃屑，产生白点、白块和玻璃屑有些品种如甲硝唑等与重金属发生反应产生不有些品种如甲硝唑等与重金属发生反应产生不溶物溶物有些品种如喹诺酮类药物对金属设备产生腐蚀有些品种如喹诺酮类药物对金属设备产生腐蚀，易有金属屑，易有金属屑有些品种如胰岛素等提取的生化大分子易产生蛋有些品种如胰岛素等提取的生化大分子易产生蛋白沉淀白沉淀有些品种如头孢噻肟钠等

40、成盐不完全，溶解度有些品种如头孢噻肟钠等成盐不完全，溶解度太低，产生白点、白块太低，产生白点、白块引发不合格的部分引发不合格的部分(b fen)(b fen)原原因因第五十页，共九十六页。原料药质量研究控制生产环境和过程中的污染控制生产环境和过程中的污染- -外源异物外源异物考察考察(koch)(koch)药物与容器的兼容性药物与容器的兼容性- -内源异物内源异物考察活性成分的稳定性以及与溶剂考察活性成分的稳定性以及与溶剂/ /添加添加物的稳定性物的稳定性- -内源异物内源异物药品的质量源于设计药品的质量源于设计是什么？从哪里来？为什么去不掉？安全是什么？从哪里来？为什么去不掉？安全性如何？限

41、度多少合适？性如何？限度多少合适？可见异物可见异物(yw)(yw)检查的目的检查的目的第五十一页，共九十六页。原料药质量研究供注射用原料不溶性微粒供注射用原料不溶性微粒(wil)(wil)检查检查 头孢他啶：头孢他啶： 取本品取本品3 3份，加份，加1%1%碳酸钠溶液（经碳酸钠溶液（经0.45m0.45m滤膜滤过）溶解制成滤膜滤过）溶解制成每每1ml1ml中含中含30mg30mg的溶液，依法检查的溶液，依法检查(jinch)(jinch)（附录（附录 C C），每），每1g1g样样品中含品中含10m10m以上的微粒不得过以上的微粒不得过60006000个，含个，含25m25m以上的微粒不得以上

42、的微粒不得过过600600个。个。 头孢曲松钠：头孢曲松钠： 取本品取本品3 3份，加份，加微粒检查用水微粒检查用水溶解并制成溶解并制成每每1ml1ml中含中含50mg50mg的溶液，的溶液，依法检查（附录依法检查（附录 C C），每），每1g1g样品中含样品中含10m10m以上的微粒不得过以上的微粒不得过60006000个，含个，含25m25m以上的微粒不得过以上的微粒不得过600600个。个。第五十二页，共九十六页。原料药质量研究 供注射用的原料药增加不溶性微粒检查以保证制剂能符合供注射用的原料药增加不溶性微粒检查以保证制剂能符合注射剂的要求注射剂的要求 由于光阻法测定结果仅与一定浓度范围

43、内样品溶液成正比由于光阻法测定结果仅与一定浓度范围内样品溶液成正比，故标准给出了不溶性微粒检查，故标准给出了不溶性微粒检查供试品溶液浓度供试品溶液浓度 制剂最多有制剂最多有1111个规格，个规格，均按均按每每1g1g样品中含样品中含1010 m m以上以上(yshng)(yshng)的微粒不得过的微粒不得过60006000粒，含粒，含2525 m m以上微粒不得过以上微粒不得过600600粒；粒； 强化不溶性微粒等项目强化不溶性微粒等项目(xingm)控制控制强化不溶性微粒强化不溶性微粒(wil)(wil)等项目控制等项目控制供注射用原料不溶性微粒检查供注射用原料不溶性微粒检查第五十三页，共九

44、十六页。原料药质量研究可见可见(kjin)(kjin)异物异物/ /不溶性微粒检查不溶性微粒检查 原始记录问题原始记录问题 不详细不详细 无趋势无趋势 缺方法摸索及分析缺方法摸索及分析 原始记录建议：逐支、固定原始记录建议：逐支、固定(gdng)(gdng)编号记录编号记录第五十四页，共九十六页。原料药质量研究 标标准统一、规范、明确、严谨准统一、规范、明确、严谨典型典型(dinxng)(dinxng)项目项目- -无菌检查方法无菌检查方法无菌检查是药物安全性风险控制的重要项目之一，但具无菌检查是药物安全性风险控制的重要项目之一，但具体检查方法以前标准中均不给出，由检验者自己摸索。体检查方法以

45、前标准中均不给出，由检验者自己摸索。抗生素阳性菌选用抗生素阳性菌选用(xunyng)(xunyng)不注意抗菌谱，存在试验的有效不注意抗菌谱，存在试验的有效性、一次成功率等问题性、一次成功率等问题对每个品种均要求经过验证，确定样品使用的最适宜对每个品种均要求经过验证，确定样品使用的最适宜方法方法（直接接种法？薄膜过滤法），最佳（直接接种法？薄膜过滤法），最佳溶解方式溶解方式、最佳、最佳冲洗冲洗液液、冲洗方式冲洗方式、敏感的、敏感的阳性对照菌阳性对照菌等操作关键因素，并等操作关键因素，并将上述内容按统一规范格式在质量标准中单独立项表将上述内容按统一规范格式在质量标准中单独立项表述详细。述详细。供

46、注射用原料供注射用原料(yunlio)(yunlio)无菌检查无菌检查第五十五页，共九十六页。原料药质量研究供注射用原料供注射用原料(yunlio)(yunlio)无菌检查无菌检查 头孢呋辛钠：头孢呋辛钠： 取本品取本品3 3份，加份，加1%1%碳酸钠溶液（经碳酸钠溶液（经0.45m0.45m滤膜滤过）溶解制成滤膜滤过）溶解制成每每1ml1ml中含中含30mg30mg的溶液，依法检查（附录的溶液，依法检查（附录 C C），每），每1g1g样品样品(yngpn)(yngpn)中含中含10m10m以上的微粒不得过以上的微粒不得过60006000个，含个，含25m25m以上的微粒不得过以上的微粒不得

47、过600600个个。 头孢曲松钠：头孢曲松钠： 取本品取本品3 3份，加份，加微粒检查用水微粒检查用水溶解并制成溶解并制成每每1ml1ml中含中含50mg50mg的溶液，依法的溶液，依法检查（附录检查（附录 C C），每），每1g1g样品中含样品中含10m10m以上的微粒不得过以上的微粒不得过60006000个个，含，含25m25m以上的微粒不得过以上的微粒不得过600600个。个。第五十六页，共九十六页。原料药质量研究无菌检查方法规范表述无菌检查方法规范表述(bio sh)(bio sh)方式举例方式举例氧氟沙星氯化钠注射液：氧氟沙星氯化钠注射液： 无菌无菌 取本品，经薄膜过滤法处理，用取本

48、品，经薄膜过滤法处理，用0.1%无菌蛋白胨无菌蛋白胨水溶液分次冲洗（每膜不少于水溶液分次冲洗（每膜不少于500ml），每管培养基中加入），每管培养基中加入0.1mol/L硫酸锰溶液硫酸锰溶液(rngy)1ml，以大肠埃希菌为阳性对照菌，以大肠埃希菌为阳性对照菌，依法检查（附录依法检查（附录 H），应符合规定。），应符合规定。乙酰谷酰胺注射液：乙酰谷酰胺注射液： 无菌无菌 取本品，经薄膜过滤法处理，用取本品，经薄膜过滤法处理，用0.1%0.1%无菌蛋白胨无菌蛋白胨水溶液分次冲洗（每膜不少于水溶液分次冲洗（每膜不少于100ml100ml），以金黄色葡萄球菌），以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，依法检查

49、（附录为阳性对照菌，依法检查（附录 H H），应符合规定），应符合规定。第五十七页，共九十六页。原料药质量研究注射剂制剂通则注射剂制剂通则(tngz)(tngz)变化重点提示变化重点提示 纯度纯度(chnd)(chnd)要高、杂质要少、生物要高、杂质要少、生物负荷要负荷要低低 从源头控制杂质的数和量、染菌的数和量、热从源头控制杂质的数和量、染菌的数和量、热原或细菌内毒素原或细菌内毒素 重点品种为营养性、无抑菌性、制剂有注射剂型重点品种为营养性、无抑菌性、制剂有注射剂型 注射剂用原料注重数量注射剂用原料注重数量 口服原料也要限定菌属种类（沙门氏菌）口服原料也要限定菌属种类（沙门氏菌）原料药微生物

50、限度原料药微生物限度(xind)(xind)检查检查第五十八页，共九十六页。原料药质量研究注射剂制剂通则变化注射剂制剂通则变化(binhu)(binhu)重点提示重点提示 胰岛素（制剂为注射剂）胰岛素（制剂为注射剂） 取本品取本品0.2g,依法检查（附录依法检查（附录 J），每），每1g中含细中含细菌数不得过菌数不得过300个。个。 胰酶（制剂为口服制剂，来源于动物提取胰酶（制剂为口服制剂，来源于动物提取(tq)(tq)）取本品取本品,依法检查（附录依法检查（附录 J），每），每1g供试品中细菌数不得过供试品中细菌数不得过10000个，霉菌和酵母菌总数不得过个，霉菌和酵母菌总数不得过100个。

51、并不得检出大肠埃个。并不得检出大肠埃希菌；每希菌；每10g供试品中不得检出供试品中不得检出沙门菌。沙门菌。原料药微生物限度原料药微生物限度(xind)(xind)检查检查第五十九页，共九十六页。原料药质量研究注射剂制剂注射剂制剂(zhj)(zhj)通则变化重点提示通则变化重点提示 必要时必要时应增设相应的安全性检查，如异常毒性、过敏反应、溶应增设相应的安全性检查，如异常毒性、过敏反应、溶血与凝聚、降压物质、热原或细菌内毒素等血与凝聚、降压物质、热原或细菌内毒素等 因为有些药物成分复杂、组分因为有些药物成分复杂、组分(zfn)(zfn)结构不清晰（如多组分结构不清晰（如多组分(zfn)(zfn)

52、抗生素动物来源提取的生化药等）、采用化学手段难于监控杂抗生素动物来源提取的生化药等）、采用化学手段难于监控杂质质异常毒性：有可能污染异常毒性：有可能污染生物毒性生物毒性物质的品种物质的品种（发酵）（发酵）过敏反应：有可能污染过敏反应：有可能污染异源蛋白异源蛋白或未知过敏反应物质的品种或未知过敏反应物质的品种 降压物质：有可能污染组胺、类组胺样物质的品种降压物质：有可能污染组胺、类组胺样物质的品种（腐败）（腐败）供注射用原料供注射用原料(yunlio)(yunlio)安全性检查安全性检查第六十页，共九十六页。原料药质量研究原料药的安全性指标原料药的安全性指标(zhbio)用化学手段不能控制组成、

53、杂质无法控制的生物用化学手段不能控制组成、杂质无法控制的生物来源品种均增加了来源品种均增加了异常毒性、过敏反应异常毒性、过敏反应等动物等动物(dngw)(dngw)试验：如试验：如硫酸鱼精蛋白硫酸鱼精蛋白等等第六十一页，共九十六页。原料药质量研究硫酸硫酸(li sun)鱼精蛋白鱼精蛋白 鱼精蛋白主要存在于鱼类的成熟精巢组织鱼精蛋白主要存在于鱼类的成熟精巢组织(zzh)(zzh)中，与中，与DNADNA紧紧密结合在一起，以核精蛋白的形式存在。它是一种小而简密结合在一起，以核精蛋白的形式存在。它是一种小而简单的球形碱性蛋白质，分子量在单的球形碱性蛋白质，分子量在1 1万以下，由万以下，由3030个

54、左右的个左右的氨基酸组成，其中氨基酸组成，其中2/ 32/ 3以上是精氨酸，几乎不含芳香族以上是精氨酸，几乎不含芳香族氨基酸。氨基酸。 吸光度吸光度 参照参照BP2008/EP6.0BP2008/EP6.0增订。根据本品组成，如果增订。根据本品组成，如果纯化步骤将核酸和杂蛋白均去除的话，在纯化步骤将核酸和杂蛋白均去除的话，在260260 280nm280nm的的波长范围内吸光度应很小，但考察结果远远超过波长范围内吸光度应很小，但考察结果远远超过BP2008/EP6.0BP2008/EP6.0所规定的所规定的0.10.1。 第六十二页，共九十六页。原料药质量研究增设溶液增设溶液(rngy)的颜色

55、检查项的颜色检查项成分复杂成分复杂(fz)(fz)、杂质无法控制但质量与颜色相关度、杂质无法控制但质量与颜色相关度高的品种增加高的品种增加溶液的颜色，溶液的颜色，如如糜蛋白酶糜蛋白酶等。等。第六十三页，共九十六页。原料药质量研究溶液(rngy)颜色检查的目的 自身自身(zshn)性质性质 纯度纯度 杂质杂质含量含量- -简易、直观、快速、综合的对有色杂质进行检查简易、直观、快速、综合的对有色杂质进行检查第六十四页，共九十六页。原料药质量研究稳定性差稳定性差质量与颜色质量与颜色(yns)联系紧密联系紧密的的安全性要求安全性要求(yoqi)高高用仪器用仪器(yq)定量测杂质困难定量测杂质困难检查颜

56、色的检查颜色的品种品种适宜进行溶液的颜色检查的原料第六十五页，共九十六页。原料药质量研究建立建立(jinl)方法时要考虑的问题方法时要考虑的问题溶剂溶剂(rngj)浓度浓度(nngd)稳定性稳定性临床安全性需要临床安全性需要工艺生产能力工艺生产能力同类产品水平同类产品水平溶液的溶液的颜色颜色第六十六页，共九十六页。原料药质量研究制订限度制订限度(xind)时要考虑的问题时要考虑的问题主成分主成分(chng fn)纯度纯度杂质杂质(zzh)的的含量含量稳定性稳定性数据数据临床安全性需要临床安全性需要工艺生产能力工艺生产能力同类产品水平同类产品水平颜色的颜色的限度限度第六十七页，共九十六页。原料药

57、质量研究应用色差计转换进口药注册(zhc)标准-举例溶液的颜色溶液的颜色 取本品0.5g，加水10ml溶解后，溶液应无色；如显色，与同体积的比色液（取棕红色贮备液1.8ml加8.2ml水，混匀）比较（中国(zhn u)药典2010年版二部附录 A第一法），不得更深。第六十八页，共九十六页。原料药质量研究色差计法应用(yngyng)举例说明：说明：企业标准按企业标准按EPEP检查，规定检查，规定“与与B5B5号标准比色液（号标准比色液（EPEP第第5 5版溶液的颜色）比较不得更深版溶液的颜色）比较不得更深”。因。因EPEP标准比色液从三标准比色液从三原色开始就与中国药典不同，如按此检查会有困难，

58、故原色开始就与中国药典不同，如按此检查会有困难，故采用色差计进行了对比测定，结果采用色差计进行了对比测定，结果EPEP的的B5B5号标准比色液的色号标准比色液的色差值（差值（E E* *=3.58=3.58）与中国药典）与中国药典BR3BR3号（号（E E* *=3.19=3.19）和）和BR4BR4号号（E E* *=4.46=4.46）的中值（）的中值（3.823.82）较为接近，约相当于）较为接近，约相当于BR3.5BR3.5号。号。因因BR3BR3号是取棕红色贮备液号是取棕红色贮备液1.5ml1.5ml加加8.5ml8.5ml水，水，BR4BR4号是取棕号是取棕红色贮备液红色贮备液2.

59、0ml2.0ml加加8.0ml8.0ml水配制而成，所以本次复核将棕红水配制而成，所以本次复核将棕红色贮备液色贮备液1.8ml1.8ml加加8.2ml8.2ml水配制了专用比色液，该比色液的水配制了专用比色液，该比色液的E E* *为为3.643.64，与，与EPEP B5B5号标准比色液的色差值几乎一致，按号标准比色液的色差值几乎一致，按此转换限度此转换限度(xind)(xind)既不改变质控原有水平，又方便在国内检既不改变质控原有水平，又方便在国内检验。验。 应用色差计转换进口药注册(zhc)标准-举例第六十九页，共九十六页。原料药质量研究药典采用现代药典采用现代(xindi)分析技术举例

60、分析技术举例 由于某些药物组成的复杂性，特别是一些由于某些药物组成的复杂性，特别是一些(yxi)(yxi)生物大分子药物生物大分子药物，使用传统的分析方法已经不能满足当前的质控需要，使用传统的分析方法已经不能满足当前的质控需要，20102010年年版药典逐渐改用现代分析技术。版药典逐渐改用现代分析技术。 首次运用首次运用毛细管电泳法毛细管电泳法 注射用抑肽酶：检查两个特定杂质注射用抑肽酶：检查两个特定杂质 注射用盐酸头孢吡肟：注射用盐酸头孢吡肟： 方法方法1-1-毛细管电泳法毛细管电泳法 N- N-甲基吡咯烷甲基吡咯烷 方法方法2-HPLC2-HPLC法（羧基柱，电导检测）法（羧基柱，电导检测

61、）第七十页，共九十六页。原料药质量研究毛细管电泳法检查毛细管电泳法检查(jinch)特定杂质特定杂质抑肽酶由上海药检所起草，参考抑肽酶由上海药检所起草，参考(cnko)(cnko)USPUSP增订增订去丙氨酸去丙氨酸- -去甘氨酸去甘氨酸- -抑肽酶抑肽酶和去丙氨酸抑肽酶和去丙氨酸抑肽酶检查项检查项色谱条件：石英毛细管分离柱，毛细管温度：色谱条件：石英毛细管分离柱，毛细管温度：3030，电极液：磷酸二氢钾，电极液：磷酸二氢钾溶液；分离压：溶液；分离压：12KV12KV；波长：；波长：214nm214nm结果：去丙氨酸抑肽酶结果：去丙氨酸抑肽酶RTRT为为0.990.99，去丙氨酸，去丙氨酸-

62、-去甘氨酸去甘氨酸- -抑肽酶抑肽酶RTRT为为0.980.98，两相关物间分离度，两相关物间分离度1.401.40，去丙氨酸，去丙氨酸- -抑肽酶与抑肽酶间分离度抑肽酶与抑肽酶间分离度1.241.24、抑、抑肽酶拖尾因子肽酶拖尾因子1.81.8第七十一页，共九十六页。原料药质量研究抑肽酶抑肽酶SDS-PAGESDS-PAGE凝胶电泳图凝胶电泳图 本品系本品系(pn x)(pn x)自牛胰或肺中提取、纯化制得的肽酶抑制剂。自牛胰或肺中提取、纯化制得的肽酶抑制剂。 采用采用SDS-PAGESDS-PAGE凝胶电泳的方法抑肽酶的有关物质，结果如图凝胶电泳的方法抑肽酶的有关物质，结果如图所示，都只有

63、一个条带。可能是抑肽酶和有关物质的分子量所示，都只有一个条带。可能是抑肽酶和有关物质的分子量相差不大，使用凝胶电泳不能将其分离相差不大，使用凝胶电泳不能将其分离第七十二页，共九十六页。原料药质量研究药典采用现代分析药典采用现代分析(fnx)技术举例技术举例首次首次(shu c)(shu c)运用运用柱串联技术柱串联技术- -抑肽酶抑肽酶 参照参照USP32USP32用三根用三根TSKTSK柱串联检查高分子蛋白质。采用柱串联检查高分子蛋白质。采用分子排阻色谱法，用三根色谱柱串联（分子排阻色谱法，用三根色谱柱串联（TSK-TSK-G4000SWXLG4000SWXL柱）柱温柱）柱温3535，流速，

64、流速1.0ml/min,1.0ml/min,二聚体二聚体RT0.9RT0.9，与主峰分离度，与主峰分离度1.41.4，主峰拖尾因子，主峰拖尾因子0.910.91。第七十三页，共九十六页。原料药质量研究药典药典(yodin)采用现代分析技术举例采用现代分析技术举例柱串联技术柱串联技术适用于适用于溶解度无明显差异但电荷上有明显差异溶解度无明显差异但电荷上有明显差异的难分离物质，的难分离物质，通过将一根通过将一根SCXSCX（阳离子交换阳离子交换）短柱与一根）短柱与一根MGMGC C1818长柱串联就可以长柱串联就可以简单达到将其分离的目的。简单达到将其分离的目的。原理：原理：有电荷差异的被分离物质

65、进入色谱柱串联系统后，带正电有电荷差异的被分离物质进入色谱柱串联系统后，带正电荷的物质（通常是碱性物质）会由于荷的物质（通常是碱性物质）会由于SCXSCX短柱的离子交换作用短柱的离子交换作用(zuyng)(zuyng)而被保留在短柱中，而带负电荷的物质（通常为酸性物质）而被保留在短柱中，而带负电荷的物质（通常为酸性物质）与中性物质则会毫无阻碍的通过短柱进入与中性物质则会毫无阻碍的通过短柱进入C18C18长柱中，从而成功分离长柱中，从而成功分离；然后由于；然后由于MGCMGC1818长柱中疏水性基团间的相互作用而对中性物质有强保长柱中疏水性基团间的相互作用而对中性物质有强保留作用，但对带负电荷物

66、质无强保留作用，这样带负电荷物质与中性物留作用，但对带负电荷物质无强保留作用，这样带负电荷物质与中性物质也简单被分开了质也简单被分开了 如果为了让峰形更好，各峰间分离更开，还可在阳离子交换短如果为了让峰形更好，各峰间分离更开，还可在阳离子交换短柱与柱与C C1818长柱前接一根长柱前接一根NHNH2 2短柱短柱（它可与阴离子发生交换作用），进（它可与阴离子发生交换作用），进行三根串联，也可以使带负电荷的酸性物质与中性物质达到更好的行三根串联，也可以使带负电荷的酸性物质与中性物质达到更好的分离效果。分离效果。 第七十四页，共九十六页。原料药质量研究药典采用药典采用(ciyng)现代分析技术举例现代分析技术举例首次运用首次运用肽图分析技术：肽图分析技术： 根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点，使用专一性较强的蛋白水解酶，一般为肽链内切酶，使用专一性较强的蛋白水解酶，一般为肽链内切酶，作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断，再通，作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断，再通过一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱，用此法过一定的分离检测手