003微生物限度检查法标准操作规程

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1、湖北长久瑞华药业有限公司GMP文件SOP-ZL-QT003-00微生物限度检查法标准操作规程第 13 页 共 13 页1. 目的制定微生物限度检查法标准操作规程。2. 适用范围适用于微生物限度检查。3. 职责QC人员：严格按本SOP进行操作。QC主管：监督检查本SOP执行情况。4. 内容细菌、霉菌及酵母菌计数4.1.简述细菌、霉菌、酵母菌计数是检测规定企业单位内的非灭菌制剂污染的活菌数量，是判定药品受到微生物污染程度的重要指标，也是对生产企业的药用原料、辅料、设备器具、工艺流程、生产环境和操作者的卫生状况进行卫生学评价的综合依据之一。一个细菌、霉菌和酵母菌菌落均可由一个或多个菌细胞生长繁殖形成

2、。因此供试品中所测的菌落数实际为菌落形成单位数（colony forming unitg，CFU），而不应理解为细菌、霉菌、酵母菌的个数。在进行本法测定时，必须严格按本法所规定的条件操作，以免产生实验误差。4.2.设备、仪器及用具：4.2.1. 设备 无菌室、净化工作台、生化培养箱（30-35。C）、电热恒温水浴锅、干燥箱、电冰箱、不锈钢双层立式消毒器、紫外灯等。4.2.2. 仪器及器皿：显微镜、电子分析天平、锥形瓶（250-300ml）、研钵、培养皿（90mm）、量筒、试管（18180mm）及塞、吸管、注射器、注射针头、载玻片、盖玻片、玻璃消毒缸等。4.2.3. 用具：大、小橡皮乳头，洁净工

3、作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、灭菌钢锥、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、白瓷盆、洗手盆、陶瓦盖（12cm）、实验记录纸等。4.3. 试液4.3.1. 消毒液0.1% 苯扎溴铵溶液：供洗手、擦拭操作台面用。75%乙醇溶液4.3.2. 稀释剂、试剂及配制： 4.3.2.1. 0.9%无菌氯化钠溶液：取氯化钠9.0g，加水使溶解成1000ml，121。C灭菌20min。4.3.2.2. 1%二盐酸二甲基对苯二胺试液：取二盐酸二甲基对苯二胺0.1g，加水10ml即得。需新鲜少量配制，于冷处避光保存，如试液变成红褐色，不可使用。4.3.2.3. 40%氢氧化钾试液

4、：取氢氧化钾40.0g，加水使溶解100ml。4.3.2.4. 碘试液：取碘6g与碘化钾5g，加水20ml使溶解，置密闭棕色瓶中储存。4.3.2.5. 盐酸试液：取盐酸8.4ml，加水使稀释成100ml。4.4. 培养基营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、明胶培养基、PDP琼脂、硝酸盐胨水培养基、蛋白胨水培养基、枸橼酸盐培养基、磷酸盐葡萄胨水培养基4.5. 操作方法4.5.1. 试验前准备4.5.1.1. 将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、试管、吸管（1ml、10ml）、量筒、稀释剂等移至传递窗内。每次试验所用物品必须事先计划，准备足够用量，避免操作中出入操作

5、间。4.5.1.2. 开启微生物室紫外灯和空调净化系统，并使其工作不低于30min。4.5.1.3. 关闭紫外灯。QC质检员进一更，用洗手液洗手，烘干。进入二更，换工作鞋，再用0.1% 苯扎溴铵溶液洗手，穿戴洁净无菌服、帽。4.5.1.4. 操作间先用酒精棉球擦手，再用乙醇擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口处周围，待干后用灭菌的手术镊或剪将供试品启封。4.5.2. 供试液的制备4.5.2.1. 固体供试品称取供试品10g（或液体适量）,置于匀浆杯或适当灭菌容器中,加入100ml0.9%无菌氯化钠溶液,用匀浆仪(30005000r/24min),振荡器或乳钵研磨等方法分散混匀,胃溶胶囊加稀释剂后置45

6、1水浴中振摇,肠溶胶囊加无菌磷酸盐缓冲液后先打碎再置451水浴振摇溶解。4.5.3. 细菌数测定4.5.3.1. 供试液的稀释4.5.3.1.1.取2-3支灭菌试管，分别加入9ml灭菌稀释剂（此时操作一般为：左手执试管并将塞打开、倾斜，右手执10ml吸管吸量，注意：勿在乙醇灯焰峰正上方操作，以免灯焰将供试液中菌细胞杀灭）。加完稀释剂后，试管塞应立即塞上。4.5.3.1.2.另取1支1ml灭菌吸管吸取1：10均匀供试液1ml，加入装有9ml0.9%无菌氯化钠溶液的试管中混匀，即为1：100供试液。以另一支1ml吸管，按上述操作，作1：1000的稀释。4.5.3.2.注平皿在进行10倍（或100倍

7、）递增稀释的同时，以该稀释级吸管，吸取每级稀释液各1ml置每个灭菌平皿中，每一稀释级注23个平皿（此时，一般为左手执平皿，将盖半开，右手执吸管），注平皿时，将1ml供试液慢慢全部注入平皿中，管内无残留液体，防止反流至吸管尖端部。取1支1ml吸管吸取0.9%无菌氯化钠溶液1ml注入2个平皿中，作为阴性对照。4.5.3.3.倾注培养基4.5.3.3.1.将预先配制好的培养基（细菌计数用营养琼脂，霉菌、酵母菌用玫瑰红钠琼脂培养基）熔化，置45。C水浴中，备用。4.5.3.3.2.将45。C左右的琼脂倾注上述各个平皿约15ml，以顺时针或反时针方向快速转动平皿（勿使培养基溢出）使供试液与培养基混匀，放

8、置，待凝。4.5.3.4. 培养将已凝固的平板倒置于培养箱中，细菌培养箱30-35，培养72h。霉菌、酵母菌培养箱23-28，培养120h。逐日观察菌落生长情况，点计菌落数，必要时，可适当延长培养时间至7天进行菌落计数并报告。4.5.3.5. 菌落计数将平板置菌落计数器上用标记笔点计，以透射光衬以暗色背景，仔细观察，计数。必要时借助于放大镜和显微镜观察。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。一般营养琼脂培养基用于细菌计数；玫瑰红纳琼脂培养基用于霉菌及酵

9、母菌计数；酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基用于酵母菌计数。在特殊情况下，若营养琼脂培养基上长有霉菌和酵母菌、玫瑰红纳琼脂培养基上长有细菌，则应分别点计霉菌和酵母菌、细菌菌落数。然后将营养琼脂培养基上的霉菌和酵母菌数或玫瑰红纳琼脂培养基上的细菌数，与玫瑰红纳琼脂培养基中的霉菌和酵母菌数或营养琼脂培养基中的细菌数进行比较，以菌落数高的培养基中的菌数为计数结果。4.5.4. 菌落报告规则4.5.4.1.细菌、酵母菌宜选取平均菌落数小于300cfu、霉菌宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告1g、1ml或10 c 供试品中所含

10、的菌数。如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。 4.6.结果报告4.6. 1.菌落数在100以内时，按实有数据报告。4.6. 2.菌落数大于100时，取两位有效数字报告，第三位按数字修约规则处理。4.6. 3.复试 供试品细菌数、霉菌及酵母菌数其中一项一次检验不合格，应重新取2倍包装量供试品，依法作单项复试两份，以三次检验结果的均值报告。附：培养基适用性检查取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各50-100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30-35

11、培养48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉各50-100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23-28培养72小时，计数；取白色念珠菌50-100cfu，注入无菌平皿中，立即倾注酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23-28培养72小时，计数。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。结果判定：若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。大肠埃希菌检查法5.1.简述大肠埃希菌属于有致病性大肠菌,可引起婴幼儿

12、、成人爆发性腹泻,为保证人体健康,口服药品必须检查大肠埃希菌。5.2.设备、仪器及用具无菌室、净化工作台、电热恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、微波炉或其他适宜加热装置、电热恒温水浴箱、离心机、薄膜过滤装置、电冰箱、匀浆仪、紫外灯、玻璃器皿等。5.3.试液、指示液0.9%无菌氯化钠溶液、无菌磷酸盐缓冲溶液（PH7.2）、无菌对氨基苯甲酸溶液、无菌聚山梨酯80氯化钠溶液、靛基质试液、V-P试液、革兰染色液、中性红指示液、亚甲蓝指示液、溴麝香草酚蓝指示液、酸性品红指示液、曙红钠指示液。5.4.培养基 营养肉汤、营养琼脂、胆盐乳糖（BL）培养基、4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸（MUG）培养基、乳糖培养基

13、、5%乳糖培养基、蛋白胨水培养基、磷酸盐葡萄糖胨水培养基、枸橼酸盐培养基、曙红亚甲蓝（EMB）琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基等。5.5.对照用菌液取大肠埃希菌的营养琼脂斜面培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基内，361。C培养18-24h后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至1：106，使对照菌液加入量含菌50-100个（一般用量为0.1ml），其菌数在做阳性的同时用营养琼脂注皿，经培养后计数确定。5.6. 操作方法5.6.1.增菌培养5.6.1.1.取胆盐乳糖（BL）培养基3瓶，每瓶各100ml。2瓶分别加入规定量的供试液，其中1瓶加入对照菌50-100个作阳性对照，第3瓶加入与供试液等量的稀释

14、剂作阴性对照。37。C培养18-24h。阴性对照应无菌生长。5.6.1.2.摇匀上述BL增菌培养液，以灭菌吸管取供试品胆盐乳糖增菌培养液、供试品阳性对照培养液、阴性对照培养液各0.2ml，分别加入含5mlMUG培养基的试管内，37。C培养，5h、24h后，将各管置366紫外灯下观察有荧光，然后加靛基质试液4-5滴于上述MUG管内，观察液面颜色。MUG阳性（有荧光）、靛基质阳性（玫瑰红色），报告检出大肠埃希菌；MUG阴性（无荧光）、靛基质阴性（无色），报告未检出大肠埃希菌。5.6.2. 分离培养5.6.2.1.如MUG阳性、靛基质阴性或MUG阴性、靛基质阳性时，将上述供试品BL增菌培养液轻轻摇动

15、，以接种环沾取1-2环培养液划线于曙红亚甲蓝（EMB）琼脂或麦康凯琼脂平板上，培养18-24h，观察EMB平板或麦康凯琼脂平板有无可疑大肠埃希菌菌落生长。当阳性对照的平板呈典型菌落生长时，供试品分离平板无菌落生长，或有菌落但不同于下表所列特征，可判未检出大肠埃希菌。培养基菌落形态曙红亚甲蓝琼脂（EMB）典型菌落呈紫黑色，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，有金属光泽。非典型菌落呈浅紫色、粉红色，或菌落中心紫色或无明显暗色中心，无金属光泽。麦康凯琼脂鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润。5.6.2.2.当阳性菌对照平板未生长或生长菌落经检查不是大肠埃希菌

16、，应研究原因，重新试验或重新制备供试液，以消除供试品抑菌成分的影响。有疑似菌落生长者，挑取可疑菌落做革兰染色、镜检及IMViC试验。5.6.3. 纯培养5.6.3.1.如生长菌落与上表所列特征相符合或疑似者，以接种针轻轻接触单个疑似菌落的表面中心，沾取培养物，应挑选23个以上疑似菌落，分别接种营养琼脂斜面，培养18-24h，作以下检查。5.6.3.2.如平板上无单个可疑菌落，但有可疑菌团（紫黑色，或有金属光泽），应沾取可疑菌团培养物少许，或重新取增菌培养液分区划线接种于EMB琼脂平板，培养18-24h，再挑选单个疑似菌落，纯培养，作以下检查。5.6.4. 革兰染色、镜检5.6.4.1.以接种环

17、沾取无菌水于洁净载玻片上,取上述疑似菌落的营养琼脂斜面新鲜培养物少许,制成均匀涂片,自然或微温干燥,再通过火焰23次(载玻片不烫手)固定。滴加结晶紫染液,染色1min,水洗,滴加碘液,媒染1min,水洗,以滤纸吸干余水。滴加95%乙醇,脱色2030s,水洗。滴加沙黄染液,复染1min,待干后,镜检。5.6.4.2.染色结果 革兰阳性菌呈蓝紫色;革兰阴性菌呈红色,大肠杆菌为革兰阴性短杆菌,或球杆菌状,亦有杆菌状。5.6.5. 注意事项5.6.5.1.玻片必须洁净，涂片菌量宜少，菌不可浓。否则，菌细胞成堆或连成片。染色反应难于判断，菌细胞形态难于观察。5.6.5.2.培养物的菌龄以16-24h为宜

18、。培养时间过长的革兰阳性菌易染成红色。5.6.5.3.脱色是关键，脱色时间不足，菌细胞易染成阳性，脱色时间过长易染成阴性。5.6.6. 生化试验5.6.6.1.乳糖发酵试验取上述斜面培养物，接种于乳糖发酵管，培养24-48h，观察产酸（指示剂为酸性品红者为红色；指示剂为溴麝香草酚蓝者为黄色），产气（小倒管内有气泡，气泡无论大小）。为避免迟缓发酵乳糖产生假阴性，亦可接种5%乳糖发酵管。绝大多数迟缓发酵乳糖的细菌，可于24h出现阳性。或适当延长培养时间。5.6.6.2.靛基质试验（I）取上述斜面培养物，接种于蛋白胨水培养基，培养24-48h，沿管壁加入靛基质试液数滴，轻轻摇动试管，液面呈玫瑰红色为

19、阳性，呈试剂本色为阴性。98%的大肠杆菌靛基质试验为阳性。一般24h即可出现阳性结果。常以无菌操作先从管中取出1或2ml培养液进行检查，如靛基质是阴性，余下的蛋白胨水培养物再培养24h，作靛基质试验。5.6.6.3.甲基红试验（M）取上述斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，培养482h，于培养液中加入甲基红指示液2-3滴（约每1ml培养液加指示液1滴），轻微摇动，立即观察，呈鲜红色或橘红色为阳性，呈黄色为阴性。5.6.6.4.乙酰甲基甲醇生成试验（V-P）取上述斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，培养482h，于2ml培养液中加入a-萘酚乙醇试液1ml，混匀，再加40氢氧化钾试

20、液0.4ml，充分振摇，在4h（通常在30min）内出现红色应判断为阳性，无红色反应为阴性。5.6.6.5.枸椽酸盐利用试验（C）取上述斜面培养物，接种于枸椽酸盐培养基斜面上，培养24天，培养基斜面有菌苔生长，培养基由绿色变为蓝色时为阳性，培养基颜色无改变、无菌苔生成为阴性。5.7. 结果判断5.7.1.当阴性对照试验呈阴性，阳性对照试验MUG呈阳性，供试品MUG阳性、靛基质阳性，报告检出大肠埃希菌。MUG阴性、靛基质阴性，报告供试品未检出大肠埃希菌。5.7.2.MUG阳性、靛基质阴性、IMViC试验为-+-、革兰阴性杆菌，报告供试品检出大肠埃希菌；MUG阴性、靛基质阳性、IMViC试验为+-

21、、革兰阴性杆菌，报告供试品检出大肠埃希菌。5.7.3.供试品培养物检查不符合5.7.2二项中的任一项，报告未检出大肠埃希菌。5.7.4.当阴性对照有菌生长或阳性对照未生成或生长菌落不是大肠埃希菌，不能作出检验报告。5.8. 注意事项5.8.1.MUG法不必从混合菌中分离单个菌落。除大肠埃希菌外，尚有部分志贺菌属、沙门菌属的菌株；以及少数革兰阳性球菌、杆菌和芽孢菌，其MUG为阳性。因此，在MUG培养基成分中增加了去氧胆酸钠的量，可排除革兰阳性菌的干扰。至于志贺菌、沙门菌在胆盐乳糖培养基中较难生长，即使有生长，本法能检出亦判为不合格。既然药品不得检出大肠埃希菌，更不允许检出志贺菌、沙门菌。5.8.

22、2.配制MUG培养基时，务必校正PH值，灭菌后PH不得过7.4，否则PH值偏高，MUG分解，本身则显荧光；分装MUG培养基的试管应挑选，试管、蛋白胨不得显荧光。5.8.3.培养时间 供试品培养液接种于MUG培养基中的培养时间，一般在5h、24h观察是否产生荧光，如荧光很微弱，不能准确判断时，可延长培养至48h再观察结果。由于大肠埃希菌各菌株间的GUD的活性不完全相同，对底物浓度反应的差异；培养基中选择因子的影响；培养时间、温度、PH的改变；大量竞争菌和样品本身物质成分的干扰等，对结果的判断亦有影响。5.8.4.结果观察 取供试品的MUG试验管、阳性对照管、阴性对照管同时在366nm紫外灯下观察

23、，阳性对照管应有较强蓝白色荧光，阴性对照管无荧光。供试品MUG管是否有荧光，应仔细观察比较，或将各管调换位置（阴性管居中），适当倾斜试管。如阳性对照管荧光强烈，影响供试品管与阴性对照管的观察时，亦可移去阳性对照管。5.8.5.药品中污染的大肠埃希菌，易受生产工艺及药物的影响。在曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂平板上的菌落形态特征时有变化，挑取可疑菌落往往凭经验，主观性较大，务必挑选2-3个以上菌落分别做IMViC试验鉴别，挑选菌落越多，检出阳性菌的机率越高，如仅挑选一个菌落做IMViC试验鉴别，则易漏检。5.8.6.在IMViC试验中，以灭菌接钟针沾取菌苔，首先接种于枸椽酸盐琼脂斜面上，然后接种于蛋

24、白胨水培养基、磷酸盐葡萄糖胨水培养基中。切勿将培养基带入枸椽酸盐琼脂斜面上，以免产生假阳性结果。枸椽酸盐利用试验培养时间，原订为2天，根据试验资料，发现培养3天后，枸椽酸盐利用试验产生阳性。仅培养2天是不够的，故试验培养时间改为24天。5.8.7.阳性对照试验是检查供试品是否有抑菌作用及培养条件是否适宜。阳性对照菌液的制备、计数及加入含供试品的培养基中等操作，不能在检测供试品的无菌室或净化台上进行，必须在单独的隔离间或净化台操作，以免污染供试品及操作环境。5.8.8.在各类供试品中检测大肠埃希菌及其他控制菌，按一次检出结果为准，不再抽样复验。检出的大肠埃希菌及其他控制菌培养物须保留1个月，备查

25、。 大肠菌群6.1.简述大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在，以该菌群的检出情况来表示药品中有否粪便污染。6.2.设备、仪器及用具无菌室、净化操作台、电热恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、微波炉或其他适宜加热装置、水浴箱、离心机、薄膜过滤装置、电冰箱、匀浆仪、紫外灯、玻璃器皿等。6.3.试液、指示液0.9%无菌氯化钠溶液、无菌磷酸盐缓冲溶液（PH7.2）等。6.4.培养基 营养肉汤、营养琼脂、乳糖胆盐发酵培养基、乳糖发酵培养基、曙红亚甲蓝（EMB）琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基等。6.5. 操作方法6.5.1取含适量（不少于10ml）的乳糖胆盐发酵培养基管3支，分别加入1:10的供

26、试液1ml（含供试品0.1g或0.1ml）、1:100的供试液1ml（含供试品0.01g或0.01ml）、1:1000的供试液1ml（含供试品0.001g或0.001ml），另取1支乳糖胆盐发酵培养基管加入稀释液1ml作为阴性对照。培养1824小时。6.5.2乳糖胆盐发酵培养基管若无菌生长或有菌生长但不产酸产气，判该管未检出大肠菌群；若产酸产气，应将发酵管中的培养物分别划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基的平板上，培养1824小时。6.5.3若平板上无菌落生长，或生长的菌落与下表所列的菌落形态特征不符或为非革兰阴性无芽孢杆菌，判该管未检出大肠菌群；若平板上生长的菌落与下表所列的菌落

27、形态特征相符或疑似，且为革兰阴性无芽孢杆菌，应进行确证试验。培养基菌落形态曙红亚甲蓝琼脂（EMB）紫黑色、紫红色、红色或粉红色，圆形，扁平或稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润。麦康凯琼脂鲜桃红色或粉红色，圆形，扁平或稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润。6.6确证试验6.6.1从上述分离平板上挑选45个疑似菌落，分别接种于乳糖发酵管中，培养2448小时，若产酸产气，判该乳糖胆盐发酵管检出大肠菌群，否则判未检出大肠菌群。6.6.2根据大肠菌群的检出管数，按下表报告1g或1ml供试品中的大肠菌群数。各供试品量的检出结果可能的大肠菌群数N（个/g或ml）0.1g或0.1ml0.01g或0.01ml0.00

28、1g或0.001ml+1000+-100N1000+-10N100-10注：“”代表检出大肠杆菌，“”代表未检出大肠杆菌。沙门菌7.1.简述沙门菌是一大群形态、生化性状及抗原结构相似的革兰氏阴性杆菌。7.2.设备、仪器及用具无菌室、净化操作台、电热恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、微波炉或其他适宜加热装置、电热恒温水浴锅、电冰箱、匀浆仪、紫外灯、玻璃器皿等。7.3.试液、指示液0.9%无菌氯化钠溶液等。7.4.培养基 营养肉汤、四硫磺酸钠亮绿培养基、胆盐硫乳琼脂(或沙门、志贺菌属琼脂)培养基和麦康凯琼脂（或曙红亚甲蓝琼脂）培养基、三糖铁琼脂培养基等。7.5. 操作方法7.5.1取供试品10g

29、或10ml，直接或处理后接种至适量（不少于200ml）的营养肉汤培养基中，用匀浆仪混匀，培养18-24小时。7.5.2取上述培养物1ml，接种于10ml四硫磺酸钠亮绿培养基中，培养18-24小时后，分别划线接种于胆盐硫乳琼脂（或沙门、志贺菌属琼脂）培养基和麦康凯琼脂（或曙红亚甲蓝琼脂）培养基的平板上，培养18-24小时（必要时延长至40-48小时）。若平板上无菌落生长或生长的菌落不同于下表所列特征，判供试品未检出沙门菌。培养基菌落形态胆盐硫乳琼脂无色至浅橙色，半透明，菌落中心带黑色或全部黑色或无黑色沙门、志贺菌属琼脂无色至淡红色，半透明或不透明，菌落中心有时带黑褐色曙红亚甲蓝琼脂无色至浅橙色，

30、透明或半透明，光滑湿润的圆形菌落麦康凯琼脂无色至浅橙色，透明或半透明，菌落中心有时为暗色7.5.3 若平板上生长的菌落与上表所列的菌落形态特征相符或疑似，用接种针挑选2-3个菌落分别于三糖铁琼脂培养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种，培养18-24小时，如斜面未见红色、底层未见黄色；或斜面黄色、底层无黑色，判供试品未检出沙门菌。否则应取三糖铁琼脂培养基斜面的培养物进行适宜的鉴定试验，确认是否为沙门菌。附表：微生物限度标准（单位：cfu/g）口服给药制剂细菌数限度霉菌和酵母菌数限度大肠埃希菌限度大肠菌群限度a.不含药材原粉的1000100不得检出b.含药材原粉的10000100不得检出100另：含动物组织（包括脏器提取物）及动物类原药材粉（蜂蜜、王浆、动物角、阿胶除外）的口服给药制剂每10g或10ml不得检出沙门菌。备注：含药材原粉的丸剂细菌数限度为30000.说明：霉变、长螨者，以不合格论。附件修订历史文件编码版本号修订内容变更描述修订日期生效日期SOP-ZL-QT003-0000参照中国药典2010版修订