一步一步教你读流式图:凋亡和坏死的区别

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1、一步一步教你读流式图:凋亡和坏死的区别2008-08-05 00:00 来源:丁香园 点击次数: 841 关键词: 流式图 调亡 坏死 区别 分享到: 收藏夹 腾讯微博 新浪微博 开心网下图为坏死图。坏死的位于G0/G1峰前的峰形为从左至右的反抛物线形。如下: 而APOptosis则是一个较为对称的峰。如下:.而有时凋亡和坏死同时存在。如下图:蓝色的为apo峰(第一个三角),而白色的为坏死峰。第二个三角为G0/G1峰。第三个为异倍体G0/G1峰。 实际上,很多时候我们诱导的凋亡峰不像上图那样明显,如下:原因要从实验的原理开始,到细胞状态,实验步骤,试剂效能等,一一分析。例如,某因素诱导的凋亡需

2、要较长时间,而我们培养时间还没到,就有可能不出凋亡峰;或是在早期凋亡是用PI染色做SUB-G1,凋亡率会不高,而用API法则更好地测出其凋亡率。编辑: famsking 一步一步教你读流式图:凋亡诱导2008-08-05 00:00 来源:丁香园 点击次数: 978 关键词: 流式图 教程 调亡诱导 分享到: 收藏夹 腾讯微博 新浪微博 开心网先发一张关于PI染色的uv诱导凋亡的图片,这是con:这是诱导凋亡的流式图,我们称之为sampl:那么怎么看这两张图呢?首先,我们要知道各个参数的意义。这在流式原理中有介绍。然后,我们要知道各个图之间的联系。大家看一下下面的图。R1主要代表粘连细胞R2主

3、要代表G2/M期细胞R3主要代表G0/G1期细胞R4主要代表s期细胞R5主要代表凋亡细胞“主要”是因为大家可以看到设的gate后各个gate中的细胞有位置重叠。FL2-W/FL2-A和FL2-A/COUNT之间的关系。这两张图的最大区别在于G0/G1期前面的亚G1峰。这个峰就是FL2-W/FL2-A图上的左下方的“小尾巴”,小尾巴越大,SUB-G1峰就越高。也就是说凋亡的越多。当然这需要跟整张图比较,就是选取mark后测量其gate%。编辑: famsking 一步一步教你读流式图:表型CD4CD82008-08-05 00:00 来源:丁香园 点击次数: 927 关键词: 表型CD4CD8

4、流式图 教程 分享到: 收藏夹 腾讯微博 新浪微博 开心网大鼠外周血T细胞CD亚群CD4/CD8比值所做的流式分析图右上角的图片是CD4和CD8的双荧光检测。右下象限是CD8单阳性,左上是CD4单阳,右上为二者双阳,左下为双阴。比例如图。剩下的二图为CD4、CD8直方图。实际上用刚才的双标也可以看出比例来。R1为淋巴细胞群体,是您的目的细胞群体,针对这一群细胞进行分析! 一步一步教你读流式图:sub-G1凋亡图2008-08-05 00:00 来源:丁香园 点击次数: 1851 关键词: 流式图 sub-G1凋亡图 教程 分享到: 收藏夹 腾讯微博 新浪微博 开心网凋亡都比较多,但遗憾的是与G

5、1峰分得不是很开,因此,Modfit分析的时候,会根据结果用统计学原理将它们分为Apo和G1,但这样可能掩盖真正的结果!建议做PI染色的时候,在PBS洗两次后,加入PC buffer,这是一种轻破膜剂,可以使断裂成小片断的DNA出细胞而降低其在FL2-Ad上的值,这样就容易区分G1和APO了。凋亡诱导,左边为对照,右边为凋亡组对照很好,cv值不错,凋亡率控制得也不错!凋亡非常明显,而且峰也很漂亮。唯一的美中不足就是凋亡峰的位移稍低,如能用PC buffer 轻破膜,效果将更漂亮!请查阅cnki中关于Sub-G1法测凋亡的关于PC buffer的使用方法(作者:龚建平 关键字:Sub-G1查),

6、将对实验有很大帮助!细胞周期分析,modifit ,不知凋亡细胞为什么没和G1期分开?右图为对照,左图实验组作者用的是muticycle,所以不太能确定。但是不管是哪家的软件,都是按一定的数学模型(公式)结合数据进行模拟,所以在数据分布不够典型的时候是会产生很大误差的。就像你的结果,我根据经验判断是modfit强行进行subG1计算,其实算进去的基本上都不是凋亡细胞,但是它没有模糊概念,生硬地套用了subG1的模拟方程,所以才有“subG1”的出现。如果你对sample只进行one cycle模拟,结果会不一样的。建议,除非subG1和G1分隔干净利落,否则不要随便应用cycle软件进行模拟,否则大部分结果是错误的,cycle软件本质上说适合作周期分析,作AP分析有较为严格的限制。直接拉水平门就可以了。

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