测食道癌贲门癌和非小细胞肺癌的预后Dr.Li

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1、文档供参考，可复制、编制，期待您的好评与关注！ 血清胸苷激酶1是一个评估食道癌，贲门癌和非小细胞肺癌的预后因子Zhishan Li MD, Yinghong Wang MS, Jie He MD, PhD, Jie Ma, MD, PhD, Liang Zhao MD, Hengqi Chen MD, Ning Li MD, Ji Zhou MS, Ellen He PhD, Sven Skog PhD.摘要：目的：研究血清胸苷激酶1（STK1）对检测食道癌，贲门癌和非小细胞肺癌患者的预后效果。方法：采集食道癌（101例），贲门癌（39例）和非小细胞肺癌（157例）患者的血清，并用增强发光免疫

2、点印迹法测定STK1的浓度；95例健康人血清做对照。同时研究了49例非肿瘤性肺病患者的血清（良性肿瘤，肺结核，肺炎和其他类型）。结果：食道癌，贲门癌和非小细胞肺癌患者的STK1浓度和阳性率显著高于健康人群对照组（p=0.01）。食道癌患者的STK1的浓度均值同肿瘤分期（0+I-II，0+I-III+IV，pT4,p=0.021)显示相关性，但是同肿瘤病理分级没有这种相关性。贲门癌患者的STK1浓度的均值与肿瘤分级没有相关性。由于贲门癌患者进入癌症晚期，没有其肿瘤分期和T值的数据。非小细胞肺鳞癌患者的STK1浓度均值明显高于肺腺癌患者(p=0.024)。非小细胞肺癌患者的STK1浓度与临床分级(

3、G1-G3, p=0.006)，T值(T1-T2, p=0.001)，临床分期(I-III, p=0.035)和肿瘤大小(p=0.030)表现相关性。同时这些非小细胞肺癌复发患者的STK1浓度升高并阳性患者数量也较多。 非小细胞肺癌临床I和II期患者， STK1水平高于2pM与STK1水平低于1pM的患者比较，复发和死亡率有升高的趋势。结论：STK1是有用的标记物评估食道癌，贲门癌和非小细胞肺癌患者预后关键词: 血清胸苷激酶1，STK1， 预后，肺癌，食道癌，贲门癌1. 前言：中国的癌症发生率为每100,000人群中为200人。肺癌和食道癌是两种常见恶性肿瘤，发生率分别是34.7和33.5，死

4、亡率分别是17.5和17.4；半数患者可被治愈。当这些患者被确诊为癌症，多数患者已是肿瘤晚期，约30%患者已经出现癌转移， 此时，手术对癌转移患者已非良策，而需改用化疗。因而，鉴别患者是否进入转移阶段或是处于肿瘤早期对于指导抗癌治疗显得十分必要。虽然可以参考不同的影像技术，如CT，PET 和MR，但使用其他的辅助诊断也十分必要。目前已有一系列肿瘤标记物应用于临床中，却只有少部分能满足临床要求。比如，已用于非小细胞肺癌检测的标记物CEA1-4，CA1251,5，Cyfra21-16和p533对于预测抗癌疗效有其局限性，并尚存争议7；VEGF不能预测肺癌患者的预后8；Cyfra21-1和CA125

5、甚至对预后有负面影响；通过多变量统计学分析，只有TNM分期和COX-2表达可评估非小细胞肺癌患者生存率9； CEA和Cyfra21-1是用于食道癌检测的标记物，但是p53是较这两个标记物更为有效的预后指数10；CEA，CA-125，CA27.29和AFP是已在临床中使用的胃癌/贲门癌血清肿瘤标记物11。然而，与影像技术检测比较，这些常用肿瘤标志物的检测水平会出现波动变化12，因而寻求新的更为灵敏，特异性更好的预后标志物就显的尤为重要。本研究中我们第一次评估了血清胸苷激酶1（STK1）作为食道癌和贲门癌患者的预后指数的意义，也重新评估了STK1作为非小细胞肺癌患者的可靠的预后指数13。2 患者和

6、方法2.1 患者收集中国医学科学院癌症研究所医院胸外肿瘤科（北京）2006年至2008年收集中国医学科学院癌症研究所医院胸外肿瘤科297例，经组织学诊断为食道癌（101例），贲门癌（39例）和非小细胞肺癌(157例)患者术后的血清。根据临床TNM标准将患者进行肿瘤分期和病理分级。非小细胞肺癌患者术前按照病理类型为：77例鳞癌 （SCC），80例腺癌（AC）。61例肺癌和14例贲门癌患者手术后2.5年后跟踪监视其复发性和死亡率。95例健康人血清作为对照。为了比较非肿瘤性患者STK1的水平，另又收集49例非肿瘤性肺病患者的血清（包括良性17例，肺结核10例，肺炎15例及其他类型7例）。所有患者血清

7、收集于非肝素试管内。 健康人样本在早餐前采集，保存于-20 C直到检测。所有的实验遵循1983年的赫尔辛基宣言。2.2 增强免疫印迹法测定STK1浓度增强免疫印迹法的操作步骤见参考文献所述15。简而言之， 3l的血清点样于硝酸纤维素膜上（Hyband-C，购于Amersham公司），加入抗-TK1IgY抗体（华瑞同康，深圳，中国）并孵育2小时； 然后加生物素化的二抗并在常温下孵育40分钟；接着将膜浸泡于含链菌亲和素-辣根过氧化酶的TBS缓冲液；再加入ECL发光试剂；斑点的强度采用CIS-1型化学发光成像分析系统检测（深圳华瑞，深圳，中国）。2.3 统计学方法采用统计学Student T-tes

8、t，Chi-square，Mann-Whitney， 单向-ANOVA进行分析，p0.05) (表2)。但临床分期0+I期和III+IV期（0+I期-II期，p=0.03；0+I期-III+IV期，p=0.005）, T1期和T4期（p=0.021）患者之间存在显著性差异（表2）。N1期患者的STK1浓度比N0期患者高30%，接近统计学意义差别 (p=0.065)(表2)。表2：食道癌患者的STK1浓度与其病理分级，临床分期，T-值，淋巴转移情况的关系图中数值为：平均值标准偏差贲门癌患者病理分级主要集中于G2-3级，临床分期III-IV期，基本属于癌症晚期（表3）。STK1浓度在G1和G3，I

9、II期和IV期，T3和T4期患者之间没有显著差异。现阶段的研究没有贲门癌I期和II期，T1和T2期患者的STK1浓度，因此还不能够比较STK1与临床分期和T值之间的关系。N0期患者的平均STK1浓度较N1期高，却无显著性差异（表3）。表3：贲门癌患者的STK1浓度与其病理分级，临床分期，T-值，淋巴转移情况的关系图中数值为：平均值标准偏差在非小细胞肺癌患者中STK1浓度显示出从病理分级G1到G3 (p=0.021), 临床I期到III期，T1到T2(p=0.002) 有统计学意义的差别。STK1浓度与肿瘤大小之间存在明显相关性（表4）。从N0到N1+N2期，STK1浓度也明显升高（表4）。表4

10、：非小细胞肺癌患者(NSCLC)的STK1浓度与其病理分级，临床分期，T-值，淋巴转移情况的关系图中数值为：平均值标准偏差3.3 STK1与肺鳞癌和肺腺癌之间的相关性非小细胞肺鳞癌和肺腺癌患者之间的STK1浓度（p=0.024）显示有统计学意义的差别，STK1阳性率(p=0.055) 也接近有意义的差别（表1）。肺鳞癌患者的高水平STK1与大肿瘤（4.62.4 cm）存在相关性（肿瘤大小与肺腺癌患者的相比3.72 cm）,有统计学意义差别(p=0.004)。3.4 STK1与癌症复发性和死亡率之间的相关性我们对部分肺癌和贲门癌患者术后2.5年进行了跟踪监测。复发患者术前STK1水平较无复发患者

11、高54%（表5），STK1阳性率也较高（表6）。根据对患者术后2.5年之间的监测，高水平和低水平STK1患者之间没有差异（表6）。肺癌I-II期STK1值高于2pM的患者较STK1值低于1pM的有较高的复发率和死亡率（表7）。由于有限数量患者数，结果没有统计学意义，但综合来说术前高浓度的STK1还是预示了较高的复发率和死亡率。表5：非小细胞肺癌和贲门癌患者术前STK1的浓度与其复发率的关系图中数值为：平均值标准偏差表6：非小细胞肺癌患者术前的STK1阳性率与其复发率和死亡率的关系表7：临床I-II期NSCLC患者的STK1水平与其复发性的关系3.5 STK1与非肿瘤肺病患者之间的相关性良性肿瘤

12、患者的STK1浓度较非小细胞肺癌患者高，但无统计学意义上的区别（p=0.446，表1）。肺结核患者的STK1水平与非小细胞肺癌患者相近，肺炎患者的STK1水平较非小细胞肺癌患者高（表1），没有统计学意义差异。其他类型肺病患者的STK1浓度与非小细胞肺癌患者没有显著差异，但是STK1阳性率% 有意义的降低（表1）。4 讨论在过去的40年中很多研究都致力于寻找肿瘤早期阶段的血清肿瘤标记物，如今影像技术灵敏度的提高有可能取代这些血清标记物。然而，这些技术都还未能在肿瘤非常小的时候检测到。再者，影像技术不能区分肿瘤生长阶段，而这对于预后的评估有着十分重要的意义。血清肿瘤标记物是从肿瘤中释放出来的化合物

13、，通过灵敏方法的检测可以在早期阶段预测肿瘤的存在。血清标记物在一定程度上也可以反映出肿瘤患者的进展情况，比如临床分级和病理分期，这对预后十分有用。早期肺腺癌患者手术后若血清CEA的提高则表明手术疗效差5，虽然这类情况达80%4，但没有数据显示患者术前血清CEA与癌复发风险之间的关系1；高水平的CA125预示术后的高复发风险（95%）。然而，血清CEA和CA125对于患者术后的跟踪监测，其灵敏度和特异性并不足以可以评估肿瘤的复发和预后。利用RT-PCR技术对于肺癌早期CEA mRNA的测定可以帮助鉴别肺癌是否发生转移，91%活检和53%肺癌细胞（17例/29例）可以检测到CEA mRNA。NSE

14、和SCC的灵敏度较CEA，CA125和Cyfra125低30%。P53，CEA，Cyfra21-1，CA-125和HFP已在临床中作为食道癌，胃癌，贲门癌患者的预后和疗效监控的标记物使用，但表现出不同的结果。CA199，CA724和CEA类的血清标记物是属于癌胚源类抗原，这类标记物也可用于其他肿瘤，并无特异性。尽管这些血清肿瘤标记物表现出不同的结果，但是对于癌转移患者来说，它们仍可用来评估制定最佳疗效时间。本文中我们评估了使用TK1作为食道癌，贲门癌和肺癌患者术后预后血清标记物的意义。在过去的20年血清TK1活性一直作为，特别是淋巴癌和白血病17,18或部分实体肿瘤如乳腺癌19的预后因子。最近

15、我们研究并采用TK1抗体来测定血清TK1的浓度20，研究发现TK1浓度是较其活性更为有用的标记物，比如，TK1的浓度可以用于对几乎所有实体肿瘤的检测16。胸苷激酶（TK）是一种参与DNA合成的嘧啶新陈代谢途径的酶，属于合成补救途径，TK1与细胞周期密切相关。人体细胞中的TK以细胞质TK（TK1）和线粒体TK（TK2）形式存在。TK2的活性只有TK1的5%，并只存在于静止细胞中21,22。TK1水平在健康人中几乎检测不到17,19,23。TK1 的C末端区含有一个特异的序列；KEN已经被证实是TK1在有丝分裂降解的一个信号，是通过后期细胞分裂启动复合体/环化素cdh1调停的通路进行的24。这种出

16、现在哺乳动物中，细胞周期调节泛素-蛋白酶体通路是负责一系列关键蛋白质的降解，例如：cdc20, cdc25A和糖核苷酸还原酶。TK2不受细胞周期调控21。TK1活性与高增值紧密相关，可以用来作为细胞增殖标志，进而是恶性肿瘤的有效标志物18,20,22,24-27。TK1活性已被证实是不同血液癌患者肿瘤细胞增殖的可靠标志物15,17-19,23,28，但在实体肿瘤中还较少应用15,23。在本文中，我们首次研究了STK1作为食道癌和贲门癌患者预后的意义。以STK1阈值2pM为基准，两类肿瘤都有较高的STK1灵敏度，分别为62.4%和69.2%。最近的研究表明：11278例健康人的STK1值低于1p

17、M29，STK1的阈值降低到1pM将进一步提高STK1的灵敏度。另外，对250例癌症患者和761例健康人的研究结果显示，本文中使用的STK1分析方法具有高灵敏度，高特异性，ROC值达到0.94130。STK1不仅有高灵敏度，而且还与食道癌患者的临床分期和肿瘤分级密切相关。我们的结果证实了STK1是一种有效的检测食道癌患者的预后指数和细胞增殖类标记物。STK1与贲门癌患者肿瘤病理分级不存在相关性，STK1是否与临床分期相关还有待探讨。由于贲门癌患者都为晚期癌症患者，无临床早期和低T值患者，因此无法对与临床分期的关系进行比较。最近研究显示31，胃癌患者（一种与贲门癌非常接近的癌症）的STK1浓度较

18、健康人，癌转移患者较癌未转移患者都显著增高。STK1的高浓度和其高灵敏度可以证实STK1是检测胃癌/贲门癌患者的可靠肿瘤增殖类标志物31，可评估患者的预后。早先已研究了STK1是一种检测非小细胞肺癌患者的预后（250例）因子13。STK1浓度随T值增高而显著增高 （T1-T2, T1/T2 -T3/T4），与肿瘤大小和浸润性显著相关。STK1也和肿瘤分期存在着部分相关性（无数据显示I期-II期，但I+II-III）。现阶段研究还没有无肿瘤病理分级数据。另外STK1浓度在鳞癌和腺癌患者之间无显著不同。本研究我们也证实了早先研究的关于STK1与T值和临床分期的结果13，例如：STK1与T值（T1-

19、T4），与肿瘤大小（肿瘤大于3cm有高水平的STK1），与临床分期(I-III)密切相关。本研究新的数据显示STK1与肿瘤病理分级也密切相关（G1-G3）。同时我们研究发现鳞癌和腺癌之间存在显著不同，而早先却未有此报导13。现阶段和早先的研究都证实了STK1可以评价非小细胞肺癌患者的预后，是一种可靠的肿瘤增殖类标志物。我们对部分肺癌和贲门癌患者术后30个月进行了跟踪，调查显示了3到5年的生存率。同时，有初始数据显示了STK1与癌复发率和死亡率的关系。尽管由于病例较少，比较不明显，但是肺癌和贲门癌患者术前高水平的STK1（2 pM）预示着患者的高复发风险和高死亡率，当然，这还需要更多病例和数据来

20、证实此发现。对非肿瘤肺病患者的研究显示，其他非肿瘤疾病也可引起STK1增高。因而，当用STK1检测患者的预后时，了解患者的病情背景就尤为重要。总而言之，本研究揭示了STK1与食道癌，贲门癌和肺癌患者的肿瘤病理分级和肿瘤临床分期之间的密切关系，可评价患者的预后。致谢：本研究由北京 Hope Run资助；TK1试剂盒由中国深圳华瑞同康生物技术公司提供。参考文献：1 Gaspar MJ, Diez M, Rodriguez A, Ratia T, Martin Duce A, Galvan M, et al. Clinical value of CEA and CA125 regarding rel

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