国家自然科学基金申请书—艾灸调控RA滑膜细胞功能的分子信号机制研究

《国家自然科学基金申请书—艾灸调控RA滑膜细胞功能的分子信号机制研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《国家自然科学基金申请书—艾灸调控RA滑膜细胞功能的分子信号机制研究（23页珍藏版）》请在装配图网上搜索。

1、重大研究计划中医药学几个关键科学问题的现代研究项目类别申报学科代码1科学部编号AC03050309国家自然科学基金项 目名 称：艾灸调控RA滑膜细胞功能的分子信号机制研究申 请 者：刘 旭 光所 在 单 位：成都中医药大学邮 政编 码：610075通讯地 址：四川省成都市十二桥路37号,成都中医药大学针灸推拿学院 电 话：（028）87762405传 真：（028）87762405电子信箱 (Email):LXG428申 请 日 期：2002-11-20申 请 书国家自然科学基金委员会1997年制填 报 说 明 一、填写申请书前，请先查阅国家自然科学基金有关项目申请办法及规定。申请书各项内容，

2、要实事求是，逐条认真填写。表达要明确、严谨，字迹要清晰易辨。外来语要同时用原文和中文表达。第一次出现的缩写词，须注出全称。 二、申请书为十六开本，复印时用B5复印纸，于左侧装订成册。第三页起各栏空格不够时，请自行加页。一式六份（至少一份为原件），由所在单位审查签署意见后，按申报学科投送国家自然科学基金委员会对口科学部。地区科学基金项目，申请书另报送省（自治区）科委一份原件。 三、封面右上角“科学部编号”由对口科学部填写，项目类别和申报学科代码1由申请者填写。 四、下列人员不得作为申请项目的负责人提出申请，但可作为项目组成员参加研究： 在读（含在职）研究生 已离退休的科研人员 申请单位的兼职科研

3、人员 五、申请者和项目组中具有高级专业技术职务的主要成员申请（含参加）的项目数，连同在研的国家自然科学基金项目数（不含重点项目、重大项目），不得超过两项。 六、同一项目组研究内容相近的项目，只允许报送一个学科。 七、申请者可因同类项目竞争等原因，提出不宜评议本项目的专家名单（姓名与单位，3人以内），密封于信封中，钉在申请书原件封面，或另专函相关学科，供科学部选择同行评议人时参考。科学部将对此信息保密。 八、国家自然科学基金委员会地址：北京市海淀区双清路83号，通讯地址：北京8610信箱。 邮政编码：100085 一、简表研究项目名称中文艾灸调控RA滑膜细胞功能的分子信号机制研究英文the re

4、search on the molecular mechanism of RA synovioblast function regulated by moxibustion类别 A.自由申请 B.高技术探索 C.青年 D.地区高技术探索项目主题号 E.重大 F.重点 H.专项A申报学科名称1针灸推拿学名称2 A. 基础研究 B. 应用基础 代码1C03050309代码2A申请金额22.00万元起止年月2003年07月至2006年06月所用实验室A. 国家重点 B. 部门开放实验室编号B申请者姓名中文刘旭光性别A. 男出生年月1965/11民族名称汉拼音LiuxuguangB. 女A身份证号51

5、0103651101253代码01专业技术职务名称副研究员学位 A. 博士 B. 硕士 C. 学士 A博士学位授予国别或 地 区国(地区)名中国A. 院士B. 博士生导师C. 博士后代码062代 码156所在单位名 称成都中医药大学系（所）针灸推拿单位代码61007501性 质A. 高等院校B. 科研机构C. 其它邮政编码610075隶属关系名称四川省A申请者电话028，87762405代码951所在地 四川省成都市十二桥路37号项目组总人数高级中级初级博士后博士生硕士生参加单位数6512姓名身份证号专业技术职务所在单位名称及代码项目中的分工签字张 平510102680115613副教授四川大

6、学61006403受体，蛋白芯片检测主要成员(不含申请者)余曙光510103650416253副研究员成都中医药大学61007501免疫组化黄迪君510103410318252教 授成都中医药大学61007501针灸治疗周仁郁510102470804001副教授成都中医药大学61007501数学分析魏大鹏510102650202613实验师四川大学61006403免疫组化1研究内容和意义摘要以中医针灸理论为指导，艾灸“肾俞”、“足三里”治疗实验性RA，选择其病理关键环节和重要作用靶点滑膜细胞作为切入点，运用现代医学免疫组化、受体分析及蛋白芯片检测等方法技术，从分子信号转导和生物信息分析角度研究

7、艾灸调控RA滑膜细胞功能的跨膜及胞内信号传导途径，深入揭示针灸信号发挥效应的关键机制。主题词1. 主题词数量不多于三个；2. 主题词之间空一格（英文用/分隔）。中文类风湿关节炎艾灸分子信号英文Rheumatoid arthritis/moxibustion/ molecular signal简 表 填 写 要 求一、简表内容将输入计算机，必须逐项认真填写，采用国家公布的标准简化汉字。简表中所有代码以最新发布的国家自然科学基金申请项目分类目录及代码为准填写。高技术探索课题主题号按高技术新概念新构思探索课题项目指南中主题号填写，申请其重点项目时项目类别也填写B，并在申请书封面右上角加注“高技术探索

8、课题重点项目”。二、凡选择性栏目，将相应提示符A、B等之一填入该栏的右下角。三、部分栏目填写要求：项目名称应确切反映研究内容和范围，最多不超过25个汉字 (包括标点符号）。基础研究指以认识自然现象、探索自然规律为目的，不直接考虑应用目标的研究活动。应用基础研究指有广泛应用前景，但以获取新原理、新技术、新方法为主要目的的研究。申报学科申请项目所属的最基础学科。如涉及多学科可填写两个，先填为主学科。申请金额以万元为单位，用阿拉伯数字表示，注意小数点。起止年月起始时间从申请的次年1月算起。终止时间为完成年度的 12月。所用实验室系指研究项目将利用的实验室，仅填写国家计委批准的国家重点实验室或部门批准

9、的开放实验室。所在单位名称及代码按单位公章填写全称。例如“中国科学院西安光学精密机械研究所”不得填“中科院西安光机所”或“西安光机所”。全称中的数字，一律写中文，例如：中国航天工业总公司第七一所。首次申请国家自然科学基金的单位，尚未编入单位代码，其代码暂不填写。参加单位数指研究项目组主要成员所在单位数，包括主持单位和合作单位(合作者所在单位)，以阿拉伯数字表示。项目组主要成员指在项目组内对学术思想、技术路线的制订与理论分析及对项目的完成起重要作用的人员，本人应在申请书上亲自签名。本栏双线右侧内容不输入计算机。研究内容和意义摘要与主题词均录入软盘。2二、立论依据 （包括项目的研究意义、国内外研究

10、现状分析，并附主要参考文献及出处） 1、 项目的研究意义针灸疗效是针灸临床发展的生命线，针灸原理的现代研究不仅有助于探索针灸疗效的内在机制，也有利于针灸理论与学术发展。针灸作为一种非特异性刺激，其效应是通过机体内复杂的信号传导实现的。针刺镇痛与针刺麻醉等领域的研究已经比较系统和深入地揭示了针刺信号的外周传入及中枢整合机制，但对效应靶点相关信号传导机制的研究却相对薄弱。我们完成的国家自然科学基金项目“艾灸治疗RA的神经免疫调节机制研究”已经证明艾灸对神经内分泌免疫网络信号的调控是艾灸治疗RA重要的信号整合环节，但未涉及艾灸信号如何最终发挥效应的问题效应靶点的信号传导规律与机制。为了全面地揭示针灸

11、疗效的信号传导机制，本项目选择RA病理关键环节和艾灸作用重要靶点滑膜细胞为突破口，运用蛋白芯片检测及生物信息分析技术研究艾灸调控RA滑膜细胞功能的跨膜及胞内信号转导途径，深入揭示艾灸治疗RA的信号传导的关键环节。2、国内外研究现状分析类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis, RA）是一种以慢性对称性多关节炎表现为主的全身性自身免疫疾病，常见症状为关节肿胀疼痛，僵硬，畸形和功能严重受损等。由于其病理过程难以控制，致残率高1，严重损害患者身心健康，降低生存质量，已成为医学界关注的难治性疾病。持续性的滑膜炎是RA突出的病变特征，它贯穿于RA整个病理过程之中。在疾病早期常表现为滑膜水肿

12、，中性粒细胞、淋巴细胞及单核细胞侵润及细胞吞噬现象，中晚期则表现为淋巴样小结、血管翳形成和大量的淋巴细胞、巨噬细胞侵润，最终导致软骨破坏和骨侵蚀，引起关节畸形。滑膜细胞在RA滑膜炎症病理过程中占据十分重要的地位。尤其是近几年来，滑膜细胞在RA发病中的关键作用成为一个令人瞩目的研究领域。滑膜细胞分为A型（即巨噬细胞样滑膜细胞，约占2030%）、B型（即成纤维样滑膜细胞，约占7080%，为分泌性细胞）和C型（介于A、B型之间，即中间型滑膜细胞）三类，其中成纤维样滑膜细胞（FLC）在RA病理过程中最为重要。Firestein23对FLC的特性和功能进行了全面论述，指出其具有在抛锚处独立生长（类肿瘤样

13、生长）、癌基因表达和缺乏接触抑制等特点。FLC在类风湿滑膜炎症、血管翳形成和滑膜增生等RA关键病理环节中占据主导地位：可大量表达黏附分子如血管细胞间黏附分子-1（ICAM1），介导WBC与血管内皮细胞粘附并向血管外移，触发炎症过程；癌基因过度表达，凋亡抑制，导致滑膜组织增生；分泌多种酶，如金属蛋白酶(MMPs)等，降解细胞外基质，造成周围组织破坏等35。大量研究证实，RA成纤维样滑膜细胞功能异常的致炎、类肿瘤样生长及组织破坏作用与炎症细胞因子（主要为IL1和TNFa）及相关生长因子主要为血小板衍生生长因子（PDGF）、表皮生长因子（EGF）和成纤维细胞生长因子（FGF）有密切关系。IL1和TN

14、Fa这对“姐妹细胞因子”主要由侵润于RA滑膜的巨噬细胞及滑膜本身的成纤维样滑膜细胞分泌，二者在效应及靶细胞范围上具有很大的相似性，在RA发病中起着“中心罪犯”作用。它们刺激滑膜细胞和软骨细胞合成PGE2和胶原酶，引起骨和软骨吸收的破坏，促进成纤维样滑膜细胞增生68。PDGF、EGF及FGF均由滑膜组织产生，它们通过诱导滑膜细胞原癌基因c-fos和c-myc mRNA的过度表达引起细胞的无锚依赖生长并形成细胞集落，刺激滑膜细胞和新生血管形成911。这些炎症细胞因子及生长因子对RA成纤维样滑膜细胞分泌及增生的调控具有比较复杂的跨膜和细胞内信号转导途径，首先，它们作为第一信使与成纤维样滑膜细胞上相应

15、受体结合，把细胞外信号介导至细胞内，然后引起滑膜细胞内酪氨酸激酶磷酸化，活化MAPKs（分裂原激活的蛋白激酶）信号通路，并通过第二、第三信使的作用，调控核内相关基因的开放或关闭，启动DNA合成和细胞分裂，导致滑膜细胞的类肿瘤增生，促进金属蛋白酶和ICAM-1等分泌。MAPKs是多条信号转导通路的交汇点，这些通路包括蛋白激酶C（PKC）信号系统、生长因子受体酪氨酸激酶信号系统（RTK）、JAK-STAT（janus酪氨酸蛋白激酶信号转导子和转录激活子），MAPKs将各路信息整合后传至胞核，调节转录因子的活性，调控相应基因的表达，最终对细胞的增殖及分泌功能产生影响1214。针灸治疗RA不仅良好效果

16、，而且具有无毒副作用的独特优势。大量临床资料显示，采用多种针灸治疗方法，如针刺、锋针、温针、麦粒灸、铺灸、电3-1热灸及麦粒灸等治疗RA均可获得较为满意的疗效，其治愈率在11-61之间，总有效率高达80-981517，且无毒副作用的相关报道。动物实验研究也证明，针灸能明显提高佐剂性关节炎（AA）大鼠痛阈，减轻局部的原发性和继发性肿胀，调整免疫功能紊乱，具有良好的抗炎、镇痛和免疫调节等作用1819。在肯定疗效与优势基础上开展的针灸治疗RA作用机制的研究也取得了一定进展。研究发现，抑制局部组织炎症介质（5HT、HA、PGE2等）产生，提高脑内阿片肽和其他镇痛神经递质含量，调整下丘脑垂体肾上腺皮质轴

17、（HPAA）功能，提高血浆肾上腺素皮质激素水平，调整机体免疫功能等2022。另外，我们的研究发现艾灸对实验性RA模型动物的滑膜细胞分泌功能有明显影响，能明显抑制细胞因子IL1、IL6及TNFa的生成，降低血清细胞粘附分子（ICAM1）水平2325。但是，通过综合分析有关研究现状后发现，以往的研究往往集中在以针灸抗炎、镇痛及免疫调节作用为中心的初步原理探讨，而对RA的关键病理环节和针灸作用的重要靶细胞缺乏足够的重视，因此存在研究主线不清和深度不够的问题。对此，有必要从RA滑膜细胞这一关键环节入手，引入现代医学先进的研究方法技术，对针灸治疗RA的内在机制进行系统深入研究。本研究在我们已完成的国家自

18、然科学基金课题“艾灸治疗类风湿关节炎的神经免疫调节机制研究”证实艾灸“肾俞”、“足三里”对实验性RA确有良好治疗作用和对滑膜细胞分泌功能有明显调节作用的基础上，选择在RA病理过程中处于关键地位的滑膜细胞为切入点，运用免疫组化、受体分析、蛋白芯片检测及生物信息分析处理等方法技术研究艾灸调控RA滑膜细胞功能的跨膜及胞内信号传导途径，对于深入揭示艾灸治疗RA的信号传导关键环节具有重要意义。参考文献1、曾庆余等. 类风湿关节炎的临床. 华夏出版社，1989年.第一版. P123-22、Firestein GS.Invasive fibroblask-like synoviocytes in rheum

19、atoid art-hritis:passive responders or transformed aggressors?Arthritis Rheum,1996,39:1781.3、Muller-Ladner U,Kriegsmann J,Franklin BN,et al.Synovial fibroblasts of patients with rheumatoid arthritis attack to and invade normal human cartilage when engrafted into SCID mice.Am J Pathol,1996,149:1607.4

20、、Beg AA,Baltimore D.An essential role for NF-B in preventing TNF-induced cell death.Science,1996,274:782.5、蔡青，韩星海，孟济明.类风湿关节炎的病理生理及生物学治疗进展.中华风湿病学杂志.2000；4（3）：1836、杨怡坤，胡荫奇.类风湿性关节炎的发病机理探讨.中国骨伤.2000；13（5）：457、ChinJE，Lin Y.Effects of recombinant human interleukin- on rabbit articular chondrocytes stimula

21、tion of prostanoid release and inhibition of cell growth.Arthritis and Rheum，1988，31（10）：1290.8、Di giovine FS，Nuki G，Duff GW，et al.Tumor necrosis factor in synovial exudates.Ann Rheum Dis，1988，47（9）：768.9、Sano H,Engleka K,Matherm P,et al.Coexpression of phosphotyrosine-containing proteins,platelet-d

22、erived growth factor-B,and fibroblast growth factor-1 in situ in synovial tissues of patients with rheumatoid arthritis and Lewis rats with adjuvant or streptococcal cell wall arthritis.J Clin Invest,1993,91:55310、Shiozawa S,Shiozawa K,Tanaka T,et al.Human epidermal growth factor for the stratificat

23、ion of synovial lining layer and neovascularisation in rheumatoid arthritis.Ann Rheum Dis,1989,48:82011、Nakashima M,Eguchi K,Aoyagi T,et al.Expression of basic fibroblast growth factor in synovial tissuse from patients with rheumatoid arthritis:detection by immunohistological staining and in situ hy

24、bridisation.Ann Rheum Dis,1994,53:45-5012、燕太强，吕厚山，药立波.类风湿关节炎滑膜细胞酪氨酸激酶信号传导系统.中华风湿病学杂志.1999；3（2）：4513、卢建，余应年，徐仁宝.受体信号转导系统与疾病.山东科学技术出版社.2001年，第一版.P24914、卢建.细胞因子受体的组成、结构功能及信号传导机制.生理科学进展，1995，26：30515、王天俊.针灸治疗类风湿关节炎的研究概况.上海针灸杂志，1993；12(4)：1766、李世光，等. 温针疗法对类风湿关节炎患者免疫功能的影响.中国康复医学杂志，1994；(5)：2127、朱月伟，等.铺灸对类

25、风湿关节炎患者免疫功能的影响.上海针灸杂志，1991；(1)：13-318、黄迪君，等.麦粒灸对实验性RA大鼠抗炎作用机理研究. 中华中西医结合杂志.2001；（8）：4619、黄迪君，等.灸刺对实验性RA大鼠免疫功能的影响.中国免疫学杂志.1995；11增刊，11520、黄迪君，余曙光，韩哲林等.麦粒灸对实验性RA大鼠局部组织炎症介质的影响.上海针灸杂志.2002；21（4）：4321、杨介宾，等.不同针灸疗法对佐剂关节炎大鼠外周镇痛机理的研究. 中国针灸，1999； 19(6): 36222、黄迪君，等.灸刺法对实验性RA大鼠血液流变学的影响. 中国针灸.1996；(5)：4123、余曙光

26、，郝亮，刘旭光等.艾灸对RA模型大鼠血清ICAM1的影响.中国针灸.2002；22（10）：69024、陈晓莉，黄迪君，郝 亮等.麦粒灸对类风湿关节炎大鼠TNF-、IFN-的影响.针刺研究.2002；（3）：20125、陈晓莉，刘旭光，黄迪君等.麦粒灸对类风湿关节炎大鼠细胞免疫功能的影响.上海针灸杂志.2003；（1）33 3-4 三、研究方案1. 研究目标、研究内容和拟解决的关键问题1.1 研究目标通过本课题的研究，从分子水平和细胞信号转导角度深入揭示艾灸治疗RA的滑膜细胞分子信号转导机制。1.2 研究内容（1） 艾灸对实验性RA模型的治疗效应研究：痛阈、足肿胀度、关节滑膜及软骨组织形态；（

27、2） 艾灸调控实验性RA模型滑膜细胞功能的研究：ICAM1、ICAM1 mRNA艾灸调控实验性RA模型滑膜细胞胞表达、原癌基因cfos及cmyc表达、金属蛋白酶（MMPs）、组织金属蛋白酶抑制剂（TIMP）。（3） 艾灸调控实验性RA模型滑膜细胞跨膜信号的研究：IL1和TNFa、PDGF、EGF及FGF；（4） 艾灸调控实验性RA模型滑膜细胞胞内信号传导通路的研究：MAPKs、JAK/STAT信号通路的相关蛋白及蛋白酶。1.3 拟解决的关键问题滑膜细胞内信号转导涉及MAPKs、JAK/STAT等信号通路中的众多相关蛋白及蛋白酶的检测，为了把握信号系统的全局性变化，必须运用蛋白组学并行检测相关蛋

28、白的芯片检测技术和系统聚类数学分析方法，动态、定量、整体地研究艾灸对RA滑膜细胞内信号传导的蛋白质表达模式和蛋白质功能模式的影响。42. 拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析2、1 技术路线 日本大耳白兔跨膜信号转导：IL1、TNFa、PDGF、EGF、FGF及其相应受体制备滑膜细胞、滑膜液治疗效应观察对照组、模型组、艾灸组细胞内信号转导：MAPKs、JAK/STAT通路相关蛋白及蛋白酶 滑膜细胞功能：ICAM1、ICAM1mRNA、cfos及cmycmRAN、MMPs、TIMP 2、2 实验方案2、2、1 实验分组：实验设正常对照组、AA模型组、艾灸治疗组。实验第21天放血处死动

29、物，取材做相关检测。2、2、2 AA模型塑造：以日本大耳白兔为实验对象，体重2.5±0.25Kg，雌雄各半。参照文献（陈奇主编，中药药理研究方法学，第一版，北京：人民卫生出版社，1993；357），于实验开始第一天，对模型组及艾灸组动物从右后足踝关节部皮内注入福氏完全佐剂0.5ml/Kg。52、2、3 艾灸治疗：在造模后第7天，将艾灸治疗组动物固定在兔架上，暴露背部及后肢（治疗穴位部位剃毛2×2cm），每天用灸绒(20mg/壮)灸肾俞、足三里（参照中国兽医针灸学、实验针灸学的动物穴位图谱）二穴各5壮，每日一次，两侧交替进行。6天为一疗程，共治疗3个疗程，疗程之间休息一天。正

30、常对照组和模型组动物同法固定，但不治疗。2、2、4 疗效观察（1）整体状况：每日观察动物体毛、活动状态和局部病变情况。（2）痛阈：参照文献，以尖端约为0.5mm的弹簧压力棒垂直按压右踝关节组织同一部位(足背踝关节连接处)，弹簧压力棒起始刻度为80g，每格为20g压力，最大刻度为300g。测量时以缩腿时刻度为痛阈值。（3）足跖肿胀度：采用软皮尺于造模前、造模后第3、6、9、12、15、18、21天测定各测定各动物的踝关节周长，计算足肿胀度。（4）局部炎症介质检测：取炎症滑膜组织，采用荧光检测分析法检测局部炎症组织中5HT、PGE2及HA含量。 （5）炎症局部组织形态学检查：取炎症局部关节软骨及滑

31、膜，光镜下观察结构。2、2、5 滑膜细胞功能指标检测ICAM-1取滑膜液，采用E1ISA双抗夹心法检测ICAM-1 mRNA、cfos及cmycmRAN：取炎症滑膜细胞，采用原位杂交方法检测。MMPs、TIMP：取滑膜组织，采用免疫组化ABC法检测。2、2、6滑膜细胞跨膜信号分子检测IL1、TNFa：取炎症关节滑液，采用E1ISA法检测。PDGF、EGF、FGF：取炎症滑膜组织，采用免疫组化法检测。IL-1、TNF-、PDGF、EGF、FGF的受体密度：取炎症滑膜细胞，采用放免法检测。2、2、7 滑膜细胞胞内信号分子检测向上海博星生物技术公司定做MAPKs、JAK/STAT信号通路中PKC、R

32、TK、Raf、MAPK、JAK14、STAT1，2，3，4等蛋白酶的蛋白表达芯片和蛋白活化芯片，取炎症滑膜细胞采用蛋白芯片检测其表达与活性。2、2、8 数据统计处理对蛋白芯片检测数据采用GENESIGHTTM生物信息处理软件进行系统聚类数学分析；一般计量资料用SPSS11.0统计软件包进行单因素方差分析和q检验（NewmanKeuls法）。5-12、3 可行性分析课题组在针灸治疗RA的基础与临床研究方面曾获得了四川省中医管理局、四川省教委和国家自然科学基金委员会的资助（国家自然基金：艾灸治疗RA的神经免疫调节机制研究，编号39870956，19992001年），具有扎实的前期工作基础，确证了艾

33、灸对RA的良好治疗作用并进行相关机理探讨，而且本研究又以现代医学研究成果和方法技术作为支撑，因此从理论上具有可行性。研究选用的AA模型为动物实验研究中公认的RA模型，能比较准确地反映RA的病理变化，艾灸治疗操作简便，质量可控，而且合作单位四川大学华西医学中心免疫研究室拥有雄厚的技术力量和先进的设备，长期从事细胞因子与疾病、细胞受体介导信号传导途径的研究工作，在信号转导研究领域具有丰富的研究经验和较高知名度，因此本研究具有实际上的可操作性。3、本项目的创新之处 首先是研究思路的创新：本研究区别于以往针灸治疗RA机理研究中以抗炎、镇痛及免疫调整等大体效应为中心的研究模式，抓住RA的主要病理特征及艾

34、灸作用的重要靶点滑膜细胞，就艾灸实现对RA治疗作用信号通路中的最后关键环节深入开展细胞分子信号转导机制研究，其研究目标更为明确、思路更为清晰。其次是研究方法的创新：本研究将现代生物学蛋白芯片检测技术与系统聚类数学分析方法相结合，从全局、整体角度研究艾灸对RA滑膜细胞内的众多分子信号的影响，其研究方法更为先进，结果更为可靠。5-24. 年度研究计划及预测进展 2003年7月2003年12月 查阅相关技术资料，开展预实验 2004年1月2004年6月 完成艾灸治疗实验性RA的疗效观察 2004年7月2004年12月 完成艾灸调控实验性RA滑膜细胞功能的研究 2005年1月2005年6月 完成滑膜细

35、胞跨膜信号转导（配体、受体）的研究 2005年7月2006年2月 完成滑膜细胞内信号转导（MAPKs、JAK/STAT通路）的研究 2006年3月2006年6月 实验数据整理分析，撰写论文，结题5. 预期研究成果 本课题从RA病理关键环节和艾灸重要作用靶点上深入阐释艾灸治疗RA的细胞分子信号转导机制。研究成果将以论文或论著形式公开发表，学术水平国内领先，有利于推动针灸作用原理研究的深入开展。6 四、研究基础1. 与本项目有关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩课题组成员多年来一直从事针灸治疗RA的基础与临床、细胞因子与疾病、细胞因子受体介导的信号传导及抗体工程等研究工作，先后承担了四川省课题“

36、类风搽剂治疗RA的临床与实验研究”（19921994）、“麦粒灸加叩刺拔罐法治疗RA的实验与临床研究”（19921994）和国家自然科学基金课题“艾灸治疗RA的神经免疫调节机制研究”（19992001）、“针刺调控RA易感基因及其相关表达的研究”（20022004）、“JAKs在急性淋巴细胞白血病细胞生长和凋亡中的作用”（19982001）的研究工作，具有扎实的工作基础和丰富的研究经验。研究成果先后获得四川科技进步奖1项、四川省中医药科技进步奖2项、成都市科技进步奖1项，发表相关论文27篇，撰写细胞凋亡的基础与临床、和中医风湿病学等专著。2. 已具备的实验条件，尚缺少的实验条件和拟解决的途径（

37、包括利用国家重点实验室和部门开放实验室的计划与落实情况） 已拥有研究工作所需CO2孵箱、倒置显微镜、细菌培养摇床、冰冻切片机、超净工作台、核酸电泳仪、转移电泳仪、电转染仪、冷冻超速离心机、超低温冰箱、PCR仪、酶标仪、r计数器及放射性自显影相关设备等，可为实验研究的顺利开展提供可靠保障。73. 申请者和项目组主要成员的学历和研究工作简历，近期已发表与本项目有关的主要论著目录*和获得学术奖励情况及在本项目中承担的任务；青年科学基金申请者还应注明学位论文名称及导师姓名与工作单位刘旭光，医学博士，硕士导师。1981，91986，7 成都中医学院医学系本科1990，91993，7 成都中医学院中西医结

38、合基础硕士研究生1993，71997，9 成都中医药大学针灸学实验室助理研究员1997，92000，7 成都中医药大学针灸学博士研究生，副研究员2000，7现在 成都中医药大学针灸学实验室副研究员，硕士生导师长期从事针灸作用原理研究工作。在本课题研究中负责课题的总体设计与实施安排，承担艾灸治疗与效应研究工作。相关论文：（1）电针对类风湿关节炎大鼠T细胞凋亡的影响.成都中医药大学学报.2002；25（1）：25（2）麦粒灸对类风湿关节炎大鼠细胞免疫功能的影响.上海针灸杂志.2003；（1）33（3）麦粒灸对实验性RA大鼠抗炎作用机理研究 .中华中西医结合杂志；2001(8)：42 （4）艾灸对R

39、A模型大鼠血清ICAM1的影响.中国针灸.2002；22（10）：690 张平，医学硕士，硕士导师。1987，91992，7 华西医科大学医学系本科1992，9现在 华西医科大学免疫研究室讲师、副教授1996，71999，7 华西医科大学免疫学硕士研究生长期从事细胞因子与疾病、细胞受体介导信号传导途径的研究工作。在本课题研究中负责受体分析与蛋白芯片检测工作。相关论文：（1）JAKs on acute lymphocyte leukemia cell growth and apoptosis.U.S.Chinese Joural of Microbiology and immunology. 2

40、000;2(3): 87（2）细胞因子受体介导的JAKs-STATs信号传导途径. 国外医学免疫学分册.1999,22(1):8 （3）细胞因子受体介导的信号传导.免疫学杂志.1999;15(1):67 (4)JAKs-STATs信号传导途径疾病治疗的新领域.国外医学免疫学分册 2001;24(1):10(5)C-末端缺陷JAK3逆转录病毒载体的构建及在真核细胞中的表达.华西医大学报 2002;33（4）：536(6)JAKs激酶在急性淋巴细胞白血病中的表达和活化.中国肿瘤生物治疗杂.2000;7（4）：304* 论文：作者·题目·刊名·年份·卷（期）&

41、#183;页码 专著：作者·书名·出版者·年份8余曙光，医学学士，硕士导师。1981，91986，7 成都中医学院医学系本科1986，7现在 成都中医药大学针灸学实验室助研、副研究员、硕士导师 长期从事针灸与病理形态等基础研究工作。在本课题研究中承担免疫组化和组织形态研究工作。相关论文：（1）艾灸对RA模型大鼠血清ICAM1的影响.中国针灸.2002；22（10）：690（2）电针对类风湿关节炎大鼠T细胞凋亡的影响.成都中医药大学学报.2002；25（1）：25（3）麦粒灸对类风湿关节炎大鼠细胞免疫功能的影响.上海针灸杂志.2003；（1）33（4）麦粒灸对实验性

42、RA大鼠局部组织炎症介质的影响.上海针灸杂志2002；21（4）：43 黄迪君，医学本科，博士导师。1959，91964，7 成都中医学院医学系本科1964，71987，7 成都市第一人民医院针灸科医师、主治医师1987，8现在 成都中医药大学针灸推拿学院副教授、教授、博士导师长期从事针灸治疗类风湿关节炎的基础与临床研究工作，先后主持了2项与类风湿关节炎有关的国家自然科学基金课题及多项省级课题的研究工作，是国内知名风湿病学专家。在本课题中承担艾灸治疗工作。相关论文： （1）灸刺对实验性RA大鼠免疫功能的影响.中国免疫学杂志.1995；11增刊，115 （2）灸刺法对实验性RA大鼠血液流变学的影

43、响. 中国针灸.1996；(5)：41 （3）艾灸对RA模型大鼠血清ICAM1的影响.中国针灸.2002；22（10）：690 （4）麦粒灸对实验性RA大鼠抗炎作用机理研究 .中华中西医结合杂志；2001(8)：42（5）麦粒灸对类风湿关节炎大鼠细胞免疫功能的影响.上海针灸杂志.2003；（1）33（6）麦粒灸对实验性RA大鼠局部组织炎症介质的影响.上海针灸杂志2002；21（4）：43 周仁郁，理学学士。1977，121982，1 四川大学数学系本科1982，11986，1 四川师范学院数学教研室讲师1986，2现在 成都中医药大学数学与统计教研室讲师、副教授长期从事数学与统计学的科研和教学

44、工作。在本课题中承担蛋白芯片检测数据的数学分析与统计处理工作。 主编统计方法与实验，西南交通大学出版社，2002年。8-1 五、经费预算支 出 科 目金 额（万元）计 算 根 据 及 理 由1. 合 计220（1）科研业务费40国内调研、参加学术会议及文章发表1.5；科研资料及结题0.5；蛋白芯片检测及数据分析2.0；（2）实验材料费920170试剂药品：细胞因子标准品、细胞培养液、牛血清鼠抗ICAM1抗体标准品、ErTNFa试剂盒、5HT及HA标准品、PDGF、EGF、FGF抗体及放免试剂盒、兔抗cfos及cmyc抗体等，合计7.0；蛋白芯片：PKC、RTK、Raf、MAPK、JAK14、S

45、TAT1，2，3，4的蛋白表达芯片和蛋白活化芯片，合计8.0；日本大耳白兔及饲养：2.0（3）项目组织实施费10注: 预算支出科目按下列顺序填写: 1. 科研业务费 2. 实验材料费 3. 仪器设备费 4. 实验室改装费5. 协作费 6. 项目组织实施费。开支范围详见国家自然科学基金资助项目财务管理办法第二章。9 六、申请者正在承担的其它研究项目 （攀登计划、863计划、攻关任务和各部委、省市任务等项目的名称及编号、任务来源、起止年月、负责或参加以及与本申请项目的关系等情况）1、 温阳益气法调整生物昼夜节律的时相特征研究，四川省教育厅项目，负责人，2001年1月2003年12月2、 电针诱导R

46、A免疫耐受的研究，四川省科技厅项目，主研，2000年1月2002年12月七、申请者承担（负责或参加）国家自然科学基金资助项目的情况批准号项目名称起止年月负责或参加进展或完成情况30171180针刺导引节律相位作用及其细胞和分子生物学基础研究2002年1月至2004年12月第3主研按计划顺利进行10 对申请者负责的前一个已结题科学基金资助项目（项目名称及批准号）完成情况，后继研究进展及与本申请项目的关系加以详细说明。另附该已结题项目研究工作总结摘要（300字）及已发表主要相关论文首页复印件（限三篇）。 八、申请者承诺 我保证上述填报内容的真实性。如果获得资助，我与本项目组成员将严格遵守国家自然科

47、学基金委员会的有关规定，切实保证研究工作时间，按计划认真开展研究工作，按时报送有关材料。 申请者（签章） 年 月 日11 九、推荐意见 既不具有高级专业技术职务又不具有博士学位的申请者，须有两名具有高级专业技术职务的同行专家推荐。推荐时，请认真负责地介绍申请者及其项目组成员的业务基础、研究能力、科研态度及研究条件等。项目组成员不能做推荐者。具有高级专业技术职务的在职博士生申请须由导师在此栏目签署意见。 推荐者（签章）专业技术职务专长 所在单位： 推荐者（签章）专业技术职务 专长 所在单位：12十、申请者所在单位及合作单位的审查与保证1. 申请者所在单位学术委员会的审查意见（包括：对项目的意义、

48、特色和创新之处及申请者的研究水平与学风签署具体意见）RA为医学界公认的难治性疾病，对人类危害极大，在目前药物治疗难以有效控制其病理过程且有明显毒副作用的前提下开展针灸治疗RA的基础与临床研究具有非常重要的理论与实际价值。该项目在中医针灸理论指导下，依据艾灸治疗RA的确切疗效，抓住RA病理关键环节及艾灸作用重要靶点滑膜细胞作为研究的突破口，运用现代医学免疫组化、受体分析、蛋白芯片检测技术及数学分析方法，开展多学科交叉研究，以揭示艾灸治疗RA的细胞分子信号转导机制，无论是在研究思路还是在研究方法上都有很大的创新之处，有利于推动针灸治病机理研究的深入开展，具有较高的学术价值和实际运用价值，值得资助。

49、课题申请者为医学博士，长期从事针灸现代研究工作，具有坚实的理论知识，熟悉针灸研究思路和现代医学有关方法技术，参与过多项国家、部省级科研课题的研究工作，有较强的科研组织能力和实际动手能力。为人踏实，吃苦耐劳，有团结协作精神，治学谨严，有能力保障课题的实施与完成。 主任或副主任（签章） 2002年11月 25日13 2. 合作单位的审查意见与保证同意参加合作研究，保证对参加合作研究人员时间及工作条件的支持、督促其按计划完成所承担的任务（及需要说明的其它问题）合作单位1（公章）合作单位2（公章）合作单位3（公章）3. 申请者所在单位领导的审查意见与保证已按填报说明对申请人进行了资格审查，对申请书内容进行了审核，同意学术委员会的审查意见，并保证在项目获得资助后做到以下几点：(1) 保证对研究计划实施所需的人力、物力和工作时间等条件给予支持。(2) 严格遵守科学基金委员会有关资助项目管理、财务等各项规定。(3) 督促项目负责人和本单位项目管理部门按科学基金委员会的规定及时报送有关报表和材料。需要说明的其它问题：单位负责人 （签章） 单位（公章）年 月 日14