紫外分光光度计分析课件

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1、第二节第二节 紫外紫外-可见分光光度计可见分光光度计 主讲：陈小蒙主讲：陈小蒙第二节 紫外-可见分光光度计 主讲：陈小蒙1紫外分光光度计分析课件21 仪器的基本组件 五大部件：光源 单色器单色器 样品装置 检测器 信号显示器 1 仪器的基本组件 五大部件：3光源1 可见光光源钨丝灯钨丝灯：最常用的可见光光源，发射波长：325nm2500nm；使用范围：320nm1000nm。光源1 可见光光源4卤钨灯卤钨灯：在钨丝中加入适量的卤化物或卤素。具有较长的寿命和高的发光效率。卤钨灯：在钨丝中加入适量的卤化物或卤素。具有较长的寿命和高的52 紫外光光源：多为气体放电光源：氢灯、氘灯。氘灯光强比同功率的

2、氢灯要大3-5倍，寿命比氢灯长，在紫外光区广泛使用。2 紫外光光源：6单色器 定义：将光源发出的光分离成所需要的单色光的器件称为单色器。它是分光光度计的心脏心脏部分。构成：由狭缝、准直装置、色散元件色散元件、透镜 等构成。单色器 定义：将光源发出的光分离成所需要的单色光的器件称为单7狭缝 可分为：入射狭缝和出射狭缝 对单色器的分辨率起重要作用，它对单色光的纯度在一定范围内起着调节作用。狭缝8准直和汇聚系统准直装置：把入射光束转化为平行光束。汇聚装置：把色散后的光束按波长不同进行汇聚。准直和汇聚系统9色散元件 是单色器的关键部分关键部分。作用：使不同波长的光以不同的角度传播，从而使复合光分解为单

3、色光，按一定的波长顺序排列。色散元件 10紫外分光光度计分析课件11单色器分类准直和汇聚装置色散元件原理棱镜单色器透镜棱镜折射光栅单色器反射镜光栅干涉衍射单色器准直和汇聚装置色散元件原理棱镜透镜折射反射镜光栅干涉12杂散光：无论何种单色器，出射光光束常混有少量与仪器指示波长不同的光。由仪器器件反射或尘埃散射形成，会影响吸光度的准确测量。杂散光：13样品装置 是光与试样相互作用的场所。包括样品室、池架、吸收池等。吸收池吸收池:又叫比色皿，一般为长方体，用于盛放待测液和决定液层厚度的器件。池底和两侧为毛玻璃，另两面为光学透光面。样品装置 是光与试样相互作用的场所。14吸收池吸收池 按材质一般分为：

4、玻璃：用于可见光，波长范围：400nm 2000nm。石英：可用于紫外光、可见光和红外光，波长范围：180nm3000nm。一般配有盖子，价格较贵。吸收池 按材质一般分为：15按规格一般分为：0.5cm 1.0 cm 2.0 cm 3.0 cm 5.0 cm 按规格一般分为：16使用时注意：使用前后彻底清洗，尤其对于有附着的液体需用合适的溶剂洗涤。严禁用手触摸透光面，用镜头纸或绸布擦拭透光面。使用时注意：17严禁加热烘烤。样品用量以吸收池的4/5为宜，使用挥发性溶剂时加盖。凡含腐蚀玻璃物质的溶剂，不得长时间盛放在吸收池中。(F-、H3PO4)严禁加热烘烤。18检测器 又称为接收器，作用是对透过

5、吸收池的光做出响应，并把它转变成电信号输出，其输出的电信号大小与透过光的强度有对应的函数关系。检测器 19检测器分类光电检测器光电检测器：基于光电转换原理。分为：光 电池、光电管等热电检测器：一般用于红外，红外光子能量 较弱，不易引发光电子。其他检测器 检测器分类20光电池表层：导电性能良好的 可透光金属薄膜中层：具有光电效应的半 导体（硒、硅等）底层：铁片或铝片，称为基体光电池21光电池优点：不需要外界电源，不需要放大 装置就可直接测量电流。光电池缺点：1不适宜使用一般直流放大器，故不适合较微弱光的测量 2光照时间太久会产生“疲劳”，失去响应，不宜连续使用2小 时以上 光电池优点：不需要外界

6、电源，不需要放大22 光电管按光敏材料不同分为：蓝敏：可用波长210nm-625nm红敏：可用波长625nm-1000nm优点：灵敏度高，光敏范围广，不易疲劳。光电管示意图光电管示意图 光电23光敏倍增管常用于检测弱光。优势：响应速度快，灵敏度高，比一般光电 管高200倍 目前紫外目前紫外-可见分光光度计广泛使用光电倍可见分光光度计广泛使用光电倍增管作为检测器增管作为检测器光电倍增管示意图光电倍增管示意图光敏倍增管光电倍增管示意图24信号显示器 1 以检流计或微安表为指示仪表。标尺分上下两部分：上半部分是透光度T 下半部分是吸光度A2 数字显示和自动记录型装置。直接数字显示可避免人为误读。信号

7、显示器 1 以检流计或微安表为指示仪表。25紫外-可见分光光度计类型及特点按使用波长范围可分为1 可见分光光度计：400nm-780nm2 紫外-可见分光光度计：200nm-1000nm3 紫外分光光度计：200nm-400nm紫外-可见分光光度计类型及特点按使用波长范围可分为26紫外-可见分光光度计类型及特点 单光束分光光度计 单波长分光光度计分类 双光束分光光度计 双波长分光光度计紫外-可见分光光度计类型及特点 27单波长单光束分光光度计 光源发出的光经过单色器后，轮流通过参比溶液和样品溶液进行测定。721型、754型 结构简单，误差大，操作繁琐，用于定量分析。单波长单光束分光光度计28单

8、波长双光束分光光度计特点：能连续改变波长，自动比较样品和参 比溶液的透光强度，自动消除光源强 度引起的误差 适用：在较宽波长范围内获得复杂的吸收光 谱曲线的分析单波长双光束分光光度计29双波长分光光度计特点：可测定高浓度、多组分混合试样，浑 浊试样；精确度高，操作简单。缺点：价格昂贵双波长分光光度计30分光光度计的检验 1 指示波长准确度的检验 检验原因：使用过程中，由于振动、温度变 化、灯座松动、更换灯泡等原 因，出现仪器指示波长与实际波 长出现不符。，导致检测结果不 准确。分光光度计的检验 1 指示波长准确度的检验 31检验方法：可见分光光度区：绘制镨钕滤光片的吸收 光谱曲线。紫外光区：绘

9、制苯蒸气的吸收光谱曲线。检验方法：322 透光度准确度的检验3 杂散光的检验4 分辨率的检验5基线稳定度和平直度的检验2 透光度准确度的检验336 吸收池配套性检验 方法：1）以其中一个吸收池为参比测量其它各池的透光度，其结果偏差小于0.5%的吸收池为一套。2）在吸收池中装入相同的溶剂，吸光度相同即可成套，若不同可求出修正值后使用。6 吸收池配套性检验 34分光光度计的使用（1）721型可见分光光度计 检查各调节钮处于起始位置，接通电源，打打开样品室暗箱盖开样品室暗箱盖，预热20min。选择调节至所需用波长，并调节相关波长的灵敏档。分光光度计的使用（1）721型可见分光光度计 35 用调“0”

10、电位器调整电表于T=0%，安放参比溶液（第一格）和待测液，盖上样品室盖，拉动拉杆，使参比溶液在光路上时调节“100%”电位器，使电表指针在T=100%重复打开样品盖调“0”和盖上样品盖“100%”，直至仪器稳定。用调“0”电位器调整电表于T=0%，安放参比溶液（第一格36 盖上样品盖，拉动拉杆，测量待测液并记录读数。测量完毕后，取出吸收池，洗净后倒置晾干，各旋钮归位，关闭电源。盖上样品盖，拉动拉杆，测量待测液并记录读数。37（2）754型紫外-可见分光光度计 开机 打开样品室暗箱盖，接通电源，仪器进入自检状态，预热20min后，仪器进入工作状态。选择光源 仪器开启后，钨灯即亮，若使用紫外区则需

11、打开氘灯。（2）754型紫外-可见分光光度计 38 调节波长旋钮，选择所需用的单色波长。按“100%”键，仪器显示T=0.0。放入参比溶液和待测液后，盖上样品室盖，将参比液推入光路，按“100%”，仪器显示为100，测量待测液后打印出数据。测量完毕后，取出吸收池，洗净后倒置晾干，关闭电源。调节波长旋钮，选择所需用的单色波长。395 分光光度计的维护和保养（1）仪器工作环境 仪器应安放在稳固的工作台上，避免周围有强磁场。室内温度：15-28，相对湿度：45%-65%，室内不宜有腐蚀性气体，不宜光线过强。5 分光光度计的维护和保养（1）仪器工作环境 40（2）仪器保养 电压 一般为220V，在电压波动较大的实验室，最好有稳压器。光源 在不用时不要开光源灯，延长光源的使用寿命。要注意及时更换光源不稳的灯泡，更换时不要直接用手接触，以免沾上油污。（2）仪器保养41单色器 勿擅自拆开单色器密封盒，并经常更换单色器盒的干燥剂。吸收池 注意保护吸收池的光学表面。光电器件 注意光电器件的受潮积尘，避免强光照射。单色器 42