临床检验技术床旁分析技术

《临床检验技术床旁分析技术》由会员分享，可在线阅读，更多相关《临床检验技术床旁分析技术（27页珍藏版）》请在装配图网上搜索。

1、第 十 七 章 床 旁 分 析 技 术 2 lPOCT的 概 念 :“ POCT” 的 组 成 包 括 ： point （ 地 点 、 时 间 ) care （ 保 健 、 照 料 ） testing （ 检 验 、 试 验 ） point-of-care testing即 :即 时 检 测 或 床 边 检 测 ,主 要 是 指 可 以 远 离 中 心 实 验 室 ， 在 患 者 身 边 快 速 进 行 并 能 快速 获 取 准 确 结 果 的 实 验 室 检 查 3 lPOCT的 应 用 早 期 ： 尿 液 分 析 、 血 糖 分 析 目 前 ： 血 气 分 析 、 电 解 质 分 析 、

2、血 液分 析 、 药 物 应 用 监 测 、 抗 凝 测 定 、 心 肌 损伤 标 志 物 检 测 、 甲 状 腺 激 素 检 测 4 lPOCT采 用 的 主 要 技 术 :电 化 学 分 析酶 学 分 析免 疫 分 析荧 光 分 析层 析 技 术酶 联 免 疫 分 析 5 实 验 仪 器 小 型 化 操 作 方 法 简 单 化 结 果 报 告 即 时 化 lPOCT仪 器 的 主 要 特 点 : 6 第 一 节 免 疫 胶 体 金 分 析 技 术 7 一 、 基 本 原 理 以 胶 体 金 标 记 结 合 抗 原 抗 体 反 应 的 一 种 新 型的 免 疫 标 记 分 析 技 术 。 斑

3、 点 免 疫 金 渗 滤 分 析 法（ DIGFA）免 疫 层 析 法（ ICA） u检 测 原 理 : 胶 体 金 标 记 物胶 体 金 8 斑 点 免 疫 金 渗 滤 分 析 法 （ DIGFA） 以 硝 酸 纤 维 素 膜 为 载 体 ， 利 用 微 孔 滤 膜 的 可 过 滤 性 ，使 抗 原 抗 体 反 应 和 洗 涤 在 一 特 殊 的 渗 滤 装 置 上 以 液 体 滤 过膜 的 方 式 迅 速 完 成 免 疫 渗 滤 装 置 及 操 作 示 意 图 9 以 金 胶 粒 或 着 色 乳 胶 粒 等 有 色 粒 子 作 标 记 物 ， 层 析 条通 过 多 种 材 料 复 合 而

4、成 ， 多 用 于 定 性 的 检 测 ， 也 可 半 定 量分 析 。 免 疫 层 析 法 （ ICA）免 疫 层 析 法 检 测 试 剂 条 结 构 10 B C T R A 免 疫 层 析 试 验 原 理 示 意 图吸 水 材 料 免 疫 金 复 合 物 测 试 区 参 照 区 末 段 吸 水 材 料 层 析 方 向 11 u检 测 特 点 ： 试 剂 和 样 本 用 量 极 小不 需 贵 重 仪 器没 有 污 染 性 物 质检 测 速 度 快u技 术 关 键 步 骤 ： 胶 体 金 制 备蛋 白 质 (第 二 抗 体 )的 胶 体 金 标 记 12 二 、 胶 体 金 的 制 备 还

5、原 法 u还 原 剂 ： 柠 檬 酸 钠 、 鞣 酸 、 抗 坏 血 酸 、 硼 氢 化 钠 等u制 备 方 法 及 注 意 事 项 ：方 法 ： 在 加 热 搅 拌 器 上 将 0.01 氯 金 酸 水 溶 液 加 热 沸 腾 后 ，滴 加 一 定 量 的 1 柠 檬 酸 三 钠 溶 液 ， 煮 沸 约 15min后 冷 却 即 可 。柠 檬 酸 三 钠 用 量 从 低 到 高 可 获 得 相 应 胶 体 金 的 颜 色 从 蓝 、 紫到 红 、 橙 。注 意 事 项 ： 注 意 所 用 玻 璃 容 器 的 清 洁 及 硅 化 13 三 、 抗 体 蛋 白 的 胶 体 金 标 记u标 记 方

6、 式 : 静 电 吸 附 在 弱 碱 环 境 下 胶 体 金 颗 粒 带 负 电 荷 ， 可 与 蛋 白 质 分子 中 碱 性 氨 基 酸 带 正 电 荷 的 基 团 形 成 静 电 结 合 ， 属 于 非共 价 结 合 。 u影 响 蛋 白 质 与 胶 体 金 的 结 合 的 因 素 蛋 白 质 所 带 电 荷溶 液 的 pH蛋 白 质 的 相 对 分 子 质 量胶 体 金 颗 粒 的 大 小蛋 白 质 与 胶 体 金 的 比 例溶 液 的 离 子 强 度 14 u胶 体 金 标 记 的 关 键 步 骤 ：(一 )待 标 记 抗 体 蛋 白 溶 液 的 准 备 去 无 机 离 子 和 蛋 白

7、 聚 合 物(二 )待 标 记 胶 体 金 溶 液 的 准 备 合 适 的 pH和 离 子 强 度 (三 )标 记 抗 体 蛋 白 最 适 用 量 的 确 定以 最 低 稳 定 用 量 的 120 为 标 记 抗 体 蛋 白 的 最 适 用 量 (四 )胶 体 金 与 抗 体 蛋 白 的 结 合 电 磁 搅 拌 、 加 入 稳 定 剂(五 )胶 体 金 标 记 抗 体 蛋 白 的 纯 化 离 心 法 和 凝 胶 过 滤 法 15 四 、 免 疫 胶 体 金 分 析 技 术 任 床 边 检 测 中 的 应 用 16 第 二 节 干 化 学 分 析 技 术 17 l定 义 ：干 化 学 分 析 (

8、dry chemical assav) 指 建 立 在 某 些 特 殊 固 相 支 持 物 上 的 检 测 分析 技 术 ， 通 常 将 测 定 某 些 项 目 所 必 需 的 全 部 或部 分 试 剂 固 定 在 具 有 一 定 结 构 的 载 体 上 ， 通 过滴 加 液 态 样 品 溶 解 载 体 上 的 试 剂 ， 并 与 样 品 中的 待 测 成 分 发 生 反 应 ， 在 支 持 物 的 局 部 区 域 产生 信 号 变 化 ， 再 通 过 检 测 以 获 取 待 测 物 的 浓 度 。 18 l检 测 原 理 ： 反 射 光 度 法差 示 电 位 法l特 点 ： 速 度 快 、

9、检 测 灵 敏 度 和 准 确 度 较 高可 采 用 仪 器 进 行 检 测 19 一 、 基 本 原 理(一 )双 层 膜 法 ：特 点 ：u通 过 反 射 光 度 计 测 定 其 颜 色 改 变 ， 从 而 计 算 待 测 物 质 的 含 量 u双 层 膜 法 不 能 排 除 样 品 中 某 些 物 质 对 吸 光 度 的 干 扰 u主 要 应 用 于 尿 生 化 分 析 试 剂 20 (二 )多 层 膜 法采 用 反 射 光 度 法 差 示 电 位 法u检 测 原 理 ：u特 点 ：集 光 学 、 现 代 化 学 、 化 学 计 量 学 、 酶 学 工 程 和 计 算 机 技 术于 一

10、体定 量 的 准 确 度 和 精 密 度 已 经 达 到 了 常 规 湿 化 学 的 水 平 ， 部分 甚 至 达 到 了 参 考 方 法 的 水 平 21 1 基 于 反 射 光 度 法 的 多 层 膜 22 分 布 层 光 漫 射 层 辅 助 试 剂 层 试 剂 层 又 称 渗 透 扩 散 层 ， 由 高 密 度 多 孔 聚 合 物 组 成 ， 其 特 点 是 能够 快 速 吸 附 液 体 样 品 并 使 之 迅 速 、 均 匀 地 渗 透 ， 并 可 阻 止一 些 颗 粒 成 分 (如 血 细 胞 、 结 晶 )和 大 分 子 (如 蛋 白 质 )向 下渗 透 ， 因 此 能 透 过 分

11、 布 层 的 基 本 上 是 无 蛋 白 滤 液 为 白 色 不 透 明 层 ， 由 反 射 系 数 95 的 物 质 如 BaSO 4， 或TiO 2构 成 。 光 漫 射 层 的 特 点 是 可 以 隔 离 分 布 层 中 有 色 物质 的 干 扰 ， 使 反 射 光 不 受 影 响 ； 同 时 因 其 具 有 高 反 射 系 数 ，可 为 下 面 的 试 剂 层 提 供 反 射 背 景 ， 使 入 射 在 光 漫 射 层 上 的光 最 大 限 度 地 反 射 回 去 ， 以 减 小 因 光 吸 收 所 引 起 的 测 量 误差 主 要 作 用 是 去 除 血 清 中 的 内 源 性 干

12、扰 物 ， 从 而 使 检 测 结 果更 加 准 确 ， 还 可 运 用 亲 和 过 滤 、 凝 胶 过 滤 、 免 疫 沉 淀 等 方法 ， 有 选 择 地 把 待 测 物 和 干 扰 物 分 离 。 是 多 层 膜 法 中 保 证测 定 结 果 更 准 确 、 误 差 更 小 的 一 个 非 常 重 要 的 结 构又 称 为 指 示 剂 层 或 反 应 层 ， 由 亲 水 性 多 聚 物 构 成 ， 该 层 固定 了 项 目 检 测 时 所 需 的 部 分 或 全 部 试 剂 。 用 于 检 测 不 同 项目 的 干 片 ， 其 固 定 的 试 剂 成 分 不 同 起 支 持 作 用 ，

13、为 光 学 透 明 的 塑 料 基 片 ， 允 许 入 射 光 和 反 射光 完 全 透 过 23 2 基 于 差 示 电 位 法 的 多 层 膜 结 构 ： 两 个 ISE， 都 有 5层 膜 结 构 24 测 定 时 取 一 定 量 的 血清 加 入 到 样 品 电 极 的 加 样槽 中 ， 再 取 等 量 的 参 比 液加 人 参 比 电 极 的 加 样 槽 中 ，通 过 电 位 计 来 测 定 这 两 个电 极 的 差 示 电 位 。 若 样 品与 参 比 液 中 的 离 子 活 度 相同 ， 则 差 示 电 位 为 零 ； 若离 子 活 度 不 同 ， 则 可 根 据差 示 电 位

14、的 值 计 算 待 测 离子 的 活 度 。 测 定 方 法 ：特 点 ： 干 片 是 一 次 性 使 用 的 ， 消 除 了 电 极 老 化 和 “ 蛋白 质 中 毒 ” 的 缺 点 ， 可 用 于 干 化 学 自 动 生 化 分 析 仪 。 25 二 、 干 化 学 分 析 仪 干 式 尿 液 分 析 仪 便 携 式 血 糖 分 析 仪 26 三 、 注 意 事 项 试 剂 条 应 放 置 在 允 许 的 温 度 条 件 下 保 存 。 注 意 有 效 期 ， 并 在 效 期 内 用 质 控 物 进 行 监 控 。 测 定 前 需 将 试 剂 条 在 室 温 下 放 置 一 定 时 间 ， 使 之 恢复 到 室 温 后 再 进 行 检 测 。 使 用 于 化 学 测 试 时 应 注 意 环 境 温 度 和 湿 度 。 27 第 三 节 影 响 POCT开 展 的 因 素 与 对 策一 、 开 展 POCT的 优 点二 、 影 响 POCT开 展 的 因 素三 、 POCT的 质 量 保 证