叶绿体色素的提取分离理化质和定量测定

叶绿体色素的提取分离理化质和定量测定 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望一、实验目的一、实验目的 1.1.掌握叶绿素的理化性质及其定量测定方法，掌握叶绿素的理化性质及其定量测定方法，加深学生对光合色素的理性、感性认识。加深学生对光合色素的理性、感性认识。2.2.熟练掌握分光光度计的使用原理及其方法熟练掌握分光光度计的使用原理及其方法二、实验原理二、实验原理1.1.叶绿体色素提取、分离及理化性质叶绿体色素提取、分离及理化性质n提取提取：叶绿体色素不易溶于水而溶于有机溶剂特性：叶绿体色素不易溶于水而溶于有机溶剂特性 -丙酮等有机溶剂提取。丙酮等有机溶剂提取。n色素分离色素分离：纸层析法分离。：纸层析法分离。n荧光现象荧光现象：观察荧光。：观察荧光。n取代反应取代反应：叶绿素中镁可被叶绿素中镁可被H H+取代而形成褐色去镁叶绿素。取代而形成褐色去镁叶绿素。去镁叶绿素遇铜则成为铜代叶绿素。去镁叶绿素遇铜则成为铜代叶绿素。n皂化反应：皂化反应：叶绿素可与碱起皂化反应而形成醇（甲醇和叶绿叶绿素可与碱起皂化反应而形成醇（甲醇和叶绿醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水-分开叶绿素分开叶绿素与类胡萝卜素。与类胡萝卜素。2.2.定量测定定量测定n根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其光密度，即可用光光度计在某一特定波长下测定其光密度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。公式计算出提取液中各色素的含量。n Ca=12.72D663-2.59D645 （1）n Cb=22.88D645-4.67D663 （2）n 将Ca与Cb相加即得叶绿素总量（CT）：n CT=Ca+Cb=20.2D645+8.05D663（3）n 或：n CT=(D6521000)/34.5 (4)三、实验材料三、实验材料n新鲜的菠菜新鲜的菠菜四、四、实验步骤实验步骤1.提取叶绿素提取叶绿素研磨法提取光合色素研磨法提取光合色素研磨法提取光合色素研磨法提取光合色素材料剪碎材料剪碎材料剪碎材料剪碎研磨法研磨法研磨法研磨法加入有机溶剂加入有机溶剂加入有机溶剂加入有机溶剂研磨、匀浆研磨、匀浆研磨、匀浆研磨、匀浆过滤过滤过滤过滤提取液提取液提取液提取液（2）纸层析分离现象观察）纸层析分离现象观察（3）叶绿素荧光现象观察）叶绿素荧光现象观察（4）H+和和Cu2+对叶绿素对叶绿素 中中Mg2+的取代作用的取代作用（5）皂化反应现象观察）皂化反应现象观察绿黄色素分层现象绿黄色素分层现象去镁叶绿素去镁叶绿素铜代叶绿素铜代叶绿素荧光现象荧光现象五、定量测定n（1）定量用叶绿素提取液制备n（2）分光光度计测定n（3）实验数据及其处理分光光度计测定分光光度计测定六、实验结果观察及计算n（1）实验结果观察描述 n（2）计算组织中叶绿体色素含量n （用mg/g鲜重或干重表示）公式 叶绿体色素含量=七、思考题n（1）叶绿素a、b在蓝光区也有吸收峰，能否用这一吸收峰波长进行叶绿素a、b的定量分析？为什么？n（2）用不含水的有机溶剂如无水乙醇、无水丙酮等提取植物材料，特别是干材料的叶绿体色素往往效果不佳，原因何在？n（3）研磨提取叶绿素时加入CaCO3.石英砂各有什么作用？