台盼蓝染色方法
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1、台盼蓝染色方法基本性质中英文名称:台盼蓝(Trypan Blue)或称台盼兰、锥虫蓝分子式:C34H24N6O14S4Na4分子量:960.82可溶于水(10mg/ml)是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性。还常用于细胞是否存活。活细胞不会被 染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。机理正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或 细胞膜不完整的细胞,胞脸的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧 失,即可认为细胞已经死亡,这与中性红作用相反。因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、 快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色
2、方法之一。 注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进 行比较精确的定量。台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单。步骤步骤:(来自supergama)1、4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馆水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过 滤,4度保存。使用时。用PBSM释至0.4%。(也可买Gibco的成品);2、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当桶释。3、染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。(终浓度0.04%)4、计数:在三分钟内,分别计数活细胞和死细胞。5、镜卞观察,死细胞被染成明显的蓝色,而活细胞拒染呈无色透明状。6、统计细胞活力:活细胞率()=活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)X100% 其他保存条件室温保存说明有潜在致癌危险为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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