台盼蓝染色方法

台盼蓝染色方法基本性质中英文名称：台盼蓝（Trypan Blue）或称台盼兰、锥虫蓝分子式：C34H24N6O14S4Na4分子量:960.82可溶于水（10mg/ml）是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。还常用于细胞是否存活。活细胞不会被 染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。机理正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或 细胞膜不完整的细胞，胞脸的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧 失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、 快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。 注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进 行比较精确的定量。台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。步骤步骤：（来自supergama）1、4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馆水研磨，加双蒸水至100ml,用滤纸过 滤，4度保存。使用时。用PBSM释至0.4%。（也可买Gibco的成品）；2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当桶释。3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。（终浓度0.04%）4、计数：在三分钟内，分别计数活细胞和死细胞。5、镜卞观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。6、统计细胞活力：活细胞率（）=活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）X100% 其他保存条件室温保存说明有潜在致癌危险为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。