薄层色谱分析步骤及注意事项

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1、薄层色谱分析步骤及注意事项薄层色谱法(thin layer chromatography简写TLC)是一种物理化学的分离技术，常用于药物的分离与分析。现对此方法的分析步骤及注意事项提点建议。完成TLC分析通常需经制板、点样、展开、检出4步操作。制板在一平面支持物(通常为玻璃)上，均匀地涂制硅胶、氧化铝或其他吸附剂薄层、样品 的分离、检测就在此薄层色谱板上进行。一般选用适当规格的表面光滑平整的玻璃板。常用的薄层板规格有：10cmx20cm、5c mx20cm、20cmx20cm等。称取适量硅胶，加入0.2%0.5%羧甲基纤维素钠溶液(CM C-Na)，充分搅拌均匀，进行制板。一般来说10cmx2

2、0cm的玻璃板，35g硅胶/块； 硅胶与羧甲基纤维素钠的比例一般为1： 21： 4。制好的玻璃板放于水平台上，注意 防尘。在空气中自然干燥后，置110C烘箱中烘0.5山，取出，放凉，并将其放于紫外 光灯(254nm)下检视，薄层板应无花斑、水印，方可备用。点样用微量进样器进行点样。点样前，先用铅笔在层析上距末端lcm处轻轻画一横线， 然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样，如果要重新点样，一定要等前一次点样残余 的溶剂挥发后再点样，以免点样斑点过大。一般斑点直径大于2mm，不宜超过5mm. 底线距基线12. 5cm，点间距离为lcm左右，样点与玻璃边缘距离至少lcm，为防止 边缘效应，可将薄层板

3、两边刮去12cm，再进行点样。展开将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中，由于毛细管作用，展开溶剂在薄层 板上缓慢前进，前进至一定距离后，取出薄层板，样品组分固移动速度不同而彼此分离。 展开室应预饱和。为达到饱和效果，可在室中加入足够量的展开剂；或者在壁上贴 两条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖。 展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂，并且临用时新配为宜。 薄层板点样后，应待溶剂挥发完，再放人展开室中展开。 展开应密闭，展距一般为815cm。薄层板放入展开室时，展开剂不能没过样点。 一般情况下，展开剂浸入薄层下端的高度不宜超过0.5cm。 展开剂每次展开后，都需要更换，不能重复使用。 展开后的薄层板用适当的方法，使溶剂挥发完全，然后进行检视。 Rf值一般控制在0.30.8，当Rf值很大或很小时，应适当改变流动相的比例。斑点的检出展开后的薄层板经过干燥后，常用紫外光灯照射或用显色剂显色检出斑点。对于无色 组分，在用显色剂时，显色剂喷洒要均匀，量要适度。紫外光灯的功率越大，暗室越暗, 检出效果就越好。展开分离后，化合物在薄层板上的位置用比移值（Rf值）来表示。化合物斑点中心至原点 的距离与溶剂前沿至原点的距离的比值就是该化合物的Rf值。