色谱柱的填装

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1、液相色谱柱的填装匀浆法高压匀浆法：将填料悬浮在适宜的匀浆液中制成匀浆，在其尚未沉降之前，很快地以高压泵 将其以很高的流速压进柱中，便可制备出填充均匀的柱子。高压匀浆法的设备，如图所示。r+ 12-2-下行洗站甘示畚*I1 祖刊: 2二知诳 AF : 3IK AF 袒:J tff ; 5 习法 住.ifl 柱:；杵七在装柱之前，先确定所用的柱型，以确定选用多大的匀浆罐体积。例如，常用的“标准”HPLC柱为M.6mmX250mm，其内腔体积约为4.2mL，约需3.5g填料。一般情况下，为保证 填充的成功，需适当过量15%-20%为宜。如使用4g填料充填它，选择固-液比约为1:10， 则匀浆罐体积以

2、4mL为宜。若罐过大，则可在匀浆罐内装入一个以惰性材料(如聚四氟乙烯 或不锈钢)制的衬套将其调整至所需体积。将选用的柱子仔细以乙醇或丙酮清洗干净，并以干净的热风吹干。如柱管内壁污染较重， 也可以用表面活性剂及去离子水依次清洗，并以长竹签或塑料棒扎上棉纱或纱布往复抽擦， 以除去污垢。但应注意不要伤及内壁表面的光洁度，尤其不能造成轴向的划痕。将清洁的柱 管的一端装配上带滤板的柱头，另一端则连接至匀浆罐上。将涂覆或键合好的硅胶均匀分布在22mL正己烷/异丙醇(90/10，v/v)配比液中， 加入约3mL液体石蜡，使其变粘稠，然后超声振荡混合液使硅胶分布均匀，之后迅 速把制备的匀浆液倒在匀浆罐内，正己

3、烷/异丙醇(90/10，v/v)为流动相，调整装柱 机以400kg t/cm2公斤力，维持约20min装填色谱柱，之后缓慢减小装柱机压力，使 压力自动减为零，卸下色谱柱，将柱头安装好即得到手性色谱柱。配制体积比为正己烷：异内醇F ： 1的混合溶液1000niL.取20 mL混合溶液加入已深覆的硅胶的烧瓶中，滴加液体疽蜡2 mL,损拌将之制成匀浆.将句浆液转移到匀 浆罐牝 连好拍柱机,调整压力为Hf Pa,持续给压15瑚 之后将斥力降到100 个大气压下稳定10 min,小心个下柱子,连接接头,密封接头保存特测,i.倒作乎性分离柱配制体枳比为烷：弁丙醇=9 :】的派音溶液I 000 ml- 取5

4、mL的烧瓶加入援 枝的碰股0一2新 加入业ttlL聊制的混合掖，浦如液体石蜡2hiL*搅拌构乏制成匀浆- 将与浆被转移到勾浆雌中，连好拍柱机，调殖JE力为4g 个火U成下,持续给压 Imm 之后常压力降到1W 个大气压F袍定lOmin,取F柱:产，姓援头，密封篷头，保存待测。表H,4姓台硅胶制福物制表序号弟体MJv / mol/LLewi s 隘|LAo / mol/L淫r剂83-1L-APPCA1-0无0.1CH3OHSO 3-2L-AFPCA1.0(0101OJ辱cmLr-APICA1-0Yb(i10aCI g 2.6.2手性分离柱的制备于性分离柱的制留过程如下=肯先配制体枳比W 90:

5、I 0的正己烷和异灼醇的混合溶 200mL,称取 左mL咳溶液将其倒入巳涂覆好的氯内基旌胶中，再向其中滴入如1L液 体石蜡，搅拌并用超生振满使其均匀分散.然后将甚迅速倒入匀浆灌中，装柱机压力维持 在AOOks t/cim，W, H/I=50/10（v/v-）为流动相，15分钟后关闭装柱机压力按健，当床力为琴 时，将色i普柱取下来.安装好待用“色谱柱规格2?cm0.2QcLn D.称取所需重量的填料，将其置小烧杯中，按其重量的10倍量（一般也可以按体积计，即10mL 的匀浆液中加入尾重的填料）加入匀浆液。摇动或搅拌均匀后，将其移至超声波浴中，以 中强的超声波令填料粒子均匀而稳定地悬浮起来。最后，

6、再以强超声短时间强化一下。超声 处理的时间不宜过长，一般应不超过2-3min，过长则可能造成颗粒的破碎。将准备好的勾浆液立即倒入匀浆罐中，装满后，将匀浆罐盖好、旋紧，再以针筒抽取 一定量的匀浆液，从盖子上的连接孔中插入匀浆罐内部并加注匀浆液至从连接孔中溢出为 止。这一操作的目的是排除匀浆罐中的空气泡，空气泡的存在会妨碍向系统中迅速地施加压 力。抽出注射针并将罐与气动放大泵的出液管路相连。确认连接正确且牢固后，即可开启放 大泵的截门，令贮存于气动放大泵内的顶替液（正相时可以使用氯仿，反相时可使用甲醇） 高速压入罐内。以常见的5um多孔硅胶填料为例，填装压力为50MPa左右（细孔硅胶可至 70MP

7、a）。这里使用的是瞬间升压的方式，也有文献报道使用程序加压。加压时，匀浆液中 的填料滞留于柱尾的滤板上而匀浆液则被排除于柱外。开始时，排出的匀浆液因含部分气体， 释压后会逸出而使液体浑浊。待全部匀浆液被排出后，因顶替液黏度较少而流速亦稍加大， 且排出液有明显的外观上的变化。此时，可以稍稍降低填充压力，例如，降至约35MPa，并 维持30-40min，然后，在约30min,内逐步将压力降至常压。降至常压后，宜静置一段时间， 例如30min,，以让柱床内的压力平衡。否则，过早拆卸下已填充的柱子时，会因柱子内部 的残余压力而将柱头上的填料挤出往外。拆下已填装好的柱子并装配上带有筛板（滤网）的 柱头（

8、注意：一定要将沾在柱头锥套上的填料除净，否则会影响到柱子的密封性），做好标 记，即已完成柱子的填装。注意的问题是： 高压操作的安全问题。常发生的问题是柱子与匀浆罐连接不牢，造成加压时柱头被高压冲 下或柱子从匀浆罐上滑脱。此时，轻则填装失败，材料损失，重则造成人身伤害事故，一定 要加以防范。除每次填装前均须仔细确认是否连接正确且牢靠外，最好还可加上由法兰盘和 长螺杆组成的预防脱落装置，以防万一。 通常，先填装的柱床较后填装的柱床紧密。因此，当使用时宜以相反的方向为宜，即让近 匀浆罐一端作为使用时流动相的出口，而填装时的出口端则作为流动相的入口。 新柱子使用前应以甲醇冲洗20-30min后，再改用流动相平衡。 新柱子宜选适宜的标准样品进行评价并记录，以备存查和比较。