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1、一、MS培养基母液的配制注意：1.大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl22H2O单独配母液成分规定量浓缩倍数称取量mg母液体积ml配制1升培养基吸取量定容编号种类1大量 元 素KNO3190010190001000100NH4NO316501016500MgSO4 7H2O370103700KH2PO41701017002CaCl2 2H2O44010440010001003微 量 元 素MnSO4 4H2O1002230100010ZnSO4 7H2O100860H3BO3100620KI10083Na2MoO4 7H2O100251001004铁盐Na2
2、-EDTA100373010001010027805有机物甘氨酸10010050010盐酸吡哆醇10025盐酸硫铵素1005烟酸100256肌酸100100500050010制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸 馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称或编号，浓缩倍数，配制日期和配制者姓 名，CaCl22H2O配制同上置于另一小口瓶中。2. 微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐FeSO47H2O和Na22O作为一组单独 配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容
3、在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存， 贴上标签。3铁盐配制将FeSO47H2O和Na22O分别溶于450mlml，置于小口瓶中，贴上标签。4.有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容 在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。5母液最好在24C的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内 用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。1制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的分 析纯。2称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。 生长调节剂母液配制：为了
4、操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍 加计算，按需要量取即可。不同药品在配制时假设不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸NAA吲哚乙酸IAA，赤 霉素GA32, 4-D等生长素和玉米素ZT可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加 热。冲动素KT和6-苄基嘌吟BA可溶于少量lmol/L的盐酸中，叶酸需用少量稀氨水溶解。称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母液每毫升那么含有生长调节物质， 配制后一般要求在低温04C保存，配制培养基时如每升1000ml需添加的生长调节剂物质为时，那 么取1ml母液即可。
5、二、培养基配制和灭菌一养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数公式1：母液吸取量=母液体积CCX母液浓缩倍数培养基要求的含量公式 2：母液吸取量=各种生长调节剂母液每 CC 的含量二 各种母液按顺序编号排列A. aCl.2H0； C.mg/ml的NAA称取50mg，NAA用少量95%酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml； G.22细胞分裂素、冲动素KTmg/ml的KT称50mgKT用少量1N HCL溶解后，加蒸馏水定容至100ml。(三)配制培养基1000ml1. 琼脂：称取57g琼脂，参加300ml蒸馏水，加热溶解直至完全溶解为止.2. 蔗糖3%用质量较好的白糖代替，称取30
6、g白糖，溶于溶有琼脂的300ml蒸馏水中。3. 各种母液的吸取(1) 用50ml量筒量取大量元素母液A和CaCl22H2O母液B各100ml(2) 分别用10ml移液管或吸管吸取微量元素C，铁盐D母液各10ml(3) 用10ml移液管或吸管吸取有机物H10ml(4) 移取激素将上述溶液全部混合于琼脂与蔗糖溶液中，混合均匀后，加热至80C左右，用酸度计或精细PH试纸测 定培养基的PH 一般要求，过酸过碱那么用1NNaoH和1N HCL调整。二分装：用一个接有胶管的分装器趁热装培养基，1000ml培养基分装到25-30个三角瓶中，每个三角瓶 约30ml左右一般占试管、三角瓶容量1/41/3左右注：
7、培养基勿碰瓶壁。三. 包装：分装好的三角瓶用封口膜包扎好，标明培养基代号即可进展灭菌。用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、烧杯、铝锅等用水洗涤干净，然后 按次序放回原处。三、高压蒸汽灭菌锅的使用方法具体操作步骤：1. 高压锅放水至平把架；2. 把包扎好的培养基装入高压锅;3. 盖上热压锅盖,上紧螺帽（注意对角拧紧螺帽）关上气阀和平安阀.4. 然后接通电源.5. 压力计升至 0.05MPa 时，翻开放气阀,排除冷空气（此步很重要）。6. 排除冷空气后，关闭放气阀，待压力升到O.llMPa位置时，开场计算灭菌时间，具体方法：当压力锅指 针升至0.12MPa时，关闭电源，待指
8、针下降至O.llMPa时接通电源，不断重复此操作过程，维持20分钟。7. 灭菌时间到达20分钟后，除去电源，翻开放气阀（注意要逐渐放气）待高压锅内的空气完全排除后，翻 开热压灭菌锅盖（注意对角扭松螺帽）稍待冷后再把培养基取出。8. 经过灭菌的营养培养基不宜放置太长，应尽早使用，但为了在使用前能检查培养基有无微生物污染，可将培养基置于25C下保存4天，如果培养基需要贮存较长时间，可在4C低温下保存。灭菌高压锅有大型卧式、中型立式、小型手提式等多种型号和规格，无论哪种型号，操作的步骤都很相 近。进水一放进培养基一盖紧锅盖一关上放汽阀一检查平安阀一接上加热源一待压力升至O.O5MPa时排锅 内冷空气
9、，关上放气阀一0.11MPa（121C）下灭菌2025分钟，保持稳定压力一除热源一逐渐翻开放气阀一 锅内空气排除完后一开放锅盖一稍冷后取出培养基。常用彳植物激素类别名称缩写词分子量使用浓度范围母液配制说明生长素2, 4 二氯苯氧乙酸2，4 D0.001 10mg/L生长素通常 用NaOH溶 液滴至溶解 成溶液。能溶于乙醇IAA易被植物 细胞所氧化。故培养基中很 少单独使用。a萘乙酸NAA0.001 10mg/L吲哚一3乙酸IAA0.001 10mg/L吲哚一3 丁酸IBA0.001 10mg/L细胞 分 裂6苄基氨基嘌吟BA分裂素通常 能溶于稀NaO H，含水乙醇或稀盐酸玉米素不耐 热，不能高
10、压 灭菌。6糠基氨基嘌吟KTN异戊烯氨基嘌吟玉米素ZT赤霉素赤霉素ga3能溶于乙醇不耐热不能高 压灭菌在愈伤 组织和悬浮培 养物的启动和 保持生长时才 需要有时小植 株再生时也需 要四、常用药品的配置方法1.1mol/L HCl的配制：根据盐酸的密度37%盐酸溶液的密度为/毫升，假设要配制1000ml2.1mol/L的NaOH的配制：称40gNaOH,然后融于1000ml的蒸馏水中。定容到100ml3.95%的酒精配制成75%的酒精:用量筒量取750ml的95%酒精参加200ml的蒸馏水即可得到75%的酒精。如果用无水酒精配制75%的酒精，那么量取750ml的无水酒精，再加水250ml。4. %的升汞配制：先称取1克升汞粉末，然后用蒸馏水溶解最后定容到1000ml。5. ：称取2.4-D，用少量1mol/LNaOH助溶，然后定容到100ml。mg/ml的6-BA的配制：称取6-BA，用少量1mol/L HCl或1mol/LNaOH助溶，然后定容到100ml。mg/ml的NAA的配制：称取0.05gNAA，用少量95%酒精助溶，然后定容到100ml。
MS培养基及常用试剂的配制
