松疱锈病菌检疫技术操作办法

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1、松疱锈病菌检疫技术操作办法字体：大中小2009-9-1来源：省林检局阅读：185次关闭1主题内容及应检范围1.1 本办法规定 了松疱锈病菌 Cronartium ribicola J. C. Fischer ex Rabenhorst 的 检疫检验及检疫处理操作办法。1.2本办法适用于林业植物检疫机构对松属Pinus spp.中单维松植物活体、带皮 原木以及转主寄主中茶藨子属Ribes spp.、马先蒿属Pedicularis spp.的植物活体 或带菌材料的检疫检验和检疫处理。2产地检疫2.1种苗繁育基地的建立2.1.1种苗繁育基地及其周围500 m以内，必须铲除茶藨子和马先蒿等转主寄主 植

2、物。2.1.2种植培育的五针松苗木应定期调查，发现可疑苗木应立即拔除集中烧毁。2.2踏查2.2.1在种苗繁育基地、天然林、人工林、种子园、母树林、贮木场及加工场（点）、 集贸市场，以林班线、小班线、林间道路或木材堆垛为单位，或选择有代表性的 林分（或堆垛）进行线路踏查。2.2.2春季（4-5月）调查松树皮层是否增厚变软、产生裂缝，从中生出橘黄 色疱囊，破裂后释放出黄色锈孢子粉并伴有流胶；5-7月调查林间转主寄主植 物（茶藨子或马先蒿等）叶片背后是否有具被膜的黄色丘疹状夏孢子堆；7-9 月是否有红褐色毛刺状的冬孢子柱；秋季（9-10月）调查针叶是否有黄色至红 褐色斑点，枝干皮层是否产生橘黄色“蜜

3、滴”（即有甜味的性孢子液）及皮下“血 迹斑”（性孢子液风干后的痕迹）。2.2.3在储木场或加工场所、集贸市场调查新鲜带皮原木皮层是否有黄色锈孢子 粉。2.2.4经踏查确认有疫情，需进一步掌握危害情况的，应设标准地（或样方）做 详细调查。2.3标准地（或样方）调查2.3.1种苗繁育基地设置与调查2.3.1.1样方的累积面积应不少于调查总面积的0.1% - 5%。2.3.1.2每块样方面积为1 - 5 m2或1 - 2 m长的条播带。用五点取样法或对角 线取样法，抽取样树不得少于30株。2.3.2林分标准地设置与调查2.3.2.1片林按林分面积设置，5 hm2以下（含5 hm2）设1块；5 hm2

4、以上按发 生总面积的2%设置。2.3.2.2每块标准地面积为0.1 hm2,采取对角线取样法抽取样树25株，进行病 害分级调查。2.3.3贮木场及加工场（点）、集贸市场样方的设置与调查2.3.3.1带皮原木应采取楞垛表层或分层方式设点调查。2.3.3.2调查数量为每批次（堆、垛）不得少于3 - 6根样木，每根样木选设10 cm X20 cm样方数4-6个。2.4病害分级标准单株病害分级标准I级全株健康无病代表值0;II级侧枝发病，有蜜滴或疱囊代表值1；III级干部发病，有蜜滴或疱囊，病斑占树十周长1/2以下代表值2；W级干部发病，有蜜滴或疱囊，病斑占树十周长1/2以上代表值3；V级全株死亡代表

5、值4。林分病害分级标准（以被害株率为标准）轻发病株率5%以下；中发病株率6% - 10%；重发病株率11%以上。3调运检疫3.1抽样比例3.1.1苗木按一批货物总件数（株）的5%抽取，少于10件或100株的应全部检 查。3.1.2带皮木材、原木少于5 m3的全部检查；5 m3以上的抽样数量不得少于总 数的10%。3.2 抽样方法3.2.1苗木按抽样比例，采取分层方式，随机设5个样点进行抽样。3.2.2带皮木材、原木按抽样比例，采用楞垛表层或分层方式逐根进行检查。3.3现场检验3.3.1 3-5月，用肉眼或借助放大镜检查松树植株活体干枝皮部表面是否有锈 孢子器或锈孢子粉，8-10月检查树皮下部是

6、否有性孢子器（或血迹状斑痕）。3.3.2 6-8月检查茶藨子或马先蒿等转主寄主叶片背面是否有橘黄色夏孢子堆 或红褐色的冬孢子柱。4检疫检验4.1症状检验4.1.1松树寄主症状检验4.1.1.1 4-7月间检查发病植株的枝干部是否有流脂、皮层肿大、破裂并从裂缝 中生出黄白色至橘黄色的锈孢子器（疱囊）或散发出大量锈黄色的锈孢子。4.1.1.2 8月下旬-9月中旬，感病枝、干皮层可见初期呈白色后变橘黄色泪滴 状“蜜滴”（即性孢子液），“蜜滴”消失后皮下可见“血迹”状斑。4.1.2 转主寄主症状检验5-9月（南方5-8月，北方7-9月）调查茶藨子属、马先蒿属等转主寄 主植物叶片背面有无带油脂光泽、具包

7、膜的橘红色丘疹状夏孢子堆，在夏孢子堆 中或其周围组织是否有红褐色毛刺状的冬孢子柱。4.2 形态鉴定4.2.1性孢子（o） 无色，鸭梨形，单胞，大小为（2.4-4.5） pmX （1.8-2.5） pm；性孢子器黄白色或橘黄色，基部（皮层下）宽8 mm以下，平展于松树皮 层中。4.2.2锈孢子（I ） 单个孢子锈黄色，成堆时橘黄色，球形或卵圆形，大小为 （22.8 - 33.6） pmX （14.4-28.8） pm，表生柱状疣突；并有一与疣突顶部共处 一球面的平滑区；锈孢子器由无色梭形细胞组成疱囊状或圆柱状包膜所包裹，初 为黄白色，后为橘黄色，生于枝干皮层外，高4-6 mm，短径3 - 5 m

8、m，长径4 -40 mm。4.2.3夏孢子（II） 鲜黄色，球形、卵形或椭圆形，表面有刺，大小为（15.6 -30） pm X （13.1-20.6） pm；夏孢子堆丘疹状突起，橘红色，具油脂光泽， 破裂后呈橘红或红褐色的粉堆。4.2.4 冬孢子（III）褐色，长棱形，表面光滑，大小为（3659） pm X （13.0 13.5） pm；冬孢子柱初为黄褐色，后呈红褐色，呈毛状，直立或弯曲，直径 87 - 165 pm，长50 - 1900 pm，多从夏孢子堆中生出，少数从夏孢子堆外的新叶 组织中生出。4.2.5担孢子（W） 单胞，透明无色，球形，具油球，顶端有一喙状小尖突； 大小为10 - 1

9、2 pm。4.3 显微化学检验4.3.1检测对象3a生以下实生苗或非发病季节的可疑罹病松针、枝干部皮层。 4.3.2选取1 - 3 a生幼苗上带有黄色或红褐色斑点的松针1cm段或罹病松针之 小（侧）枝5 cmX5 cmX 1 cm大小皮层作样品；对成龄植株枝干上有黑色粗皮 者，于病健组织交界处切取2cm X4cm大小的树皮2-3块作为受检样品。4.3.3将采集的可疑性针叶组织样品和枝干皮层组织样品，用FAA固定液脱脂 处理2-24h后供切片用。FAA固定液配方:福尔马林5 ml +冰醋酸6 ml + 50% （适合柔软组织材料）+70%酒精（适合坚硬组织材料）89 ml,充分混合即成。4.3.

10、4检验药品及工具4.3.4.1 药品：醇溶性苯胺蓝、无水乙醇、番红花红、乳酸、苯酚、甘油、硫 酸、亮绿、孔雀石绿、福尔马林、蒸馏水等。4.3.4.2工具：生物显微镜、分析天平、试剂瓶、刀片、吸管、染色板、镊子、 洗瓶、量筒、量杯、载玻片、盖玻片等。4.3.5 试剂配制0.25%苯胺蓝液：醇溶性苯胺蓝0.25 g + 95 %乙醇100 ml,充分摇匀；0.05 %番红乙醇液：番红花红T 0.05 g + 50 %乙醇100 ml,充分摇匀；乳酚蓝液：乳酸20 ml +苯酚20 g +甘油40 ml +蒸馏水20 ml + 0.25 %苯 胺蓝液0.3 ml,充分摇匀；0.1 %亮绿液：亮绿SF

11、 0.1 g+无水乙醇100ml,充分摇匀；0.3 %番红福尔马林液：番红花红T 0.3 g +福尔马林100ml,充分摇匀；5%孔雀绿液：孔雀石绿5g+蒸馏水100ml,充分摇匀；0.5%番红液：番红花红T 0.5 g +蒸馏水100 ml,充分摇匀；浮载剂：5%硫酸液。4.3.6染色检验方法及结果根据试验条件，可选择下列任一种染色方法即可。4.3.6.1苯胺蓝一番红染色法待检组织切片置于载玻片上+ 0.25%苯胺蓝液 （媒染剂）染色5 min蒸馏水冲洗0.05%番红乙醇液浸染1-3 min 蒸馏水 漂洗干净一镜检。如被侵染，则菌丝呈蓝色至蓝绿色，寄主组织呈黄色至棕黄色。 4.3.6.2乳酚

12、蓝染色法待检组织切片置于载玻片上+乳酚蓝液浸染5-10 min蒸馏水漂洗干净+ 5%硫酸（作浮载剂）镜检。如被侵染，则菌丝呈蓝色， 寄主组织呈木黄色或本色。4.3.6.3亮绿一番红染色法待检组织切片置于载玻片上+0.1%亮绿液浸染3 -5 min 蒸馏水清洗0.3%番红福尔马林液染1 - 5 min 蒸馏水漂洗干净镜 检。如被侵染，则菌丝呈绿色，寄主组织呈棕红（黄）色。4.3.6.4孔雀石绿一番红染色法待检组织切片置于载玻片上+5%孔雀绿液浸 染2min蒸馏水清洗0.5%番红液染3-5 min蒸馏水漂洗5%硫酸（作浮载 剂）镜检。如被侵染，则菌丝呈绿色，寄主组织呈棕红（黄）色。4.3.7根据上

13、述染色检验结果和柱锈属Cronartium分种检索表（附录），在待 检皮层细胞内发现菌丝时，可确认样品被松疱锈病菌侵染。如仅在松针细胞内发 现菌丝，则不能区分样品是被松针锈病菌Coleosporium sp.还是松疱锈病菌侵染， 需进一步通过试种观察确定：如针叶组织中的菌丝不向枝干皮层蔓延，则非松疱 锈病菌，反之，即为松疱锈病菌。5除害处理5.1调运检疫和复检中，发现带有锈孢子器或性子器的带皮松原木，必须去皮并 将病皮销毁。5.2发现茶藨子或马先蒿等转主寄主植物叶背有夏孢子堆或冬孢子柱时，应予销 毁。附录柱锈属Cronartium分种检索表1. 单维松寄生2双维松寄生42. 五针松寄生；锈孢子

14、器基部（皮层下）宽8 mm以下3单叶松和食用松寄生；锈孢子基部宽10 mm以上西方柱锈菌C. occidentale3. 转主寄主以茶藨子为主藨子柱锈菌茶藨子专化型C. ribicola f.sp. ribicola转主寄主以马先蒿为主藨子柱锈菌马先蒿专化型C. ribicola f. sp.pedicularis4. 生枝干上5生球果上115. 病部皮层坏死形成溃疡 6病部皮层不坏死，木质部增生形成木质瘿瘤106. 锈孢子表面无光滑区7锈孢子表面有光滑区87. 锈孢子梨形至棒形云兰柱锈菌C.comandrae锈孢子长椭圆形阿巴拉契亚柱锈菌C.appalachianum8. 病部木质部增生形成纵向隆起带香蕨柱锈菌C.comptoniae病部皮层增生略肥大呈长梭形99. 锈孢子表面有明显的光滑区；分布北美洲类鞘孢柱锈菌C.coleosporioides锈孢子表面有近似的光滑区；分布欧洲和亚洲柔软柱锈菌C. flaccidum10. 瘿瘤球形，半球形栋柱锈菌C. quercuum瘿瘤梭形栋柱锈菌梭型专化型C. quercuum f. sp.fusiforme11. 锈孢子器半埋于寄主组织中；分布美国东南部球果柱锈菌C.strobilianum锈孢子器完全突出寄主表面；也可危害小枝形成髓质瘤；分布美国南部至中美 洲椎型柱锈菌C.conigenum