《T淋巴细胞的分离技术》由会员分享，可在线阅读，更多相关《T淋巴细胞的分离技术（2页珍藏版）》请在装配图网上搜索。
1、T淋巴细胞的分离技术(一) 原理混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时，B细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上，而多数T细胞则通过尼龙毛柱，这是获得富含T细胞群的有效方法。(二) 材料及试剂1. 尼龙毛(Femwall Laboratories,LP 1 Leukoqak leukocyte Filters)。2. 烧杯、铝箔、漏斗、一次性手套等。3. 装填尼龙毛柱，一次性注射器。4. 取自然沉降的上层血浆，过聚蔗糖一泛影葡胺分层液后，获取的血浆和分层液之间的单 个核细胞层。(三) 操作方法1. 尼龙毛的清洗与干燥(1) 戴上已经洗去滑石粉的一次性手套，将尼龙毛(1包或2包，
2、每包35g)放入烧杯中，加入蒸馏水或去离子水，用铝箔盖上烧杯并煮沸约10min。(2) 冷却至常温，倒入漏斗内，使水滴干。(3) 重复(1)、(2)步骤6次。(4) 将尼龙毛摊在铺有纱布的方盘内，37C温箱干燥23天后，贮藏在带盖的方盘内。2. 装尼龙毛柱(1) 取50ml玻璃注射器，拔去注射芯，在注射器头上套一段带夹子的胶管。(2) 将尼龙毛梳理，并适当折叠，以适应注射器的直径，填入注射器内，约20ml的体积。(3) 将填好尼龙毛的注射器连同注射器芯一起包好，高压灭菌。3. 细胞分离(1) 将注射器固定在支架上，倒入37C的细胞培养液，关闭阀门一定时间，然后打开阀门， 放掉细胞培养液，以清洗
3、几次尼龙毛，关上阀门。(2) 将要分离的细胞液用预先加温的培养液稀释成适当的浓度，约5.00X 107个细胞/ml。(3) 将细胞液倒入注射器内，使之没过尼龙毛柱。盖上注射器，37C温育45min至1h。(4) 打开下口，缓慢放流(1滴/min)，收集于离心管中。(5) 离心，即获所需的T淋巴细胞。(6) 关闭注射器下口，于注射器内加入0.85%冰冷生理盐水，振荡，并套上注射器芯，打 开下口，使劲推出注射器内液体，即获得粘附于尼龙毛上的B淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞 等。(四) 注意事项1. 此种分离法，T淋巴细胞也常有一部分被吸附，吸附的多少与尼龙毛的质量有关，与装 柱的松紧也有关系。2. 此法的T淋巴细胞的回收率约20%30%。3. 用过的尼龙毛可回收，以盐水洗涤，然后浸入0. IMol/L的HC1中过夜，然后再同前法清 洗。
T淋巴细胞的分离技术
