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1、沪EMSHANDONGUNIVERSITYOF TECHNOLOGY发酵工艺学实验报告糖化酶发酵、提取及活力测定实验学 院：生命科学学院专业班级：生物工程1602项目组成员：刘松良、张金中、蔡超、何建雨、周钻钻指导教师：王丽娟2018年6月糖化酶发酵、提取及活力测定实验何健雨王丽娟生命科学学院生工1602班1. 实验目的(1) 了解黑曲霉生长特性，学习糖化酶发酵工艺；(2) 了解黑曲霉生长特性，学习糖化酶发酵工艺。(3) 学习并掌握糖化酶活力测定方法2. 实验原理葡萄糖淀粉酶(glucoamylase,EC.3.3.13)系统名为淀粉a-1,4-葡聚糖葡萄 糖水解酶，俗称糖化酶，是国内酶制剂中
2、产量最大的品种。糖化酶对淀粉分子的作 用是从非还原性末端切开a-1,4键，也能切开a-1,3键和a-1,6键,生成葡萄糖。生产糖化酶常用的菌种是黑曲霉,将活化好的黑曲霉制成抱子悬浮液,转接 接到三角瓶直接进行发酵，或转接到三角瓶作为种子，进行一次扩大培养后，再转 接到发酵罐进行糖化酶发酵。黑曲霉糖化酶是一种胞外酶。首先采用过滤法将菌体等杂质除去,继而对滤 液进行浓缩，最后用有机溶剂如乙醇将酶沉淀出来，对沉淀物进行干燥,加工成成 品。糖化酶有催化淀粉水解的作用，能从淀粉分子非还原性末端开始，分解 a-1,4键,生成葡萄糖。葡萄糖分子中含有的醛基能被次碘酸钠氧化，过量的次碘 酸钠钠，酸化后析出碘，
3、再用硫代硫酸钠标准溶液标定,计算酶活力。酶活力定义：1g固体酶粉(或1mL液体酶)，于559CpH4.6的条件下，1h分解可 溶性淀粉产生1mg葡萄糖，即为一个酶活力单位，以U/mL(U/g)表示。3. 实验材料优质大麦芽粉、大米粉、酒花；耐高温T A淀粉酶、糖化酶；乳酸(磷酸)； 0.025 mol/L碘液；温度计(100C)、恒温水浴锅、糖度计、布氏漏斗、分析 天平、纱布、玻璃仪器。4. 方法步骤待测酶液的制备：称取酶粉1-2g,精确至00002g,先用少量的乙酸缓 冲液溶解，并用玻璃棒捣研，将上请液小心倾入容量瓶 中。沉渣部分再加入少量缓冲液，如此捣研3-4次，最后 全部移入容量瓶中,用
4、缓冲液定容至刻度（估计酶活力 在100-250U/mL范围内），摇摇匀。通过4层纱布过滤滤，滤 液供测定用。丿r甲 比 色 管05 niL可溶性淀粉|3 + 5 mL缓冲液丿化5 mL可溶性淀粉+ I 5 mL缓冲液 ）（摇匀，迅速冷却）乙比色管（吸取5 mL至碘量販）/x （加入碘諾液10mL ）（吸取5 mL至碘量瓶）丁 、（加入碘溶液10mL ）/甲比色管a口入0.1 MNaOH 15 ml?)” 、了摇匀，密闭于暗处反应、15 min。口入0.1 MNaOH 15mL）您匀，密闭于暗处反应、15 min丿乙比色管（加H2SO4溶液2 mL） 厂 、 QC即用Na2S；O3滴定至呜 I 色恰応消失 丿（加H2SO4溶液2 mL ）丁立即用Na；S2O3滴定I至蓝色祐好消失丿4.实验结果发酵液110干酶泥0.03上清发酵液上清干酶泥A5.36.9B3.76.0酶活92.8452.15. 结论与讨论结论：干酶泥所需剂量普遍高于发酵液上清，干酶泥酶活更高。讨论：实验过程中PH调节无法做到精准，可能会造成误差。实验总结（含实验体会、关键步骤、注意事项等）实验体会：通过本次实验，了解了糖化酶发酵、提取及活力测定的方法; 关键步骤：鲜酶泥一定要完全转移，不可有浪费，否则会导致测量不准 注意事项：将鲜酶泥转移到称量纸上进行干燥，勿用滤纸，滤纸会吸附
糖化酶发酵、提取及活力测定
