环境卫生学及管理监测

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1、一、空气消毒效果监测非洁净区域空气消毒效果监测（一）采样时间：在消毒处理后，操作前进行采样。（二）采样方法：根据其采样原理分：平板暴露法和微生物采样器法。1、平板暴露法：布点方法（1）室内面积W30 m2,设置内、中、外对角线3个点，内、外布点部位距墙壁1m处;央5布点样!放在室内各米样点处，米样咼 暴露5min,盖好立即送检。攵并鉴定。5） 平板暴露法结果计算：因5分钟内在100cm2面积上降落的菌落数相当于10升空气中所含的菌落数，其计算公式 如下：细菌菌落总数（cfu/ m3） = 50000N/（AXT）式中A为平板面积（cm2）； T为平板暴 露时间（min）;N为平板菌落数（cfu

2、）注意事项：采样前应关好门窗和空调，无人走动情况下，静止10min再进行采样。（6）结果判断环境类别范围标准值菌落总数cfu/m3致病菌*I类层流洁净手术室、层流洁净病房W10cfu/m3（或 0.2cfu/平板）不得检出II类普通手术室、产房、婴儿室、早 产儿室、烧伤病房、供应室无菌 区W200cfu/m3 （或 4cfu/平板）不得检出III类儿科病房、妇产科检查室、注射 室、急诊室、换药室、治疗室、 化验室、供应室清洁区、各类 普通病房和房间W500cfu/m3（或 10cfu/平板）不得检出注：*致病菌指溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌2、空气微生物采样器采样法（1）应使用符合卫生部消毒技

3、术规范医院内感染及其管理公共场所卫生监督监测 要点要求并推荐使用的产品。（2）计算方法：细菌菌落总数cfu/m3=平均菌落数（cfu）/每分钟采气量（L） X采样时间（min/）（3）结果判断：同平板暴露法。二、手卫生效果的监测方法（一）采样时间：在接触患者、进行诊疗活动前采样。（二）采样方法：被检者五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱水液浸湿的棉拭子在双 手指曲面从指跟到指端往返涂擦2次，一只手涂擦面积约30cm2,涂擦过程中同时转动棉拭 子；将棉拭子接触操作者的部分剪去，投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，及时 送检。（三）检测方法：将采样管在混匀器上振荡20秒或用力振打80次，

4、用无菌吸管吸取1.0ml 待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，平皿内加入已溶化的45C-48C的营养 琼脂15ml-18ml,边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36C1C温箱培养48h,计数菌落数。（四）计算方法：细菌菌落总数（cfu/cm2）=平板上菌落数X稀释倍数/采样面（cm2）（六）结果判断：医务人员手卫生规范4.4手消毒效果应达到如下相应要求：卫生手清毒，监测的细菌菌落总数应W10cfu/cm 2外科手消毒，监测的细菌菌落总数应W5cfu/cm 2医务人员手卫生规范8. 1监测要求：医疗机构应每季度对手术室、产房、导管室、 层流洁净病房、骨髓移植病房、器官移植病房、重症监护病房、

5、新生儿室、母婴室、血液 透析病房、烧伤病房、感染疾病科、口腔科等部门工作的医务人员手进行消毒效果的监测； 当怀疑医院感染暴发与医务人员手卫生有关时，应及时进行监测，并进行相应致病性微生物 的检测。三、物品和环境表面消毒效果监测（一）采样时间：在消毒处理后进行采样。（二）采样面积：被采面积V100cm2取全部表面；采样面积2100 cm2，取100cm2（三）采样方法（棉拭子法、压印法两种）棉拭子法：用5X5cm的标准灭菌规格版，放在 被检物体表面，用浸有含有相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子，在规格板内横竖往返均匀涂 抹5次，并随之转动棉拭子，可连续采样14个规格板面积。剪去手接触部分，并将棉拭

6、子放入装有10ml含相应中和剂的试管内，立即送检。门把等小型物体则采用棉拭子直接在 物体表面按一定顺序涂抹采样，结果计算用cfu /件表 示。1、步骤（在25cm2规格板内横竖往返均匀涂抹各5次，连 续采4个规格板面积）2、检测方法：（1）细菌总数检测:将采样管在混匀器上振荡20s或用力振打80次，用无菌吸管吸取1.0ml 待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入已溶化的4548C的营养琼 脂1518ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36C1C左右温箱培养48h，计算菌落数。（2）致病菌检测检测原则：致病菌的检测依据污染情况进行相应指标的检测（3）计算方法：细菌菌落总数（cfu/c

7、m2）=平皿上菌落平均数X采样液稀释倍数/采样面积（cm2）（四）结果判断环境类别范围标准值菌落总数cfu/m3致病菌*I类层流洁净手术室、层流洁净病房W5不得检出II类普通手术室、产房、婴儿室、早产儿 室、烧伤病房、供应室无菌区W5不得检出III类儿科病房、妇产科检查室、注射室、 急诊室、换药室、治疗室、化验室、 供应室清洁区、各类普通病房和房间W10不得检出IV类传染病科及病房W15不得检出注：*致病菌指溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌。母婴同室、早产儿室、婴儿室、新 生儿室及儿科病房的物体表面不得检出沙门氏菌。四、使用中消毒液染菌量测定（一）采样时间：采取更换前使用中的消毒剂与灭菌器械保存液

8、；（二）采样量及方法：在无菌条件下，用无菌吸管吸取1.0ml被检样液，加入9.0ml含相 应中和剂的采样管内混匀；（三）检测方法：1、涂抹法：用无菌吸管吸取1.0ml消毒液，加入9.0ml含相应中和剂的采样管内混匀，用 无菌吸管吸取上述溶液0.2ml,滴于干燥普通琼脂平板，每份样品同时做2个平行样，一平 行样板置20培养7d,观察霉菌生长情况，另一个平板置37 C温箱培养72h,计算菌落数, 同时检测致病菌。消毒液染菌量（cfu/ml）=每个平板上的菌落数X502、倾注法：用无菌吸管吸取1.0ml消毒液，加入9.0ml含相应中和剂的采样管内混匀，分 别取0.5ml放入2只灭 菌平皿内，加入已溶

9、化的45C-48C的营养琼脂15ml- 18ml，边倾 注边摇匀，待琼脂凝固，一平板置20 C培养7d,观察霉菌生长情况；另一平板置37C温 箱培养72h，计数菌落数，同时检测致病菌。消毒液染菌量（cfu/ml）=每个平板上的菌落数X20（三）结果判断：使用中消毒液染菌量W100cfu/ml,不得检出致病菌；无菌物品保存液应无菌生长。 注意：采样时应无菌操作，正确选用中和剂，采样后1小时内检测。医院需要常备消毒剂的中和剂消毒齐U中和剂含氯（碘）消毒剂（有效氯或碘0.1%0.5%）硫代硫酸钠（0.1%1.0%）过氧乙酸溶液（0.1%0.5%）硫代硫酸钠（0.1%0.5%）过氧化氢溶液（1.0%3

10、.0%）硫代硫酸钠（0.5%1.0%）甲醛溶液（1%）1%双甲酮与0.6%吗啉的混合液0.1%0.5%亚硫酸钠25%氢氧化钠戊二醛溶液（2%）甘氨酸（1%）或甲醛（1%）季按盐类消毒剂（0.1%0.5%）Tween80(0.5% 3.0%)+ 卵磷脂(1.0% 2.0%)酚类消毒剂Tween80 (0.5%3.0%)碱类消毒剂等当量酸酸类消毒剂等当量酸酸性氧化电位水硫代硫酸钠(0.5%)+PBS(0.03mol/L)复方消毒剂Twee n80 +卵磷脂+硫代硫酸钠消毒实验用试剂磷酸盐缓冲液(PBS, 0.03mol/L, ph7.2)无水磷酸氢二钠2.83g磷酸二氢钾 1.36g将各成分加入到1000ml蒸馏水中，待完全溶解后，调ph至7.2-7.4,于121C压力蒸汽 灭菌20min备用。无菌检验用洗脱液吐温-80 1g蛋白胨 i0g氯化钠 8.5g将各成分加入到1000ml 0.03mol/LPBS液中，加热溶解后，调ph至7.2-7.4,于121C压 力蒸汽灭菌20min备用。环境卫生学监测结果分析流程