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1、芦丁的提取与鉴定一、实验目的要求1、熟悉黄酮类化合物的提取原理。2、掌握芦丁的提取的基本方法。二、实验重点和难点芦丁的提取的基本方法。三、实验原理芦丁亦称芸香苷，广泛存在于植物界中，其中以槐花米(槐树的花蕾)和乔 麦叶中含量较高。槐花米中的含量为1216%，已知的成分为：1、芦丁：熔点为177178C，为淡黄色小针状结晶。溶解度为：冷水中1： 8000，热水中1： 200，冷乙醇中1： 300，热乙醇中1： 30。难溶于乙酸乙酯、 丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂。2、槲皮素(Quercetin)：熔点为316C，313314C，黄色结晶。溶于热 乙醇1： 60、冷乙醇1： 650，可
2、溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、吡啶，不 溶于石油醚、乙醚、氯仿和水中，实验室以稀硫酸水解，乙醇重结晶制得。3、皂苷：其粗品为白色粉末，经酸水解后得二种皂貳元及糖的部分，两种 皂苷元为桦脂醇和槐花双醇，另外还含有槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素 等。本实验用芦丁在热水冷水溶解度差别较大的性质，用热水提取，然后再利用 其在热乙醇和冷乙醇中溶解度的差异，进行精制。四、实验仪器、试剂与材料1、仪器：棉花、500ml烧杯、1000ml烧杯、电热套、漏斗、架盘天平、真 空泵、抽滤瓶、布氏漏斗、滤纸、剪刀、冷凝管、蒸馏烧瓶、乳胶管、研钵、量 筒、容量瓶、试管、紫外分析仪、层析缸、聚酰胺酯薄层板。2、试
3、液：(1) 4mol/L硫酸溶液：取硫酸24ml，边搅拌边加入60ml水中，放冷，加 水稀释至100ml，摇匀，即得。(2) 1%三氯化铝乙醇溶液：取三氯化铝1g，加水溶解使成100ml，摇匀， 即得。(3) 0.1mol/L硝酸银试液：取硝酸银1.75g，加水溶解使成100ml，摇匀， 即得。(4) 10%氨试液：取氨10ml，加水溶解使成100ml，摇匀，即得。3、试剂与材料：槐米、芦丁对照品、乙醇、硫酸、碳酸钡、盐酸、镁粉、 醋酸铅、a-萘酚、正丁醇、醋酸、三氯化铝、硝酸银、氨水、氯仿、甲醇、丁 酮、乙酰丙酮。五、操作步骤1、芦丁的提取：取20g槐花米于烧杯中漂洗干净，捞取上浮的花蕾，弃
4、去 下沉的杂质，将洗净的花蕾置于1000ml烧杯中，加沸水500ml,煮沸50分钟， 不断补充蒸发掉的水分，趁热过滤（用棉花），再用200ml水提取40分钟，合并 两次滤液，浓缩1/2体积，放置过夜，析出芦丁。抽滤，沉淀用少量冷水洗三次， 抽干，60C以下干燥，称重计算收率。2、重结晶：将粗制芦丁研细，加95%乙醇回流溶解（每2g芦丁加70ml左 右乙醇）趁热过滤，滤液浓缩至原体积的1/31/4，放置，析出结晶，抽滤， 干燥称重，得精制芦丁，计算收率。3、水解：取1/2量精制芦丁，加少量乙醇回流溶解，然后加4mol/L硫酸溶 液（1g芦丁加80ml硫酸）水浴回流1小时，待全部水解后，蒸去乙醇，
5、冷却， 析去槲皮素，抽滤，滤液内含糖。槲皮素沉淀经水洗、抽干、干燥，称重，计算 收率。再用乙醇重结晶一次，得黄色针晶，为槲皮素精品。含糖的溶液，取10ml于水浴上加热，同时于搅拌下加碳酸钡细粉中各至中 性，滤除白色的硫酸钡沉淀，滤液在水浴上浓缩至12ml，供纸层析用。4、层析鉴定：（1）槲皮素和芦丁的纸层析鉴定：1）点样：取层析滤纸距下端3cm处用铅笔划线，为原点线，每隔1.5cm处 点样品，将点好样品的滤纸在层析缸中饱和30分钟，再上行展开。2）试液：芦丁乙醇液、芦丁标准品乙醇液、精制槲皮素乙醇液。3）展开剂：正丁醇-醋酸-水4： 1： 5。4）显色：可见光下观察色斑，紫外灯下观察萤光光斑点
6、；喷1 %三氯化铝 乙醇溶液再观察萤光斑点。（2）糖的纸层析鉴定：1）点样：取一号滤纸距下端3cm处用铅笔划线，为原点线，每隔1.5cm处 点样品，将点好样品的滤纸在层析缸中饱和30分钟，再上行展开。2）试液：水解液、葡萄糖水溶液、鼠李糖水溶液。3）展开剂：正丁醇-醋酸-水4： 1： 5。4）显色：氨性硝酸银溶液（临用时等量0.1mol/L硝酸银试液与10%氨试 液混合而成）喷洒，加热观察色斑。（3）槲皮素和芦丁的薄层层析鉴定：1）固定相：聚酰胺酯薄层板。2）样品：精制芦丁、芦丁标准品、精制槲皮素。3）展开剂：氯仿-甲醇-丁酮-乙酰丙酮16： 10： 5： 1。4）显色：可见光下观察色斑，紫外灯下观察萤光光斑点；喷1 %三氯化铝 乙醇液再观察萤光斑点。六、结果与讨论1、计算芦丁收率，讨论影响收率的因素。2、根据色谱结果分析所制备的芦丁纯度。
芦丁的提取与鉴定
