人体组织及其他斑痕法医学.ppt

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1、人体组织的检验,中山医学院法医物证教研室 李建金,概述 毛发检验 软组织检验 其他组织检验,概述,人体组织是重要的法医物证之一 在案发现场常遗留有组织,器官 骨骼碎片,牙齿,指甲,毛发等,法医物证鉴定就是通过对人体组织的遗传 标记的检测来进行个人识别和亲子鉴定 用于法医检案的人体组织如下: 软组织(皮肤,肌肉,脏器) 硬组织(骨骼,牙齿) 角化组织(毛发,指趾甲等) 角化组织和硬组织对腐败有较高的抵抗力,往往 能保存很长时间,在个体识别鉴定中有实用价值,概述 毛发检验 软组织检验 其他组织检验,毛发检验,毛发的特点,结构 毛发检验的目的和要求 与毛发相关的鉴别 毛发的脱落和损伤 毛发的个人识别

2、 毛发微量元素的分析,分布广泛:除手掌、足底、唇外,身体其它部位均有毛发。 生长较快:毛发由皮肤毛囊细胞产生,生长的速度不一, 健康人头发约0.2-0.3mm/日;胡须约0.4mm/日。 耐久性极好:距今2000多年古尸(马王堆古尸)的毛发, 其结构保存良好。 位于体表: 受外力作用,易脱落而长期遗留于现场。 较少检材量:一小段毛发即可进行ABO血型、线粒体DNA 、 基因组DNA等多态性检测。,毛发的一些特点,毛发的结构,大体结构 毛 干(hair shaft) : 毛小皮 毛皮质 毛髓质(外 内) 皮质,髓质内含色素颗粒 、角蛋白、ABH血型物质等。 毛根(hair root): 毛球,毛

3、囊,毛乳头 毛尖(hair tip) (图),毛 发 的 超 微 结 构,1、毛干:,毛囊:包围毛根,由表皮内根鞘、外根鞘、 真皮的结缔组织鞘组成。,毛发的形态与颜色 人类毛发形态与种族,遗传,生长部位有关 颜色除于上述因素有关外,还与年龄相关。 毛发的理化性质: 是一种角蛋白,耐腐败,可溶于弱碱性溶液 毛发中含有多种微量元素,其含量具有个体差异,可供个体识别。,毛发检验应解决的问题,是否毛发? 是人毛还是动物毛? 是谁的毛发? 什么部位的毛发? 是自然脱落还是暴力拔脱的毛发? 毛发有无损伤?,毛发的鉴别,毛发与其它纤维的区别(镜检) 毛发有皮、髓质之分,其它纤维无。 人毛与动物毛的区别(镜检

4、) 人毛皮质发达,髓质不发达且多有间断; 动物毛皮质不发达,髓质发达少有间断。 部位的确定(肉眼观察) 头发 / 阴毛 / 其他部位毛发 毛发长度,形状, 染色的为头发,色素颗粒附在毛小皮外缘,毛发损伤,1、自然脱落与暴力拔脱的鉴别: *肉眼观察:自然脱落的毛发无毛囊附着; 暴力拔脱的毛发常有毛囊附着。 *颜色反应:5-10%亚硝基铁氰化钠使 拔脱毛发的毛球处呈鲜红色。 2、钝器伤与锐器伤的鉴别: *钝器伤:断端锯齿或撕裂状。 *锐器伤:断端整齐、锐利。,毛发的个人识别:,1. 形态学观察,2.ABO 血型测定,3.酶型检测,4. 毛发DNA分析,形态学观察,1。毛发的形态学和附着物检查 观察

5、和记录: 数目、长短、形状、颜色、大体结构、附着物性状、 根据附着物的成分可获得有关职业毛发来源等信息。 毛发是游离存在还是附着在其它物品上、 附着物品是否凶器。 必要时可借助放大镜或显微镜进行检查。,2.毛发结构观察,洗净毛发经脱色处理 后在显微镜下观察 观察色素颗粒 毛皮质、髓质的状态 毛小皮纹理(毛小皮印痕) 计算毛发直径,头皮毛发镜检,毛发直径的测定:显微测微计(接物计、接目计),接物计: 1mm范围内刻成100格,每格宽10um。 接目计:中央刻100格。 将接物计与接目计起始刻线重叠, 数接物镜的一格(10um)相当于 接目计的多少格(设为n格)则 接目镜的每格宽= 10um /

6、n 在镜下观察毛发直经占接目计的格数, 即可算出毛发直经是多少。,ABO血型测定(解离试验):,步骤: 水洗 / 脱脂 /压扁/抗体浸泡/离心/冷却/ 洗涤(5-10次)/加指示红细胞/镜检 注意: 压扁毛发是关键,充分暴露皮、髓质,使其血型物质与抗体充分接触而吸附。 抗体效价64倍以上;浸泡1-2小时,离心15-20分钟 洗涤次数是关键,最好用已知毛发作先行试验探索洗涤次数。,酶型检测:,有毛囊的毛发, 可检测PGM1、 ESD、GLOI等 酶型。,毛发的DNA分析,1.带毛囊的毛发扩增片段长度多态性 (毛囊内含有核DNA) chelex-100提取 STR基因座分析 性别分析 Y染色体上S

7、TR位点检测 扩增X-Y染色体牙釉基因,毛干的线粒体测序,毛干可进行线粒体DNA测序,但需排 除同一母系其它个体的可能性。,毛发中微量元素分析,通过检测头发种微量元素的含量和种类 可以帮助判断是否中毒,还可作个人识别 某种元素超出正常范围可帮助推断生活环 境和相关职业等 如长期接触铅作业者毛发中含铅量高,概述 毛发检验 软组织检验 其他组织检验,软组织检验,软组织的特性 软组织检验的目的和要求 种属鉴定 性别鉴定 个人识别,软组织特性,在凶杀、碎尸案、交通事故、意外事故等案件中,人体软组织可遗留在现场或附着在致伤物上。 常有病理组织(蜡块、切片)需要个人认定。 在亲子鉴定案中,也会遇到需取尸体

8、软组织作为标本的情况。 软组织在失去生理功能后容易自溶和腐败,要及时检查,还应警惕组织高度腐败时产生的获得性B物质。,软组织检验目的和要求,1.是否组织? 2.是人体还是动物组织?(种属鉴定) 3.是人体的何种组织? 4.个体识别。,免疫沉淀环实验 ALU序列种属鉴定,提取和送检,软组织比较容易腐败,送检时需注意的事项: 1.尽快送检。 2.低温保存 或 干燥处理,不宜用甲醛固定! 3.一般情况下取材应选择降解相对慢的, 如肌肉,脑组织比肝脾等内脏组织降解慢。,个人识别,ABO血型测定 丙酮浸泡除脂组织匀浆后粘附 纱布上,其后步骤同血痕。 同工酶测定 DNA分析 酚氯仿提取 chelex-10

9、0提取 STR分型,概述 毛发检验 软组织检验 其他组织检验,其他组织检验,指趾甲检验 骨及牙髓检验,指趾甲,指(趾)甲是角化组织,耐腐败 对mtDNA多态性检测有实用性价值 含有较多的ABH血型物质,用吸收试验测定 肥皂水洗净检材,蒸馏水冲洗,生理盐水软化2h ,水浴,DNA-STR分析。 NS 水浴,骨及牙髓,碎尸,高度腐败,白骨化,火灾时的烧焦尸骸 关键是提取基因组DNA 制备骨粉,牙粉 DNA提取液:,Tis-Hcl: EDTA: SDS : DTT : NaCl, 酚氯仿等,其它斑痕检验,尿斑检验,1.尿斑的证明,2.尿斑的ABO血型检测,3.尿斑的DNA检测,尿斑的证明,凃片检查:

10、,脲结晶试验:,氨的检出:,人尿斑的证明 1.用人尿斑的固有成份免疫家兔,制备相应抗体。沉淀素血清经人血清、唾液吸收后,对人尿起特异性沉淀反应。 2. 用琼脂糖扩散试验、免疫电泳检测。,三、尿斑的ABO血型检测 尿斑中的ABO血型物质含量很少(仅 为唾液的1/256),要经数次浓缩才能 检出。 步骤: 尿斑 生理盐水浸泡 离心取上清 蒸干(重复数次) 少许生理盐水溶解。 中和试验、ELISA进行检测。,四、尿斑的DNA检测 尿斑中含脱落上皮细胞, 同样可抽提出DNA,进行 性别基因及DNA多态性检测。,乳 汁 斑 检 验,1.乳汁斑的证明,2.乳汁斑的ABO血型检测,3.乳汁斑的DNA检测,乳

11、汁斑的证明,肉眼观察: 灰白色,有一定硬度。 镜检: 取1滴乳汁斑浸泡液于 镜下观察-可见: 乳汁球(脂肪球) 初乳则可见初乳小体(由变性脂肪细胞组成)。 产后2-3天分泌初乳(淡黄色); 第4天开始分泌乳汁 (乳白色)。,人乳汁斑的证明:,抗人血清环状沉淀试验:阳性。 紫外灯检查: 人乳呈淡紫白色; 牛乳呈淡黄色。 浓硫酸检查试验 乳汁+浓硫酸 人乳(褐色); 牛乳(紫色)。,人乳汁斑ABO血型检测,初乳中含有与血清中一致的抗A、抗B抗体,可用相应红细胞检测。 人乳汁斑中的A、B、H血型物质可 用中和试验、ELISA进行检测。,思考题,毛发有何特点? 毛发检验需解决哪些问题? 提取和送检组织材料时应注意什么? 为什么骨及牙齿是个人识别的重要检材?,谢 谢!,

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