3-050517-实验室质量控制操作规程

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1、福建省疾病预防控制中心作业指导书文件编号： FJCDCXAM 003-2005第 1 版 第 次修改艾滋病检测实验室质量管理受控状态:非受控 受控 受控号：第 13 页 共 13 页艾滋病检测实验室质量管理实验室质量管理包括质量保证、质量控制和质量评价。1 质量保证证（QA）1.1 行政政支持行政部门和领导导要关心艾滋滋病实验室的的建设和发展展，保证实验验室负责人和和主要技术人人员队伍的稳稳定，保证实实验室建筑和和设备需要、给给予充足的经经费支持，并并进行经常性性监督检查。1.2 实验验室规范化建建设艾滋病实验室的的设置及其建建筑、设施、设设备必须符合合艾滋病检检测工作管理理办法的要要求。1.

2、3 人员培培训及其评价价 实验室工作作人员上岗前前必须接受技技术培训并获获得合格证书书。在工作中中要定期或不不定期接受复复训。实验室室主管领导应应定期对工作作人员进行评评价，包括工工作的准确性性、效率、执执行安全条例例和规章制度度情况、职业业道德、出勤勤率以及上岗岗资格等。1.4 标本本采集、运送送和处理，严严格遵照FJJCDCXAAM001-2005。1.5 检测方方法和试剂的的选择应使用最适合的的检测方法和和敏感性高、特特异性好的试试剂，并定期期进行质量评评价。1.6 设备备维护与校准准设立常用仪器的的维护及校准准制度，以保保证正常运转转。1.6.1 酶标读数仪仪、洗板机每天：核对酶标标仪

3、滤光片波波长，检查洗洗板机管道是是否通畅，是是否有漏液现现象。每周：清洁仪器器表面，保护护光学零件不不沾灰尘。每月：检查洗涤涤时各孔是否否与相应的冲冲洗头对位良良好，负压是是否符合规定定要求。每年：检查、清清洗滤光片，如如果出现破裂裂或霉点则要要更换。根据据仪器内具有有的校准程序序或使用校准准板，对滤光光片的精密度度进行校准并并保留记录。实验过程中发现现异常情况，应应随时进行处处理，可根据据使用情况更更换必要的部部件。1.6.2 移液器一年至少应该标标定一次，发发现异常情况况应随时进行行校准。标定方法包括有有色溶液光谱谱分析法、称称量校准法、同同位素计数法法以及使用配配套校准盒等等。校准多道道

4、移液器时，必必须保证每一一个加样头都都能够连续、准准确地加样。移移液器的精密密度应在厂家家说明书规定定的范围内。范例 用蒸馏馏水称量法标标定移液器：在室温22无无风的工作室室中，在万分分之一级别天天平上放置一一个小三角烧烧瓶，用待校校准的移液器器吸取存放过过夜的蒸馏水水加入烧瓶底底部，称重并并计算蒸馏水水重量，连续续称重10次。加蒸蒸馏水的量根根据待校准移移液器的规格格而不同（见见下表），110次校准称称量均在要求求的重量范围围内为合格，贴贴上合格标签签，注明校准准日期，不合合格移液器要要请生产厂家家进行校准。填填写和保存校校准记录。 称称重法校准移移液器方案移液器规格蒸馏水量要求重量范围0.

5、510l2l1.75 - 2.25 mg540l10l9.8 - 110.2 mmg40200l70l69.4 - 70.6 mg20010000l300l298.0 - 302.0 mg15ml2000l1990.0 - 20110.0 mmg210ml3500l3485.0 - 35115.0 mmg1.6.3 冰冰箱和孵育箱箱：必须每天检查和和记录低温超超低温冰箱及及孵育箱的温温度，并作好好记录。1.6.4 定期检查其其他仪器设备备精密仪器及出具具实验结果的的仪器必须定定期校准，其其他仪器定期期检查并做好好记录。1.7 文件件和文件管理理1.7.1 标准操作程程序 (SOOP)艾滋病检测

6、实验验室要建立覆覆盖主要工作作内容的SOOP文件。 SOP由各岗位位工作人员起起草，实验室室主任审定，并并应定期修订订。修订应该该在实验室主主管人员（技技术负责人）的的领导下进行行，每年至少少一次。所有有工作人员要要在所从事工工作的SOPP文件上签名名表示已经阅阅读并掌握了了有关内容。u 艾滋病检测实验验室应建立以以下SOP：1）样品的接收收、登记和处处理2）检测方法和和步骤3）仪器的使用用与维护和校校准4）实验中的质质量控制5）结果解释与与报告6）保密程序7）检测数据的的记录与保存存8）追踪和处理理9）实验室的清清理和消毒10）实验室安安全防护u SOP通常包括括（但不限于于）以下内容容：1

7、）标题和编号号2）编写和修改改日期3）编写和修订订人员姓名4）方法、目的的和应用范围围5）相应的职业业规范6）检测设备和和试剂7）安全防护相相关步骤8）结果的解释释和报告9）附录，包括括相关的附加加文件如标准准表格、设备备和试剂盒说说明书等。1.7.2 实验原始记记录表应按实验要求，设设计操作的原原始记录表，标标明空白对照照、阳性对照照、阴性对照照、外部对照照以及待检样样品的位置，便便于指导实验验人员加样。要要注明试剂盒盒厂家、测定定方法、批号号、效期、操操作人员和复复核人员姓名名及检测日期期。1.7.3 标标本的登记收到标本后，及及时登记有关关参数，包括括受检者姓名名或代号、试试管编号、性性

8、别、年龄、职职业、送检单单位、人群类类别、检验结结果、送检日日期、报告日日期、备注 ( 必要时时记录通信地地址 )等。1.7.4 HIV阳性标标本的保存记记录包括HIV阳性性标本的类型型、贮存量、贮贮存温度、贮贮存起始时间间以及标本保保管人姓名。1.7.5 文件存档实验原始记录表表、打印数据据、免疫印迹迹试验的膜反反应条带或其其照片、检测测记录表、标标本登记、标标本保存记录录以及仪器设设备维修和校校准记录等都都应该妥善存存档保存5年以上。最最好同时使用用计算机保存存各种文件和和记录。2 质量控制制（QC）2.1 质控控血清的制备备和保存（以以ELISAA试验检测HHIV抗体为为例）在每次实验中

9、必必须包含有内内部对照质控控血清和外部部对照质控血血清。内部对照质控血血清指试剂盒盒内提供的阳阳性和阴性对对照血清。内内部对照是质质量控制的基基础。每一次次检测必须使使用内部对照照，而且只能能在同批号的的试剂盒中使使用。外部对照质控血血清是为了监监控检测的重重复性和稳定定性以及试剂剂盒批间或孔孔间差异而由由实验室设置置的一套对照照血清，包括括强阳性、弱弱阳性和阴性性对照血清。也也可以只设置置一个弱阳性性对照，以该该试剂盒临界界值（Cutt-off）的22-3倍为宜宜。2.1.1 外部对照质质控血清的制制备HIV抗体阳性性和阴性血清清，5630分钟灭灭活，30000转/分钟钟离心15分分钟。弱阳

10、性性对照可以用用HIV抗体体阴性血清梯梯度稀释HIIV抗体强阳阳性血清并标标定后得到。按按一年使用量量配制，用00.2m滤膜过滤除除菌。2.1.2 外部对照质质控血清的保保存1）按一周实验验用量分装、分分类、标记、封封口、-200冻存于非自自动除霜冰箱箱中。2）外部对照血血清不可反复复冻融，一旦旦融化后应该该存放2-88，供一周内内使用。2.1.3 外部对照质质控血清的使使用每一次实验必须须使用外部对对照质控血清清，以便监控控实验的重复复性和稳定性性。同时可以以了解各批试试剂盒的批间间或孔间差异异，绘制质量量控制图。2.1.4 外部对照质质控物的质量量要求质控物的管间或或瓶间变异必必须小于监测

11、测系统预期的的变异，并且且质控物的成成分应在稳定定状态中。质质控物应无菌菌，并不含有有影响ELIISA反应的的防腐剂。2.2 质控控图的建立及及应用（以EELISA试试验检测HIIV抗体为例例）最常用的质控图图是Leveey-Jennningss质控图2.2.1 建立质控图图参数外部对照质控物物的平均值和和标准差应建建立在实验室室常规使用方方法对质控物物重复测定的的基础上。一一般采用在不不同批次检测测取得至少220个数据；如果仅做少少量批次的检检测，也至少少做5个批次次的检测，每每个批次中不不少于4个质质控物测定结结果，以建立立一个临时性性的平均值和和标准差，当当达到20批批次数据后，替替代临

12、时性的的平均值和标标准差。1）算术平均值值( )：代表一组组S/CO值的的平均值。为为了统计学上上有显著性意意义，应该采采用至少200次(天)所测得的外外部对照质控控血清S/CCO值结果计计算出平均值值。2）标准差(ss)：是描述样样品与均数之之间离散程度度的一个指标标，是与对照照值的均值有有关的预期范范围。一组SS/CO值的的标准差以ss表示。3）变异系数(cv)：是反映各各次S/COO值相对于均均值离散程度度的一个指标标，可以用来来衡量检测的的重复性或精精密度。4）控制限：由由实验室根据据对质控物检检测结果的平平均值和标准准差来确定。例例如12S质控规则则的控制限为为外部对照SS/CO平均

13、均值加减2个个标准差；113S质控规则则的控制限为为外部对照SS/CO平均均值加减3个个标准差。计算公式为： x = nn s 计算公式为为： ( xn - x )2 s = n-1 cvv 计算公式为为： sscv = x 1000 %2.2.2 绘制质控图图质控图的绘制步步骤1）在常规条件件下，对同一一批血清连续续测定20次（天）或或以上，获得得一组S/CCO值，求均均数( )和标准差(s), 超出2s或3s的数据不应应删除。2）将均值( )和标准差(s)分别在质控控框架图中标标示出来。以以S/CO值作作纵座标(YY轴)，每一次(天)试验作横座座标(x轴)，绘制质控控图。3）从第21次次起

14、，将每次次质控血清的的检测结果依依次点入该质质控框架图中中，检验进入入质控状态。2.2.3 质控规则及及使用实验室在报告实实验结果之前前必须评价质质控数据，可可通过图形记记录的检查或或由计算机审审核结果来决决定。目前许许多质控规则则已被采用，常常用的是122S和13S规则。1）告警（122S）：当外外部对照的SS/CO值超超出 +2s范围时时，系统处于于告警状态，应应予注意，是是否可以继续续检测需要进进一步观察。若若将12S做失控标标准，有较高高的假失控概概率，所以一一般不采用。2）失控（133S）：当外外部对照的SS/CO值超超出 +3s范围时时，系统处于于失控状态，本本次实验结果果不能被接

15、受受，可能是系系统误差或存存在随机误差差。3）位移：连续续几次（3-5次）外部部对照S/CCO值都落在在均值的一侧侧则称为位移移，提示实验验条件发生了了较大的变化化重新绘制质质控图。4）趋势：连续续几次（5-7次）外部部对照S/CCO值几乎按按一个方向分分布时称为趋趋势，通常由由参数的缓慢慢改变引起。质控规则的使用用应检出随机机误差和系统统误差，即具具有高的检出出分析误差的的能力，同时时应具有较低低的假失控概概率。考察试试验系统的可可靠性应采用用多标准质控控方案，多规规则质控方法法能提高误差差检出，并具具有低的假失失控概率。其其要点为：出现一次2s范范围的变化时时，系统处于于告警状态，应应予注

16、意，是是否可以继续续检测需要进进一步观察。出现下列情况时时，应暂停检检测查找原因因：出现一次次3s范围的的变化、连续续两次出现同同一方向2ss范围的变化化、连续四次次出现同一方方向的1s范范围的变化、连连续十次结果果都在1s范范围内，但落落在均值线的的同一侧。2.2.4 质控图的分分析及失控处处理实验室应建立质质控图分析及及失控情况处处理程序当质控已有计划划并恰当地执执行时，要求求可靠的平均均值和标准差差用于计算质质控限，将假假失控概率降降到最低。当当出现失控时时进行如重复复质控测定或或重新分析新新的质控物不不是最有效的的方法，必须须找出问题原原因，找出解解除故障的方方法，并消除除原因，防止止

17、将来出现同同样的问题。2.2.5 绘绘制和分析质质控图的要点点1）要在常规条条件下建立质质控图参数，用用S/CO比值绘制制质控图。对对同一批质控控物连续测定定得到20个数据，求求均数( )和标准差(s), 超出2s或3s的数据不应应删除。2）由专人负责责建立质控图图，每月定期期召开质控分分析会，讨论论本月的质量量控制情况。3）建议长期和和稳定地使用用一种质量好好的试剂盒，更更换不同厂家家的试剂盒后后，必须重新新绘制质控图图。改用新批批号试剂盒也也应重新制作作质控图。使使用新批号或或不同厂家的的试剂盒必须须在质控图上上注明使用日日期。 4）发现质控结结果失控，应应填写报告单单，上交质量量负责人，

18、分分析原因并决决定是否发出出检测报告。5）使用新批次次的外部对照照质控物时，必必须重新绘制制质控图。变变异系数(cv)小于20，表示示外部对照处处于稳定状态态。2.3 即刻刻法”质控“即刻法”质控控方法是在对对同一批外部部质控血清连连续测定3次次后，即可对对第3次检验验结果进行质质控。具体计计算方法如下下：2.3.1 将质控血清清的测定值从从小到大排列列：x1，x2，x3xn(x1为最小值，xxn为最大值)2.3.2 计算 和和s2.3.3 计算SI上限值和SI下限值SI上限=X最大值-sSI下限=-X最小值s2.3.4 将SI上限、SI下限与SI值表（表表4）中的数数字比较。表4 SII值表

19、nn3sN2snn3sn2s31.151.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.3761.941.82152.712.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.882.561）当SI上限限和SI下限 nn3s值时说明明该值已在33s范围之外外，属“失控”。数值处于于“告警”和“失控”状态应舍去去，需重新测测定该质控血血清和病人样样品。舍去的的只是失控的的这次数值，其其他测定值仍仍可继续使用用。3 质量评价价（EQA）室间质量评价是是检验实验室室对未知样品品获得正确结结果的能力。3.1 评价价体系3.1.1 艾滋病参比比实验室和一一些艾滋病确确认中心实验验室参加相关关国际机构的的室间质量评评价活动。3.1.2 艾滋病参比比实验室对全全国艾滋病确确认中心实验验室和艾滋病病确认实验室室进行室间质质量评价，并并负责提供室室间质量评价价标本、评价价标准以及有有关文件。3.1.3 艾滋病确认认中心实验室室对本省的艾艾滋病初筛筛筛查实验室进进行室间质量量评价。3.2 参加加国家艾滋病病参比实验室室组织的室间间质量考评