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1、血糖影响因素及血糖的测定,浙江中医药大学生命科学学院 生化教研室,【实验目的】,学习体内哪些激素对血糖浓度有影响。 学习和掌握葡萄糖氧化酶法测血糖的原理和操作方法 。,【实验原理】,人和动物血糖浓度受神经、激素的调节，维持相对稳定。胰岛素和肾上腺素是调节血糖浓度的两种重要激素，前者使血糖浓度降低，后者使血糖浓度升高。 葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，能与苯酚及氨基安替比林作用产生红色醌化合物。醌的产量与葡萄糖量成正比。与葡萄糖标准溶液比较，可计算得到血浆葡萄糖浓度。,【实验试剂与器材】,速效胰岛素、盐酸肾上腺素、抗凝剂（草酸钠或草酸钾、肝素钠、柠
2、檬酸三钠） 禁食四小时以上兔子两只 葡萄糖试剂盒（、标准液） 酶标板、板条、微量进样器、注射器、烧杯 酶标仪、生化培养箱,【实验步骤】,注射激素前后血浆样品制备 （1）动物准备: 正常家兔两只,实验前禁食4小时以上,称体重.记录并标号。 取血： 在耳缘静脉处进行，用酒精棉擦拭兔耳，使血管扩张，用棉花擦干，用针筒采血或于取血处涂薄层凡士林，然后用刀片割破耳缘静脉，将血液收集于草酸钠抗凝管（每ml约需2mg草酸钠）内,边接边摇,以防凝固，取约5ml，用普通离心机2000rpm离心10分钟，取上清分装备用，编号为兔血清、；,注射激素后再取血: 将一家兔皮下注射胰岛素(1单位/kg体重),另一只家兔皮
3、下注射肾上腺素(0.4mg/kg体重).分别记录在注射时间.注射肾上腺素20分钟,胰岛素30分钟后,按上述方法或颈静脉取血各取5ml于抗凝管内,用普通离心机2000rpm离心10分钟，取上清分装备用，编号为兔血清、,血浆样品萄葡糖测定 工作试剂配置： 取一支试管，加入R1 4.5ml与R2 0.5ml混合。 取酶标板一块，板条一条，加入板框中，设定空白管A1，标准管A2.A3，测定管A4.A5，A6.A7，A8.A9，A10.A11（做两管取平均值，可减少实验误差）,混匀，37保温15min，以空白管调零，505nm波长处测定各管吸光度值。 计算 血糖含量=A样/A标标准溶液浓度,混匀置于37
4、孵育箱，反应10min后，在酶标仪上进行比色测定，测定波长为492nm，用空白管A1调零，读取标准管及测定管吸光度。,【结果与计算】,血浆葡萄糖浓度= 标准管葡萄糖浓度(5.55mmol/L),【讨论】,血糖的来源： 1碳水化合物的消化和单糖的吸收：机体进食后，食物淀粉在唾液淀粉酶、胰酶、小肠黏膜分泌的二糖酶作用下水解成单糖。经过载体主动转运入十二指肠和空肠壁内，并扩散入血。 2糖原的分解：在饥饿时，肝储存的糖原在葡萄糖-6-磷酸酶作用下，分解成葡萄糖入血，是空腹血糖的直接来源也是维持血糖浓度恒定的重要机制。 3糖异生：空腹时，体内的非糖物质如氨基酸、乳酸和甘油可经肝脏的糖异生作用生成葡萄糖，
5、参与血糖的恒定。,二、血糖的去路： 1有氧氧化 2合成糖原 3转换成甘油三酯、蛋白质或氨基酸等非糖物质。 4当血糖浓度高于肾糖阈时，从尿排出。 三、血糖的调节： 1降血糖的激素主要是胰岛素，另有胰岛素样生长因子 2升血糖激素有胰高血糖素、肾上腺素、生长激素和皮质醇。,四、测定的临床意义： 1生理性高血糖：摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时 2病理性高血糖： （1）糖尿病 （2）内分泌腺功能障碍 （3）颅内压增高 （4）脱水引起高血糖 3生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动 4病理性低血糖：（1）胰岛B细胞增生和胰岛B细胞瘤等，胰岛素分泌过多。 （2）对抗胰岛素的激素分泌不足。 （3）严重肝病患者，储存糖原功能及糖异生等功能低下。,
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