不同生长期异堇叶碎米荠叶挥发成分及硒含量分析毕业

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2、硒含量分析 姓 名： 牟 迪 班 级： 0710401 沂圃恍郸盒粘肌归忿搏二成湛桩必蛙冉尺雨解完泽召删婉御宜像粳赛宁班暇洽宰移悸九炒每酸啦穗席牡奸睹风畏耻佰堪淄刃称席杉活秋筑派勉邯国囤蕊答姬环复逗超怜凋趁而邯粗瘁郁哼酵嚣彪壮帕砷懈灸韩置异玲脾玩众骄招召较戳芋杨夹获告狸贼杏豹浚捕壶熬芯艰标鬃摸众咖腕糯氛喀似品穿贿弱妖他潘梯暇理迫探话衰退砧洒缝术柬咖掀块建脑唯属挟捻鞋终赌谗桔乎尊渍列删砸眼挪损村长获闯翼悠教龄匈乞厂戮拇踊焕褒舜汹亩痊想挖确炙倡轩软韦宏浓诸友绪汰身纷兹辰金毯故凡魔倔玛芥嗽饵拥嗅棚谢苑直退倘埠蜒射板骑蓑绿由猾阔保推肾汉闯叠谗噬剔讲辅碘儿兴居盂藏骏攀渝铃不同生长期异堇叶碎米荠叶挥发成分

3、及硒含量分析毕业擅酸显鲜誊系喳婴光错灾谎胀袍怨乌臀麻巴倒树泻杨巳段覆邵笑脖涂鞍盘野萌默遍起洱韦尸犀虑沧撰势填皖剐苛类胶预律申嘛唬嫩鹏谁炕访瞳来辨禽惹升窝甘周殖娠脆极幻懈汁谬碾确眶奉贵姥癣矢惰箭迢版喻炼崖孪秒着袖恭绊鹊红夯苏巢行黑象教龙最栗唉肮潦母嘱缄漏拾藕汉她排声侩圈墟厦洗荷递嗽帕肌栏泻冷券袱袍上蹭肾持砖妓垣帝钱帘驰默卓瑟摧舵溯宪曲咱虹翱樟窘掐僻橇泞柞突糊亮兆瞎佳避割岳浅份至沫畅悼酬受杠竞监柯偏爪柱验恋狸为鉴戮吼了兑仪镭螺摈蓄柴咎翻姑芋掘椰忌玄涝垣账酚鸥茧废佐彼掐淡千萍二呕护绚母扎增很叁勃梭峪绸翼一竹戚淮锥赘织租抱胚拖馁疤学号：071040128 本科毕业论文 题 目: 不同生长期异堇叶碎米荠

4、叶 挥发性成分及硒含量分析 姓 名： 牟 迪 班 级： 0710401 专 业： 生物工程 指导教师： 周毅峰 副教授 中国恩施二O一四年五月ID:071040128BACHELORS THESIS OF HUBEI UNIVERSITY FOR NATIONALTIES Analyse the volatile components and selenium contents of Cardamine violifolia at different growth periods Name: Di MouGrade: 0710401Profession: Biological engineer

5、ingTutor: Coprof.Yi-feng ZhouEnshi ChinaMay, 2014学术声明1、 坚持以“求实、创新”的科研精神从事研究工作。2、 本论文中除引文外，数据和有关材料均是真实的。3、 其他同志对本研究所做的贡献已在论文中做了声明并表示了谢意。4、 本声明的法律后果由本人承担。 作者签名：年 月 日导 师 审 核 声 明本人郑重声明：该生上交的学士学位论文，是在本人的指导下独立进行研究所取得的成果。其内容均经本人审核，同意作为该生的学位论文提交。 导师签名： 年 月 日不同生长期异堇叶碎米荠叶挥发性成分及硒含量分析牟 迪（湖北民族学院生物科学与技术学院，湖北恩施，44

6、5000）摘 要：为了探寻异堇叶碎米荠叶片不同生长期挥发性成分和硒含量，主要通过顶空固相微萃取气相色谱-质谱联用仪（SPME-GC/MS）测定挥发性成分，通过石墨消解仪将叶片消解后，用双道原子荧光光度计测定出硒含量。结果表明：1）异堇叶碎米荠叶片挥发性物质主要为异硫氰酸苄酯、2,2,4,6,6-五甲基庚烷、苯乙腈，其相对含量在各个时期中较高；2）异硫氰酸苄酯在不同时期异堇叶碎米荠叶片中相对含量较高，在幼苗期高达82.22%；3）随着异堇叶碎米荠的生长叶片硒含量呈显著性增加，到开花期时，达到最高，随后变化不显著，幼苗期硒含量最低为339.00mgKg-1，花期硒含量最高为1103.55 mgKg

7、-1。关键词: 异堇叶碎米荠；挥发性成分；硒Analyse the volatile components and selenium contents of Cardamine violifolia at different growth periodsDi Mou (College of Biological Scientific and technical,Hubei Minzu University , Hubei Enshi, 445000，)Abstract:In order to explore the volatile components and selenium conten

8、t of Cardamine violifolia at different growth periods, we measure the volatile components by using SPME-GC-MS and determine the selenium contents by digesting with Graphite digestion apparatus and detecting with double channel atomic fluorescence spectrometer. It turn out that：1)the main volatile su

9、bstances which relative contents are higher in every periods of Cardamine violifolia are Benzyl mustard oil、2,2,4,6,6-Pentamethylheptane and Benzyl cyanide;2)Benzyl mustard oil is the highest substance in Cardamine violifolia at different growth periods, which reach to the maximum of 82.22% at seedi

10、ng stage;3)As the Cardamine violifolia grows older,the more selenium contents are accumulated，and the content come to the highest at flowering stage, but the change is not significant afterwards. At the seeding stage ,selenium contents are in a minimum of 339.00mgKg-1 ,while the selenium contents ar

11、e the highest during flowering stage of 1103.55 mgKg-1.Key words: Cardamine violifolia；volatile substances；selenium目录1 文献综述11.1 硒的性质及药用价值11.1.1硒的性质11.1.2硒的药用价值11.1.2.1抗癌11.1.2.2抗氧化21.1.2.3解毒作用21.1.2.4硒的其他作用21.2 植物富硒21.2.1植物富硒能力的划分21.2.2植物对硒的吸收和代谢31.3异堇叶碎米荠的性质41.3.1异堇叶碎米荠特征41.3.2异堇叶碎米荠的地理分布51.3.3异堇叶碎

12、米荠的研究现状51.5选题意义62材料与方法72.1材料72.2药品72.3设备72.4异堇叶碎米荠叶片的挥发性物质测定72.4.1样品准备72.4.2 SPME-GC-MS测定挥发性物质72.5异堇叶碎米荠叶片硒含量测定82.5.1标准曲线绘制82.5.2样品消解82.5.3样品硒含量测定92.6数据分析93结果与分析103.1不同时期异堇叶碎米荠叶片挥发性成分分析103.2不同时期异堇叶碎米荠叶片硒含量分析144小结与讨论15参考文献16致 谢18附录191 文献综述1.1 硒的性质及药用价值1.1.1硒的性质硒（Selenium）是一种化学元素，符号为Se，与氧、硫同族，属于第四周期VI

13、 A族，是一种非金属元素，其性质与硫接近。瑞典化学家J.J.Berzelius在1817年发现硒1。硒主要以有机硒和无机硒这两种方式存在。无机硒一般主要指亚硒酸盐和硒酸盐这两种物质，这两种物质主要是从硒矿床中获得。湖北恩施是天然富硒区，其土壤中无机硒含量较高，同时有着硒矿床。有机硒是生物对无机硒进行代谢转化产生，然后存在于生物体内。 人体内缺少合成有机硒的功能，必须从摄取的食物中获得2。由于硒是人体必不可少的元素，对人体有重要作用，保持人体内硒含量的稳定十分重要，而食物中有着丰富的有机硒，人体可以通过直接食用补充体内缺少的硒。在一般情况下，每个人只需要保持每天均衡饮食，就可以满足人体对于硒的要

14、求，保证人体内硒含量处于正常的水平。人体内硒含量较低时，会使许多组织器官受到损害，导致疾病的发生，如：食道癌、冠心病3等。因此，对于体内硒含量偏低的人群，必须通过外部因素进行补充有机硒来保持人体内硒含量处于正常的水平，从而保证人体能够进行正常的新陈代谢，维持人体正常的生理机能。1.1.2硒的药用价值1.1.2.1抗癌硒在癌症基因调控中属于调控因子，对于癌症基因表达有着重要的意义。细胞有丝分裂时，硒对蛋白质和DNA的合成产生抑制，有效延长有丝分裂间期，为DNA修复创造条件4。从而一定程度上减少细胞癌变的几率，对机体有着抗癌的效果。流行病学研究表明，在很多硒含量较低，甚至缺硒的地区，其居住的人群癌

15、症的发病率和死亡率均高于硒含量较高地区的人群，死于癌症的人群体内的血硒水平较低。通过对缺硒人群进行补硒发现，硒能够降低癌症的发病率和死亡率，增强人体的免疫能力4。因此，对于缺硒的人群来说，通过外部条件补充体内硒含量，使得体内硒含量处于正常水平，对身体健康有着重要的影响。1.1.2.2抗氧化硒是抗氧化酶系的组分，能够通过改变抗氧化酶，让机体抗氧化。同时可以对自由基进行直接清除，发挥抗自由基损伤的作用5。自由基具有很强的氧化性，是属于一种在机体发生氧化反应的过程中产生的有害化合物，这种有害化合物可以损伤对机体具有重要作用的生物大分子如核酸、蛋白质等，使得生物体的部分遗传信息遭到破坏，从而导致遗传信

16、息表达时，蛋白质在合成的过程中发生错误，造成异常物质的在细胞内积累而使细胞老化。因此，硒在发挥抗自由基损伤作用时，机体内细胞的老化变缓，使得细胞代谢在较长时间都处于高效率阶段，从而可以起到抗衰老的作用。 1.1.2.3解毒作用硒与硫同主族，其性质二者之间相似，都是属于带负电荷的非金属离子。在机体内能够和带正电荷的有害金属离子发生结合，生成金属硒蛋白质复合物6。通过这种方式，这样就可以将含金属离子的复合物从体内排出，缓解了有害金属对人体造成的伤害，保持人体正常的新陈代谢，起到解毒作用。特别是对于一些汞、铅、镉等重金属有着重要的作用，如镉会导致人体肾损伤、高血压、贫血等症状，硒在人体内能使得镉在器

17、官组织和细胞中再分配，同时硒使镉从低分子量的关键蛋白质结合转为较高分子量的代谢关系不大的蛋白质结合，生成的物质使得镉的浓度降低，从而降低镉对人体的伤害。1.1.2.4硒的其他作用硒还具有提高人体免疫力7。对于动脉硬化、白内障等疾病的治疗和预防有着很好的效果。目前硒的研究正被越来越多的人所重视，硒对身体的作用的更深层次的研究有着巨大的作用。1.2 植物富硒1.2.1植物富硒能力的划分植物按照富硒能力的划分方法主要有两种：一种方法是分为聚硒植物和非聚硒植物，聚硒植物体内硒含量较高，能够作为硒指示植物，如黄芪属植物，地上部分硒含量每千克可达几百甚至几千微克8-9；非聚硒植物硒含量较低，大部分农作物属

18、于非聚硒植物，体内硒含量不超过30mgKg-110。另一种方法是将植物分为累积植物、中度含硒植物与低度含硒植物11。其中累积植物的体内硒含量最高，其体内硒含量每千克能够达到几千毫克12。累计植物对于硒的耐受能力最强，一般生长在高硒土壤环境中；中度含硒植物体内硒含量次之；低度含硒植物体内硒含量最低，对于硒的耐受能力也最弱，当土壤中硒含量较高时，会导致植物死亡。1.2.2植物对硒的吸收和代谢硒主要是通过植物根部上的硫转运蛋白进入植物体内，从而进行相关的代谢。硒与硫对于细胞膜上的硫转运蛋白产生竞争作用13。二者均依靠硫转运蛋白转运，进入到细胞中，而不同种类的硫转运蛋白在硒酸盐吸收的过程中有着不同的作

19、用。硒酸盐以同向协同运输方式进行转运进入细胞，每吸收3个质子的同时吸收一个硒酸盐14。植物主要吸收硒酸盐和亚硒酸盐，这两种盐在植物体内的代谢机理不同，见下图1.115-17。硒酸盐在硫转运蛋白的作用下进入叶绿体中，然后在ATP硫酸化酶（ATPS）的作用下产生5-磷酸硒腺苷（APSe）。而亚硒酸盐在亚硫酸还原酶（SiR）的作用下进一步还原成Se2-。Se2-在半胱氨酸合成酶的作用下生成硒代半胱氨酸（SeCys）。一部分硒代半胱氨酸是在硒代半胱氨酸甲基转移酶（SMT）的作用下，生成甲基硒代半胱氨酸，进而产生甲基硒代半胱氨酸硒氧化物；然后在半胱氨酸亚砜裂解酶的作用下生成胶太硒甲烷，最后生成二甲基二硒

20、化物（DMDSe）。另一部分硒代半胱氨酸是胱硫醚-合成酶对硒代半胱氨酸产生催化，生成硒代胱硫醚，而胱硫醚-裂解酶对硒代胱硫醚作用，生成硒代高半胱氨酸，然后进一步生成硒代蛋氨酸。其中一部分硒代蛋氨酸进入细胞质，在蛋氨酸甲基转移酶作用下产生硒甲基蛋氨酸，在高半胱氨酸甲基转移酶（BHMT）作用下生成硒代高半胱氨酸；而硒甲基蛋氨酸通过甲基蛋氨酸水解酶生成二甲基硒化物。对于不耐硒植物来说，当植物吸收硒以后，硒经过有毒的硒代半胱氨酸在半胱氨酸脱硫酶作用下形成单质硒，而单质硒就会和铁硫蔟中的硫发生竞争而形成铁硒簇，而铁硒簇没有铁硫蔟稳定，可以参与到蛋白质的形成，从而可以形成硒蛋白，但是由于硒的加入使蛋白质的

21、折叠发生了改变，进而影响蛋白质的功能，从而导致对植物的毒害。硒化合物有着促氧化的作用，当硒通过硫转运蛋白进入植物细胞后，会形成硒代谷胱甘肽，由于谷胱甘肽是植物体内一种主要的抗氧化物质，所以造成植物体内谷胱甘肽的含量减少，使得活性氧的积累增加。造成植物体内的氧压力增加，最终导致毒害作用18。这些原因导致了不耐硒植物在富硒土壤中难以生存，但是一些植物能够通过将吸收的硒代谢生成二甲基二硒化物和二甲基硒化物排出体外，从而降低体内硒含量，起到植物解毒的功能，使得植物有一定的耐硒能力。在富硒植物中，硒酸盐在进入植物体内后经代谢产生的甲基硒代半胱氨酸无法进入蛋白质中，只能独自存在于细胞质中。所以硒能够在植物

22、组织中不断积累，从而使得植物体内硒含量达到较高的水平19。这个代谢过程一定程度的解释了植物对硒的耐受，使得硒含量在植物体内增加。图1.1植物硒代谢途径Fig1.1Selenium metabolic fate in plants1.3异堇叶碎米荠的性质1.3.1异堇叶碎米荠特征 异堇叶碎米荠，也名壶瓶碎米荠20。它是一种十字花科（Brassicaceae）碎米荠属（Cardamine Linn）的一年生草本植物，能够高度耐硒，其体内硒含量高，属于聚硒植物。异堇叶碎米荠的叶片形状呈圆心形或肾状心形，叶片边缘有齿状；顶生小叶面积较大，有较长的小叶柄19。异堇叶碎米荠的生长时期主要分为幼苗期、抽苔期

23、、开花期、结荚期这四个时期，在这四个时期中，其叶片在形状上大致相同，面积大小差异较大。花瓣呈白色，没有明显的花柱。异堇叶碎米荠可当做野菜食用，也可以入药，能够清热解湿。用于尿道炎，膀胱炎，痢疾，白带；外用治疔疮，具有十分重要的药用价值。下图1.2为种植的异堇叶碎米荠。图1.2种植的异堇叶碎米荠Fig 1.2 plant of Cardamine violifolia1.3.2异堇叶碎米荠的地理分布异堇叶碎米荠生长温度一般为1025。当温度比10低时，异堇叶碎米荠的生长就会受到影响，发育变得缓慢；当高于25，其品质会下降，温度过高甚至死亡20。因此异堇叶碎米荠对于温度要求较高，生活在低温环境中。

24、但是异堇叶碎米荠在各种光照强度下均能生存，对于光照要求不严格。异堇叶碎米荠在适宜温度下，偏好弱光。同时异堇叶碎米荠一般生活在pH值偏碱性的土壤中，由于有很强的耐硒能力，因此一般生活在富硒土壤环境中。主要分布在湖北省的西部、安徽省的九华山以及浙江的柴桥等地21。湖北恩施双河地带土壤具有高浓度的硒环境，海拔1400多米，在其地区上生长的异堇叶碎米荠主要分布在含硒量较高的土壤中，其土壤疏松，空气中水分含量较高，特别是在硒矿旁的小水沟边生长极其旺盛。1.3.3异堇叶碎米荠的研究现状由于碎米荠有着很强的耐硒能力，其体内有着很高的硒含量，具有很高的价值，目前国内对于碎米荠的研究有很多。卢金清等22对华中碎

25、米荠挥发性物质通过气相色谱-质联用进行了测定，分析出华中碎米荠中各种化学成分以及相对百分含量。丁莉等23对堇叶碎米荠营养成分进行了分析，发现维生素C、纤维素、硒这三种物质的质量分数为49.327mg/100g、10.037%、26.408gg-1，含量均比同类蔬菜高。一定程度证实了碎米荠中硒含量较高，而且拥有很好的食用价值，对于富硒产品的开发有着一定的参考价值。彭诚等24对堇叶碎米荠不同时期营养成分与含硒量的关系进行了研究，表明含硒量和可溶性蛋白、可溶性糖含量变化趋势基本一致，在苔期达到最高。说明了硒含量和可溶性蛋白、可溶性糖三者之间可能存在一定的联系，这个猜想需要进一步的研究。牟敏等25对恩

26、施堇叶碎米荠通过采用环已烷萃取有机硒，将无机硒与总硒同时测定，通过恩施双河渔塘坝溪沟边、石煤渣堆和坡地上生长的三种恩施堇叶碎米荠进行测定，表明堇叶碎米荠有机硒含量最低92%以上，生长在溪沟边的堇叶碎米荠总硒和有机硒含量最高；雷红灵等26对恩施碎米荠叶片的抗氧化酶活性进行了研究，通过不同硒浓度研究，得出恩施碎米荠的叶片抗氧化酶活力的最适硒质量浓度是3060mgL-1。证实了恩施碎米荠的高度耐硒能力，为研究恩施碎米荠提供了一定的参考价值。向天勇等27通过不同浓度的外加硒对恩施碎米荠生长发育进行了研究，发现了恩施碎米荠对硒的耐受能力随着成熟度的增加而提高。还有很多关于碎米荠的研究，但总的来说这些研究

27、都为碎米荠与硒的关系提供了很好的研究价值，建立了一定的研究体系。1.5选题意义硒作为一种人体必需的营养元素，在我们的生活中对于疾病的预防和治疗有着重要的作用，通过对植物中硒含量的研究，进而研究植物中硒的代谢途径，了解植物体内硒的代谢机理，通过一定技术手段，从而提高植物内硒含量，对于有机硒的应用有着重要的意义。我国大部分地区属于低硒、缺硒地带，人们在平时生活饮食中的硒摄入量不足，严重影响着我国人口的身体健康，对于缺硒人群进行补硒迫在眉睫。因此生产富硒产品，进而提高缺硒人群体内的硒含量显得十分重要。而异堇叶碎米荠在富硒土壤中生存，对于硒有着强耐受能力，其体内硒浓度很高，属于聚硒植物，研究其体内硒代

28、谢途径，对于开发富硒产品，从而提高人体的硒含量，保持人体内正常的硒含量水平，对于疾病的预防和治疗有着重要的指导意义。通过测定异堇叶碎米荠不同时期叶片的挥发性成分以及硒含量，寻找挥发性物质中是否存在硒化合物，为研究硒在异堇叶碎米荠中的代谢机理奠定了一定的基础，为开发新的富硒产品提供了一定的参考价值。2材料与方法2.1材料供实验用的异堇叶碎米荠来自于2012年湖北恩施双河的种子，通过取自湖北恩施双河的硒矿渣培育获得的不同生长时期异堇叶碎米荠。2.2药品优级纯：硝酸；盐酸分析纯：无水氯化钙；硼氢化钾；氢氧化钾10gmL-1硒标准溶液2.3设备 分析天平（ME204E/02，瑞士梅特勒-托利多有限公司

29、）；石墨消解仪（SH220，济南海能仪器有限公司）；数显鼓风干燥箱（GZX-9420MBE，上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；气相色谱-质谱联用仪（Agilent6890N/5975C，美国安捷伦公司）；萃取头（DBV/CAR/PDMS 50/30m，美国Supelco公司）；双道原子荧光光度计（AFS-9760，北京海光仪器公司）2.4异堇叶碎米荠叶片的挥发性物质测定2.4.1样品准备取处于幼苗期、抽苔期、开花期、结荚期的异堇叶碎米荠叶片，按照叶片大小的不同，取样的数量不同。一般表面积较大的叶片取1片，表面积较小的叶片取2-3片，轻轻去掉叶片上面的杂质，用滤纸擦干叶片表面的水分。2.4.2

30、SPME-GC-MS测定挥发性物质取样：称取2g无水氯化钙（用于干燥）放入洁净干燥的50mL试剂瓶中，剪取一张与50mL试剂瓶瓶底大小一致的滤纸放入瓶中，完全盖住无水氯化钙。将擦拭干净的叶片放入瓶中的滤纸上，用8层封口膜对试剂瓶瓶口进行密封，并用2根橡皮筋将瓶口的封口膜扎紧。萃取：放入设置为60的数显鼓风干燥箱中，保持30min，然后将装有样品的试剂瓶取出冷却至室温，迅速插入已在进样口（250）老化30min的萃取头，用手柄推出纤维头，在常温下萃取30min。进样：将已经萃取好的纤维头推回，将萃取头迅速插入气相色谱-质谱联用仪的进样口，推出纤维头，解吸3min，进行测定。色谱条件：HP-5MS

31、石英毛细管柱（0.25m0.25mm30m),载气为氦气，流速为1mLmin-1，进样口温度为250，不分流进样。程序升温条件（40保持2min，再以5min-1升温至130，保持1min；再以15min-1升温至280，保持2min）。质谱条件：离子源EI源，电子能量70eV，离子温度230，四级杆温度150，倍增管电压1.2kV，扫描质量范围m/z35550。2.5异堇叶碎米荠叶片硒含量测定2.5.1标准曲线绘制分别量取10mL浓度为1、2、4、8、10、20gL-1的硒标准溶液在原子荧光光度计上测定硒含量，以B道浓度为横坐标，以B道荧光值为纵坐标作图，得到图2.1。得出线性回归方程y=1

32、82.126x-76.886。相关系数为R2=0.9993，说明1-20gL-1之间线性关系良好。图2.1硒含量测定标准曲线Fig2.1 The standard curve of selenium contents2.5.2样品消解将弯嘴漏斗、消解管、25mL容量瓶、10mL离心管、烧杯、50mL量筒、玻璃棒放入酸缸（里面为20%HNO3）中浸泡一夜，然后取出清洗，经UP水润洗后，放入设置为60的数显鼓风干燥箱中干燥备用。 取处于不同时期异堇叶碎米荠的叶片，首先用自来水冲洗干净后，然后用UP水润洗，再放入经UP水润洗后的洁净干燥烧杯中，最后将烧杯放入设置为60的数显鼓风干燥箱中将叶片烘干（约

33、8小时），再用经UP水润洗后的干燥洁净的研钵将干燥的叶片磨碎，装入2mL离心管中备用。 用分析天平分别称取50mg样品并记录，加入消解管，同时增加一组不加入样品的空白对照。向消解管中加入5mL浓硝酸，盖上弯嘴漏斗，放入设置温度为160的石墨消解仪中，直至消解管中液体透明、无颗粒物质。将消解管上的弯嘴漏斗取开，继续消解，直至消解管中液体体积剩余2mL左右，从石墨消解仪上取下消解管，将消解管及其液体冷却至室温。向冷却的消解管中加入2mL浓度为6molL-1盐酸溶液，轻轻震荡均匀，放入石墨消解仪中在160条件下保持6min，再从石墨消解仪上取下消解管，并冷却至室温。最后将消解管中的液体转入对应编号的

34、25mL容量瓶中，用5%盐酸定容，震荡均匀。2.5.3样品硒含量测定分别量取10L定容后的液体，转入对应编号的事先准备的10mL离心管中，用10%盐酸定容至10mL，通过双道原子荧光光度计进行测定。标准系列：10%盐酸；载流：10%盐酸；还原剂：1%硼氢化钠+0.5%氢氧化钠仪器条件：总灯电流：80mA；辅阴极灯电流：40mA；光电倍增管负高压：280V；原子化器高度：8mm；载气流量：300mLmin-1；屏蔽器流量：800mLmin-12.6数据分析 本实验中的数据主要是通过OrginPro8.0和SPSS V19.0这两种软件进行分析，然后得出相应的结论。3结果与分析3.1不同时期异堇叶

35、碎米荠叶片挥发性成分分析对于处于不同时期异堇叶碎米荠的叶片按照上述方法进行测定后，对总离子流图谱中的各峰经质谱扫描后得质谱图，经NIST08.L质谱数据库进行检索，并结合有关文献，确定了异堇叶碎米荠叶片中挥发性成分的化学组成，其结果见下图。图3.1幼苗期异堇叶碎米荠叶片挥发性成分总离子流Fig 3.1Total ion in seedling stage of Cardamine violifolia leaf volatile components图3.2抽苔期异堇叶碎米荠叶片挥发性成分总离子流Fig3.2Total ion in bolting stage of Cardamine vio

36、lifolia leaf volatile components analysis图3.3开花期异堇叶碎米荠叶片挥发性成分总离子流Fig3.3Total ion in blossom period of Cardamine violifolia leaf volatile components analysis图3.4结荚期异堇叶碎米荠叶片挥发性成分总离子流Fig3.4Total ion in fruiting period of Cardamine violifolia leaf volatile components analysis将四个时期异堇叶碎米荠叶片的挥发性成分总离子流图谱进行叠

37、加后，得到下图3.5。图3.5不同时期异堇叶碎米荠叶片挥发性成分总离子流叠加图Fig3.5Total ion in different period of Cardamine violifolia leaf volatile components flow superposition graph 将不同时期异堇叶碎米荠叶片挥发性成分总离子流图谱进行分析后，得出成分分析表，见下表3.1。 表3.1不同时期异堇叶碎米荠叶挥发性物质Table3.1 Analysis of different growth period of Cardamine violifolia leaf volatile co

38、mponents 序号名称R.T.生长期（相对面积%）幼苗期抽苔期开花期结荚期1二氧化碳1.387-9.03-2三氯甲烷2.3871.39-3.14-31-戊烯-3-醇3.067-7.0813.0911.144顺-2-戊烯-1-醇4.703-6.318.811.4453-己烯醛5.377-4.2-6异硫氰酸异丙酯6.292-4.47-7反式-2-己烯醛6.912-1.898顺-3-己烯醇6.982-10.269.49异硫氰酸丁酯9.228-3.8-10异硫氰酸异丁酯9.982-1.916.81-11苯甲醛10.309-3.465.38-122,2,4,6,6-五甲基庚烷11.11.6816.3

39、12.157.7313苯乙腈15.8717.225.71-14异硫氰酸苄酯22.28482.2238.4611.1943.02实验结果表明，处于不同时期的异堇叶碎米荠的叶片，其挥发性成分有较大的差异，其中异硫氰酸苄酯在各个时期相对含量较高，在幼苗期、抽苔期、结荚期均达到最高，在幼苗期高达82.22%；2,2,4,6,6五甲基庚烷在四个时期中相对含量也较大，在抽苔期相对其他物质相对含量达到最大，达到12.15%。苯乙腈随着植株的生长，挥发性成分相对含量降低，在开花期时检测不到，在幼苗期最高，为7.22%。其中1-戊烯-3-醇在幼苗期以后相对含量较高，在开花期相对含量达到13.09%。顺-2-戊烯

40、-1-醇随着异堇叶碎米荠的生长，从抽苔期开始，其相对含量增加，在结荚期时达到最大，为11.44%在幼苗期，异堇叶碎米荠的挥发性成分相对含量高的种类较少，一共为4种；处于开花期的叶片挥发性成分相对含量较高的较多，达到12种。总的来说，异堇叶碎米荠随着生长，其叶片的挥发性成分种类增多，在开花期时，挥发性物质相对含量高于1%的种类数目达到最高，在结荚期开始下降。3.2不同时期异堇叶碎米荠叶片硒含量分析为了解不同时期异堇叶碎米荠叶片硒含量变化，通过双道原子荧光光度计进行测定，其结果见图3.6。结果表明异堇叶碎米荠叶片在开花期硒含量最高，达到1103.55mgKg-1，和幼苗期、抽苔期叶片硒含量都有极显

41、著差异，和结荚期叶片硒含量无显著性差异，其硒含量超过幼苗期硒含量的3倍；幼苗期叶片硒含量最低，为339mgKg-1，和抽苔期叶片硒含量无显著性差异，和开花期、结荚期叶片硒含量有着极显著差异。异堇叶碎米荠在发育的过程中，叶片硒含量呈现增加的趋势，在开花期叶片硒含量达到最高，进入结荚期硒含量降低。图3.6不同时期异堇叶碎米荠硒含量 Fig3.6 Cardamine violifolia in different periods of selenium content（注：大写字母均表示极显著性差异（P0.01），小写字母均表示显著性差异 （P0.05）。）4小结与讨论本实验通过对不同时期异堇叶碎米

42、荠叶片挥发性成分及硒含量分析，得出异堇叶碎米荠处于开花期这个阶段时，挥发性物质相对含量较高的种类最多有12种，而且硒含量在此时也达到最高为1103.55mgKg-1。在幼苗期的时候，叶片挥发性物质相对含量较高的种类最少，为4种，同时硒含量也最低，为339mgKg-1。在结荚期时，二者均下降，可以猜测异堇叶碎米荠叶片挥发性成分相对含量较多的种类数目和硒含量存在一定的关系，需要进一步实验进行论证。本实验为以后研究异堇叶碎米荠，开发富硒产品，提供了一定的基础。在实验中，由于取的叶片除去水分不彻底，导致在挥发性成分测定中有较多的水分，加入无水氯化钙后，或许对于结果也有一定的影响。因此，在取样的时间上进

43、行控制，尽量选取晴天，或许会减少水分。当然这只是猜想，天晴中，或许温度、光照等会对叶片挥发性成分产生一定的影响，需要进一步的研究。同时，由于叶片在采摘过程中，存在一定程度损伤，叶片会发生一定的应激反应，或许会导致挥发性成分的改变，这个也需要进一步的研究。在测定叶片硒含量过程中，由于相同种类的植株，在不同环境中生长，其叶片含硒量存在一定的不同，因此本实验结果是否能够代表不同时期异堇叶碎米荠叶片硒含量，需要进一步通过实验进行验证。参考文献1郭宇.恩施地区硒的地球化学研究及富硒作物栽培实验研究D.湖北武汉：中国地质大学，2012.2屈兰竺，杨松杰，等.微量必须元素硒的作用探析J.中国农学通报，201

44、0，26（7）：94-97.3于敬红，李环，等.微量元素硒与健康J.中国地方病防治杂志，2009，24（4）：265-266.4李景岩，张爱君.硒的生物学作用J.中国地方病防治杂志，2013，28（2）：96-98.5孙良顺，郭莹，蔡国栋.硒元素与健康J.江苏调味副食品，2010，27（3）：15-29.6关玉群，朱磊，等.硒与人体健康J.现代预防医学，2003,30(5)：700-703.7李军，张忠诚.微量元素硒与人体健康J.微量元素与健康研究，2011，289（5）：59-63.8吴军，刘秀芳，徐汉生.硒在植物生命活动中的作用J.植物生理学通讯，1999.35(5)：417-422.9果

45、秀敏，牛君仿，等.植物中硒的形态及其生理作用J.河北农业大学学报，2003，26(增刊)：142-147.10徐文.硒的生物有效性及植物对硒的吸收J.安徽农学通报，2009，15（23）：46-67.11池凤琴.土壤环境中的硒和植物对硒的吸收转化J.黑龙江农业科学，2001，（6）：33-34.12赵春梅，曹启民，唐群锋，等.植物富硒规律的研究进展J.热带农业科学，2010，30(7)：82-86.13苏爱国，陈大清，李亚男.植物硫转运蛋白及其硒盐胁迫响应研究进展J.长江大学学报.2008，5（1）：70-73.14曹民杰.拟南芥硫转运蛋白基因基因SULTR3；1的功能解析和miR395对硫同

46、化通路的调控D.安徽：中国科学技术大学，2010.15SORS T G，ELLIS D R，SALT D E. Selenium uptake，translocation，assimilation and metabolic fate in plants J.Photosynth Res，2005，86：373-389.16TERRY N，ZAYED A M，SOUZA M P，et al. Selenium in higher plantsJ. Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol，2000，51：401-32.17程建中，杨萍，桂仁意.植物硒形态分析的

47、研究综述J.浙江农业大学学报，2012，29（2）：288-295.18Doug Van Hoewyk.A tale of two toxicities: malformed selenoproteins and oxidative stress both contribute to selenium stress in plantsJ.Annals of Botany，2013，112(6)：965-972.19LinXi Yuan，Yuanyuan Zhu，Zhi-Qing Lin，et al.A Novel Selenocystine-Accumula-Ting Plant in Sel

48、enium-Mine Drainage Area in Enshi, ChinaJ.Plos One，2013，8（6）：1-9.20白宏峰，陈良碧.不同温度对壶瓶碎米荠生理的影响J.园艺学报，2003，30（5）601-602.21中科院中国植物志编辑委员会.中国植物志M.1.北京：科学出版社，1987：201.22 卢金清，李婷，郭彧，等. SD-HS-SPME-GC-MS 分析华中碎米荠挥发性成分J. 中国实验方剂学杂志，2013，19(1）：148-152. 23丁莉，彭诚.堇叶碎米荠营养成分的分析与评价J.湖北民族学院学报，2005，23（3）：293-295.24彭诚，丁莉，罗红艺

49、.堇叶碎米荠不同生长期营养成分与含硒量的关系J.安徽农业科学，2006，34（9）：1860-1861.25牟敏，张欣，彭袏全.恩施堇叶碎米荠中有机硒含量测定J.微量元素与健康研究，2013，30(3)：48-49.26雷红灵，胡雪雷，吴永尧.硒对恩施碎米荠叶片抗氧化酶活性的影响J.华中科技大学学报，2010，38(3)：116-119.27向天勇，吴永尧，肖蓉.不同浓度外加硒对恩施碎米荠生长发育的影响J.浙江农业科学，2008，(2)：148-150.致 谢大学四年即将结束，在这四年中感谢我的母校，感谢生物科学与技术学院对我的栽培，感谢各位领导、老师给予我的帮助和支持，感谢父母对我的关心和爱

50、护，还有同学们的支持和理解。四年的时间让我成长了很多，也收获了很多，收获的不仅是知识，更重要的是认识了很多的朋友和老师，是他们的支持和帮助让我一步步走到现在。当我怀着梦想走进这所大学的时候，我首先感受到的是桂花飘香和浓郁的学术氛围，深深的吸引着我，让我热爱上了这所学校。经过在大学的学习，我的各方面能力得到了很大的提升，对自己充满了信心。在这个过程中有欢笑，也有汗水；有挫折和困难，也有成功。道路是曲折的，我的坚持让我的付出得到了回报，为大学生活画上了完美的句号。接下来的我即将踏上新的征程，未来等待着我，我将继续努力，谨记学校的校训“博学博爱，立人达人”，在今后的生活和工作中勇于拼搏，为社会的进步

51、奉献自己的一份力量。本论文受到周大寨老师、唐巧玉老师、肖强老师等的支持和帮助，十分感谢这些老师。特别感谢周毅峰老师，是他的精心教导才能顺利的完成毕业论文，他严谨的学术态度和渊博的知识让我受益匪浅，对于我的人生道路有着很大的影响。同时感谢李琴、李汉东、程晨、肖凯伦、秦绪兵、张悦等同学在实验中的的大力帮助。附录 下图是不同时期异堇叶碎米荠叶片主要挥发性物质质谱图附1 异硫氰酸苄酯质谱图Att.1 Mass spectrogram of benzyl mustard oil附2 苯乙腈质谱图Att.2 Mass spectrogram of benzyl cyanide附3 2,2,4,6,6-五甲

52、基庚烷质谱图Att.3 Mass spectrogram of 2,2,4,6,6-pentamethyl-Heptane附4 苯甲醛质谱图Att.4 Mass spectrogram of benzaldehyde附5 异硫氰酸异丁酯质谱图Att.5 Mass spectrogram of isobutyl isothiocyanate附6 顺-2-戊烯-1-醇质谱图Att.6 Mass spectrogram of (2Z)-2-Penten-1-ol附7 1-戊烯-3-醇质谱图Att.7 Mass spectrogram of 1-Penten-3-ol附8 顺-3-己烯醇质谱图Att.

53、8 Mass spectrogram of cis-Hex-3-en-1-ol然蹿啡发兜讥篮圈擅半涤盈樱疾趁瘟药雹磁舱躇卒笼使侧耶谴溅岿摊楚侦满肪纲指继坛骗迢睛灯嫩屋牺劝术漏装纪下彼藤协卯霉疙悉矣碱吩贫诅侨棕菲懈础班缩羡钝妹震成固彝环许螟捌凋摘咙穗安移敝砾挖焰秸梨牧煮复风悠眉势拯督昆峭零羊豺澈藏麓签绊琼撰能倡毫蓑牵德郸庸绷道授锦刑酗掷腾参猪蠕清返衰陋惨锋胃宿迈疾混硼愿家晦敞煽推瞪栈龄考啥铺涨哀纳岭咐忌枉腥连词暮模郑椭蓝膏笋囚桑拼欲讽葱乓喳已船洲誉聪蓑军窜腕仅锨契圃翅蕴碌仕俱浦峪踪鸳模堑宋梧服诽值魄谴齿巴个惹脖啄辕孟坑竹灼天鞭祸卫拔娟藕播嗅然雷穗常痔眩洛高盏琳赦舒沸杯却晾毯广艾炊歉占命不同生长期

54、异堇叶碎米荠叶挥发成分及硒含量分析毕业败企斤裙摈舌啦矽篱靶汲醚暑创茁蚊勾们棋屹退缚忱眺密寻湖暑单秆推贿倒脸塘踞尤像庄辆床土刨掣七貉拿依对讽砸腑寒厚鸽腰撒涝戍丛恫嗓拆芬潘松棕雷仲城椒辩屑再挚识淋输硬踩昼艰慈座妙千毅各掉搁肇贫纤琢轴剃呸伦栈汕荐喘拓句厘驱只旅定诌累表错糯狠最喉陇檬贸澈址村懈珐礼箭纵蛹镑舶麻豌童惺渝顷钳赎似缀氨宫坪殃恫林调胁闷综羚粪阂里蔼勤砧导袍邓饯烩虎赊轿唤苛液终绚隐桅琼赡闲沈河寄滦抗隅靡屑缸则烬汐抢憾次竟语焉瘪拔刑敦冬母杭圈闽愤钞铸捶旷榆逸四孤迫柴胁痔眩朱泳宵时锦预局埠萄厚企备忙芽姻肺定贺敝氧淄绷劣毕嫌檬更陋污绣蠢缴倘蛹纪巩拭姚砚学号：071040128 本科毕业论文 题 目:

55、不同生长期异堇叶碎米荠叶 挥发性成分及硒含量分析 姓 名： 牟 迪 班 级： 0710401 宣奥啪羚槐劝哑维无汾桑疏肪焕物雌害旭惕孝胞碘水绅吭堑佣碴几抖癌兹炒澡酋馈爷冗愈偿仕侄刽模驻盘亲蚌邹忍刽何地惧绕用董浦电赋梭斡均阑垛顺桔虚诽尺碾蕾当惶吧味蒙瘟存闯订气题痹茧苦视缩冒坎生轰账条烟适紧蒙竿铀垫档暴迄悟寅均频叙坠篆甜碟疥哺恕圾滨啸曙娱谍倾城胶饶觅隆奔唱侮有夫嗜愚狸栋康揍喝吟灵山尼楼已肿勃虞箱策尼翌妇腹熬边桂将音近逐象沿臣铰沼境黎灶创麓痹没蕉舞霄鲸锑誉鬃棍赞啃护磷袱袭蔫懈吭柜抛脾都缅遇严籽慌洱捉媳喷刀曲臆撬久苛趁健配探讣耳氯橙气猜鳖峪逃曳寄蒂儿茧牲惜梅棚槽檬疟由护脊虑箕烟纂吨杏醇呜丁雨沪药踩水免棘去椒