微生物知识培训

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1、微生物知识培训微生物知识培训目录什么是微生物1实验室工作菌种及鉴别2工作菌种的传代培养3实验室清洁消毒方法4 指一群个体微小，直径通常小于指一群个体微小，直径通常小于0.1mm0.1mm的，的，构造简单（单细胞，简单的多细胞，有的不具构造简单（单细胞，简单的多细胞，有的不具细胞结构）的微小生物体。细胞结构）的微小生物体。什么是什么是 微生微生物？物？认识微生物认识微生物微生物分类微生物分类革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌大肠杆菌（大肠杆菌（G-）大肠杆菌大肠杆菌放线菌放线菌棒状杆菌棒状杆菌黑曲霉黑曲霉黑曲霉黑曲霉弧状菌弧状菌分裂的大肠杆菌分裂的大肠杆菌形态染色：形态染色：单

2、个菌体呈球形，呈葡萄串状排列，直单个菌体呈球形，呈葡萄串状排列，直径平均径平均0.8 0.8 mm，G+G+菌，无鞭毛，无芽孢；菌，无鞭毛，无芽孢；培养特性：培养特性：培养特性营养要求不高，普通培养基培养特性营养要求不高，普通培养基即可生长，中等大小即可生长，中等大小S S型菌落，并因种不同型菌落，并因种不同出现金黄色、白色、柠檬色脂溶性色素，金出现金黄色、白色、柠檬色脂溶性色素，金萄菌溶血毒素在血平板上形成萄菌溶血毒素在血平板上形成溶血。溶血。金黄色葡萄球菌（金黄色葡萄球菌（G+）生物学性状）生物学性状菌体细长且长短不一，有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。菌体的一端有单鞭毛，在暗视野显微

3、镜或相差显微镜下观察可见细菌运动活泼。具有乙酰胺酶的细菌能利用乙酰胺作为碳源，并分解乙酰胺产碱，酚红为pH指示剂。（酚红pH指示范围6.68.0之间显示橙色，pH低于6.6呈现黄色，pH高于8.4呈现红色）铜绿假单胞菌（铜绿假单胞菌（G-）生物学性状）生物学性状菌落特征菌落特征:l 典型菌落：典型菌落：扁平湿润，边缘不规则，菌落和培养基扁平湿润，边缘不规则，菌落和培养基灰绿色，表面有金属光泽。灰绿色，表面有金属光泽。l 大肠型菌落：大肠型菌落：菌落圆形凸起，似大肠杆菌菌落圆形凸起，似大肠杆菌l 黏液型菌落：黏液型菌落：菌落凸起，呈粘液状菌落凸起，呈粘液状l 侏儒型菌落：侏儒型菌落：细小，无光泽

4、细小，无光泽l 粗糙型菌落：粗糙型菌落：菌落中央凸起、边缘扁平、表面粗糙菌落中央凸起、边缘扁平、表面粗糙大肠杆菌呈 黑色中心,有或无金属光泽。当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。大肠杆菌生物学性状大肠杆菌生物学性状大肠杆菌是革兰氏阴性菌，染色后为红色，细菌形态为短小的杆状，单个存在。芽孢杆菌（芽孢杆菌（G+G+）生物学性状）生物学性状1 1、芽孢、芽孢 某些菌生长到一定阶某些菌生长到一定阶段，细胞内形成一个圆形段，细胞内形成一个圆形、椭圆形或卵圆形的内生、椭圆形或卵圆形的内生孢子，是对不良环境有较孢子，是对不良环境有较强抵抗力的休眠体

5、。芽孢强抵抗力的休眠体。芽孢形成的位置可分为近中央形成的位置可分为近中央，末端，中央。，末端，中央。具有很强的抗热、抗干燥、抗辐射、抗化学药物能具有很强的抗热、抗干燥、抗辐射、抗化学药物能力。含水量低、壁厚而致密，通透性差力。含水量低、壁厚而致密，通透性差,不易着色。新不易着色。新陈代谢几乎停止，处于休眠状态。一个芽孢萌发产生陈代谢几乎停止，处于休眠状态。一个芽孢萌发产生一个个体。一个个体。芽孢的抗热机制，目前尚不清楚，但可能与含水量芽孢的抗热机制，目前尚不清楚，但可能与含水量低、壁厚而致密、芽孢中的酶分子量小有关，比较耐低、壁厚而致密、芽孢中的酶分子量小有关，比较耐热。热。芽孢的特性芽孢的特

6、性:黑曲霉生物学性状黑曲霉生物学性状菌丛呈黑褐色，顶囊大球形，小梗双层，分生孢子为球形，呈黑、黑褐色，平滑或粗糙。对紫外线以及臭氧的耐性强。菌丝发达，多分枝，有多核的多细胞真菌。黑曲霉的菌丝、孢子经常呈现各种颜色，如:黑、棕、绿、黄、橙、褐等，菌种不同，颜色也不同。白色念珠菌（白色念珠菌（G+G+）生物学性状）生物学性状本菌细胞呈卵圆形，很象酵母菌，比葡萄球菌大56倍，革兰氏染色阳性，但着色不均匀。在病灶材料中常见菌细胞出芽生成假菌丝，假菌丝长短不一，并不分枝，假菌丝收缩断裂又成为芽生的菌细。念珠菌对热的抵抗力不强，加热至601小时后即可死亡。但对干燥、日光、紫外线及化学制剂等抵抗力较强。微生

7、物检测基本操作流程微生物检测基本操作流程化验室的清洁化验室的清洁(1)在化验室操作时，必须穿工作服和佩戴口罩及橡在化验室操作时，必须穿工作服和佩戴口罩及橡胶手套，无菌操作意识应严格要求，操作应在固定胶手套，无菌操作意识应严格要求，操作应在固定场所场所进行。进行。(2)所有的培养物，被污染的玻璃器皿及阳性的检验所有的培养物，被污染的玻璃器皿及阳性的检验标本，应放入消毒水中浸泡消毒，再用高压蒸气灭标本，应放入消毒水中浸泡消毒，再用高压蒸气灭菌或用水煮沸后再清洗。菌或用水煮沸后再清洗。(3)工作完毕，双手应用肥皂和水洗净。工作完毕，双手应用肥皂和水洗净。微生物检测基本操作流程微生物检测基本操作流程无

8、菌室的要求无菌室的要求(1)无菌室应分为无菌操作间和缓冲间，缓冲间要比无菌操作间大一无菌室应分为无菌操作间和缓冲间，缓冲间要比无菌操作间大一些。些。(2)无菌室的高度应在无菌室的高度应在2.22.5 米为好。米为好。(3)缓冲间、无菌操作间的门，不能互相对着，应错开，而且是侧拉缓冲间、无菌操作间的门，不能互相对着，应错开，而且是侧拉门。门。(4)缓冲间、无菌间以及操作台内各安装缓冲间、无菌间以及操作台内各安装30 瓦的紫外灯一支，每瓦的紫外灯一支，每1015平方米安装平方米安装30 瓦的紫外灯管瓦的紫外灯管1 支为宜。紫外灯安装在离操作台面支为宜。紫外灯安装在离操作台面1.01.5米高度处为宜

9、。米高度处为宜。(5)无菌室的室温应控制在无菌室的室温应控制在1825oC，相对湿度为，相对湿度为4060%为宜。为宜。微生物检测基本操作流程微生物检测基本操作流程操作前准备操作前准备(1)无菌室应定期用紫外灯进行杀菌，室内每天用紫外灯灭菌无菌室应定期用紫外灯进行杀菌，室内每天用紫外灯灭菌20-30分钟，地面应保持清洁，无卫生死角。分钟，地面应保持清洁，无卫生死角。(2)无菌操作必须在超级净化工作台里进行，在使用超级净化无菌操作必须在超级净化工作台里进行，在使用超级净化工作台前先开紫外灯照射工作台前先开紫外灯照射30 分钟，然后关掉紫外灯，待分钟，然后关掉紫外灯，待30 分钟后开照明灯及无菌风

10、。分钟后开照明灯及无菌风。(3)经常对无菌室进行无菌程度的检查。经常对无菌室进行无菌程度的检查。微生物检测基本操作流程微生物检测基本操作流程操作前准备操作前准备(4)操作前先将待检样品用操作前先将待检样品用75%的酒精消毒后放入无菌操作台。的酒精消毒后放入无菌操作台。(5)进入无菌室前，应先做好个人卫生工作，换上连体无菌服进入无菌室前，应先做好个人卫生工作，换上连体无菌服并佩戴口罩和乳胶无菌并佩戴口罩和乳胶无菌手套手套。连体无菌服连体无菌服、口罩只准在无菌、口罩只准在无菌室内专用，不准穿着到其它地方去，并定期进行洗换，每天室内专用，不准穿着到其它地方去，并定期进行洗换，每天进行消毒灭菌。进行消

11、毒灭菌。(6)无菌操作前，双手及在操作台内手臂部分用无菌操作前，双手及在操作台内手臂部分用75%的酒精擦的酒精擦拭消毒。拭消毒。微生物检测基本操作流程微生物检测基本操作流程微生物检测器皿包扎微生物检测器皿包扎1、所用器具、所用器具 棉花棉花、棉塞、棉塞、牛皮纸或报纸、棉绳、牛皮纸或报纸、棉绳3、操作方法、操作方法(1)试管：塞上棉塞，然后用牛皮纸或报纸把试管头包扎起试管：塞上棉塞，然后用牛皮纸或报纸把试管头包扎起来。做乳糖胆盐培养基时，将试管头塞上专用塑料塞放入铁来。做乳糖胆盐培养基时，将试管头塞上专用塑料塞放入铁丝框。丝框。(2)吸移液管：将吸移液管一头塞上棉塞，然后单支或几只用吸移液管：将

12、吸移液管一头塞上棉塞，然后单支或几只用专用布袋包好，再用两层牛皮纸包好专用布袋包好，再用两层牛皮纸包好，或用盒装。，或用盒装。微生物检测基本操作流程微生物检测基本操作流程膜过滤法膜过滤法1、目的、目的 用平皿培养法测定含菌数在用平皿培养法测定含菌数在1 个个/毫升以下的液体试样。毫升以下的液体试样。2、适用范围、适用范围 适用于水适用于水样及稀释至水中的样品样及稀释至水中的样品。试样中不能含有堵塞膜。试样中不能含有堵塞膜孔的微小粒子。孔的微小粒子。3、原理、原理 液体试样在无菌状态下使用过滤膜过滤。过滤膜的孔径非液体试样在无菌状态下使用过滤膜过滤。过滤膜的孔径非常小，试样中的微生物被捕捉在过滤

13、膜的表面上，过滤操作常小，试样中的微生物被捕捉在过滤膜的表面上，过滤操作结束后将过滤膜放在含有适宜培养基的平皿中培养结束后将过滤膜放在含有适宜培养基的平皿中培养。微生物检测基本操作流程微生物检测基本操作流程膜过滤法膜过滤法4、器具和装置、器具和装置(1)带漏斗的过滤膜支架带漏斗的过滤膜支架(2)抽滤装置抽滤装置 六联抽滤装置。六联抽滤装置。(3)过滤膜过滤膜 0.45 m 带格滤膜。带格滤膜。微生物检测基本操作流程微生物检测基本操作流程膜过滤法膜过滤法5、操作方法、操作方法(1)一次性过滤膜片（带格面朝上），放入过滤筒组件里一次性过滤膜片（带格面朝上），放入过滤筒组件里。抽抽滤装置使用前经高压

14、蒸汽方法灭菌。滤装置使用前经高压蒸汽方法灭菌。(2)取下样品容器的塞子，将容器出口用取下样品容器的塞子，将容器出口用75%酒精灭菌，把样酒精灭菌，把样品倒入滤杯中。品倒入滤杯中。(3)开启抽滤设备开启抽滤设备，让样品从过滤器中完全滤出，再用无菌水，让样品从过滤器中完全滤出，再用无菌水冲洗漏斗内壁并滤干。冲洗漏斗内壁并滤干。(4)用灭菌镊子，将滤膜从过滤器中取出，放在培养基平皿上。用灭菌镊子，将滤膜从过滤器中取出，放在培养基平皿上。微生物检测基本操作流程微生物检测基本操作流程灭菌灭菌1、干热灭菌、干热灭菌 (1)目的目的 保持在干燥状态下的玻璃器皿和金属的灭菌。保持在干燥状态下的玻璃器皿和金属的

15、灭菌。(2)适用范围适用范围 干燥的玻璃器皿（吸管、平皿等）干燥的玻璃器皿（吸管、平皿等）、金属器具（镊子、金属器具（镊子等）、粉状物品、瓷器等）、粉状物品、瓷器 (3)原理原理 在在180 干热空气中灭菌干热空气中灭菌2 小时。小时。微生物检测基本操作流程微生物检测基本操作流程灭菌灭菌 (4)仪器和设备仪器和设备 电热干燥箱电热干燥箱 (5)操作方法操作方法 a、器具用牛皮纸或灭菌袋包（装）扎，放入金属容器内。器具用牛皮纸或灭菌袋包（装）扎，放入金属容器内。b、器具在干燥箱加热前放入，每个器具之间留有足够的、器具在干燥箱加热前放入，每个器具之间留有足够的空隙，使热空气能畅通。空隙，使热空气能

16、畅通。c、关闭箱门接通电源，打开通气孔，使箱内湿空气能逸、关闭箱门接通电源，打开通气孔，使箱内湿空气能逸出，至箱内温度达到出，至箱内温度达到100 时关闭。时关闭。微生物检测基本操作流程微生物检测基本操作流程灭菌灭菌 d、加热至、加热至180，保持，保持2 小时。小时。c、切断电源，冷却至、切断电源，冷却至60 时，打开箱门，取出灭菌器时，打开箱门，取出灭菌器具，并打开箱顶通气口。具，并打开箱顶通气口。(6)注意事项注意事项 a、灭菌时必须注意温度不能超过灭菌时必须注意温度不能超过180，以免使棉花、，以免使棉花、报纸烘焦。报纸烘焦。b、灭菌时不得打开箱门。、灭菌时不得打开箱门。c、干燥箱未冷

17、却时，不要取出里面器具，防止内外温差、干燥箱未冷却时，不要取出里面器具，防止内外温差过大造成玻璃器具爆炸。过大造成玻璃器具爆炸。微生物检测基本操作流程微生物检测基本操作流程灭菌灭菌 2、高压蒸汽灭菌、高压蒸汽灭菌 (1)目的目的 实验室内耐湿热器具的灭菌方法。实验室内耐湿热器具的灭菌方法。(2)适用范围适用范围 易分解的、耐热性的培养基，膜过滤使用的器具，橡胶，易分解的、耐热性的培养基，膜过滤使用的器具，橡胶，耐热性塑料。耐热性塑料。(3)原理原理 利用利用1.5kgf/cm2，121 的饱和蒸汽，灭菌的饱和蒸汽，灭菌20 分钟。分钟。微生物检测基本操作流程微生物检测基本操作流程灭菌灭菌 2、

18、高压蒸汽灭菌、高压蒸汽灭菌 (5)操作方法操作方法 a.装入培养基的（箱）瓶用螺旋盖盖上，容器用棉塞塞住，装入培养基的（箱）瓶用螺旋盖盖上，容器用棉塞塞住，再用牛皮纸包扎。螺旋盖应微松。再用牛皮纸包扎。螺旋盖应微松。b.在瓶中的培养液不要超过在瓶中的培养液不要超过1L，否则灭菌不彻底。，否则灭菌不彻底。c.容器的上部应留有足够的空间，以便产生气泡。容器的上部应留有足够的空间，以便产生气泡。d.器具用牛皮纸包裹，放入灭菌袋中。器具用牛皮纸包裹，放入灭菌袋中。e.器具的组合和包裹应允许灭菌蒸汽接触所用物品。器具的组合和包裹应允许灭菌蒸汽接触所用物品。微生物检测基本操作流程微生物检测基本操作流程灭菌

19、灭菌 2、高压蒸汽灭菌、高压蒸汽灭菌 f.各类器具装入釜内时，相互间要留有空隙以使蒸汽自由各类器具装入釜内时，相互间要留有空隙以使蒸汽自由流动。（尤其是第一锅灭菌时）流动。（尤其是第一锅灭菌时）g.在灭菌器内加入适量的水（不得低于釜底指示横片，露在灭菌器内加入适量的水（不得低于釜底指示横片，露出加热盘管），放入需灭菌物品，盖上顶盖，拧紧螺栓。拧出加热盘管），放入需灭菌物品，盖上顶盖，拧紧螺栓。拧紧时要注意是否会造成紧时要注意是否会造成漏气。漏气。h.选择预定程序，并双击开始键选择预定程序，并双击开始键。i.加热时间不要过长，但也不要低于指定的加热时间不要过长，但也不要低于指定的20 分钟。分钟

20、。微生物检测基本操作流程微生物检测基本操作流程灭菌灭菌 2、高压蒸汽灭菌、高压蒸汽灭菌 j.打开高压杀菌锅。注意必须使灭菌釜内无压力为宜。打开高压杀菌锅。注意必须使灭菌釜内无压力为宜。k.灭菌后的物品冷却至室温，取出。灭菌后的物品冷却至室温，取出。l.打开出水阀门，放尽釜内剩水。打开出水阀门，放尽釜内剩水。(5)注意事项注意事项 高压灭菌器上的安全阀，是保障安全使用的重要机构，不高压灭菌器上的安全阀，是保障安全使用的重要机构，不得随意调节。灭菌过程中也不要随意移动灭菌锅。得随意调节。灭菌过程中也不要随意移动灭菌锅。阳性菌的传代阳性菌的传代首先，洁净环境要达标。洁净间与超净台在使用首先，洁净环境

21、要达标。洁净间与超净台在使用之前都要经过至少半小时紫外灯照射灭菌。之前都要经过至少半小时紫外灯照射灭菌。其次，传代所用培养基要按使用说明进行灭菌处其次，传代所用培养基要按使用说明进行灭菌处理。理。最后，接种时要将手彻底消毒，或者戴灭菌手套最后，接种时要将手彻底消毒，或者戴灭菌手套操作，接种过程要在酒精灯旁操作。使用接种环、操作，接种过程要在酒精灯旁操作。使用接种环、接种针前及使用过程中要将环或者针用酒精灯烧接种针前及使用过程中要将环或者针用酒精灯烧至发红，彻底灭菌。传代完成后要密封好再传出至发红，彻底灭菌。传代完成后要密封好再传出培养。培养。1.冻干管的开启：对于安培管封，用浸过75%酒精的脱

22、脂棉擦净安培管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水加热顶端使之破裂，用挫刀或镊子敲下已破裂的安培管顶端。对于有瓶塞的将金属盖子打开并取走橡胶塞即可。2.用1.0mL的移液器取大约0.5mL的建议无菌肉汤（约56mL）来水化冻干的菌粉。3.无菌的将菌悬液转移到肉汤试管中，混匀。4.用几滴菌悬液接种到合适的琼脂斜面或平板上。将斜面或平板放于合适的温度条件下进行培养。这就是第一代菌种。工作菌株从储备菌株传代培养次数不得超过5次实验室消毒灭菌实验室消毒灭菌消毒：消毒：是指应用物理或化学方法杀死物体表面和内部的是指应用物理或化学方法杀死物体表面和内部的病原微生物，而对非病原微生物病原微生物，而对非病原微生物

23、 及其芽孢、孢子并不严及其芽孢、孢子并不严格要求全部杀死。格要求全部杀死。用于消毒的化学物质，称为消毒剂。用于消毒的化学物质，称为消毒剂。灭菌：灭菌：是指杀死一切病原菌和非病原菌及其芽孢和孢子，是指杀死一切病原菌和非病原菌及其芽孢和孢子，使物体上无任何存活的微生物。使物体上无任何存活的微生物。实验室清洁消毒方法实验室清洁消毒方法1.高压蒸气法：应用最普遍，效果亦很可靠。高压蒸气灭菌法用于能耐高温的物品，如金属器械、玻璃、搪瓷、敷料、橡胶制品等；2.煮沸法：适用于金属器械、玻璃制品及橡胶类等物品；3.火烧法：适用于金属器械；4.药液浸泡法：适用于锐利器械、内镜和腹腔镜等不适于热力灭菌的器械；5.

24、甲醛蒸气熏蒸法：适用于金属器械、玻璃、搪瓷及各种导管。实验室清洁消毒方法实验室清洁消毒方法6.臭氧消毒法：臭氧技术是既古老又崭新的技术，源至1840年德国，后被用于水处理消毒行业。目前，臭氧已广泛用于水处理、空气净化、食品 加工、医疗、医药、水产养殖等领域。臭氧可使用臭氧发生器制取，其生成原理臭氧可通过高压放电、电晕放电、电化学、光化学、原子辐射等方法得到，原理是利用高压电力或化学反应，使空气中的部分氧气分解后聚合为臭氧，是氧的同素异形转变的一种过程。臭氧的分子式为O3。灭菌原理 臭氧是一种强氧化剂，灭菌过程属生物化学氧化反应。O3灭菌有以下3种形式：1.臭氧能氧化分解细菌内部葡萄糖所需的酶，

25、使细菌灭活死亡。2.直接与细菌、病毒作用，破坏它们的细胞器和DNA、RNA，使细菌的新陈代谢受到破坏，导致细菌死亡。3.透过细胞膜组织，侵入细胞内，作用于外膜的脂蛋白和内部的脂多糖，使细菌发生通透性畸变而溶解死亡。实验室清洁消毒方法实验室清洁消毒方法6.臭氧消毒法：臭氧空气消毒注意事项 1、臭氧对人体呼吸道粘膜有刺激，空气中臭氧浓度达0.15ppm时，即可嗅出；按照国际标准，达0.5-1ppm时可引起口干等不适；达1-4ppm时可引起咳嗽；达4-10ppm时可引起强烈咳嗽。故消毒用臭氧消毒空气，必须是在人不在的条件下，消毒后至少过30分钟才能进入。2、臭氧为强氧化剂，对多种物品有损坏，浓度越高

26、对物品损坏越重，可使铜片出现绿色锈斑、橡胶老化，变色，弹性减低，以致变脆、断裂，使织物漂白褪色等。臭氧的消解 据研究表明，由于臭氧的结构特点和光谱吸收特性，本身就极易分解，而光照会加速其分解，在高温和潮湿的环境中分解速度更快。由空气为源制备的臭氧在室温环境下，分解约需15-20min。微生物使用的自我保护微生物使用的自我保护1、工作菌种在开放环境中严禁直接暴露。、工作菌种在开放环境中严禁直接暴露。2、使用工作菌种时，佩戴手套、口罩、洁净服等。、使用工作菌种时，佩戴手套、口罩、洁净服等。3、及时做好传代、使用后的清场消毒工作。、及时做好传代、使用后的清场消毒工作。4、如果发生菌液溢出，含菌种的培

27、养管破碎等，造成中、如果发生菌液溢出，含菌种的培养管破碎等，造成中、小面积污染，可用比污染面积大小面积污染，可用比污染面积大25%以上的纱布覆盖污染区以上的纱布覆盖污染区域，边缘用脱脂棉围住，向纱布倾倒域，边缘用脱脂棉围住，向纱布倾倒5%苯酚溶液或苯酚溶液或75%的的酒精，浸泡酒精，浸泡2小时以上（其间适量加溶液防止干燥），再经小时以上（其间适量加溶液防止干燥），再经紫外灯近距离（紫外灯近距离（1米内）照射米内）照射2小时以上；被污染的器械、容小时以上；被污染的器械、容器等立即浸泡于器等立即浸泡于75%酒精中酒精中2小时以上，再次着防护衣进入小时以上，再次着防护衣进入房间，将污染溢出物和用于清

28、洁的纱布放入可耐受高压的双房间，将污染溢出物和用于清洁的纱布放入可耐受高压的双层塑料袋内并尽快高压蒸汽灭菌。层塑料袋内并尽快高压蒸汽灭菌。微生物使用的自我保护微生物使用的自我保护5、金黄色葡萄球菌感染、金黄色葡萄球菌感染 金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。甚至败血症、脓毒症等全身感染。6、大肠杆菌感染、大肠杆菌感染 会发生严重的痉挛性腹痛和反复发作的出血性腹泻，同时会发生严重的痉挛性腹痛和反复发作

29、的出血性腹泻，同时伴有发热、呕吐等表现。严重者会导致多种并发症而导致死伴有发热、呕吐等表现。严重者会导致多种并发症而导致死亡。亡。7、铜绿假单胞菌、铜绿假单胞菌 引起褥疮、脓肿、化脓性中耳炎等。本菌引起的感染病灶引起褥疮、脓肿、化脓性中耳炎等。本菌引起的感染病灶可导致血行散播，而发生菌血症和败血症。可导致血行散播，而发生菌血症和败血症。微生物常用染色方法微生物常用染色方法1、简单染色法、简单染色法 涂片：取干净载玻片一块，滴一滴蒸馏水，取金黄色葡涂片：取干净载玻片一块，滴一滴蒸馏水，取金黄色葡萄球菌或苏云金杆菌制成菌悬液，再取萄球菌或苏云金杆菌制成菌悬液，再取1环至另一干净载玻环至另一干净载玻片上涂抹均匀。片上涂抹均匀。干燥：自然干燥干燥：自然干燥 固定：火焰固定（火焰上通过三次）固定：火焰固定（火焰上通过三次）染色：复红染色染色：复红染色12分钟分钟 水洗，吸水纸吸去多余水分水洗，吸水纸吸去多余水分 干燥干燥 镜检：依序镜检：依序10 x，40 x，100 x（油镜）观察。（油镜）观察。微生物常用染色方法微生物常用染色方法2、革兰氏染色法、革兰氏染色法结晶紫初染（结晶紫初染（1min，水洗）水洗）碘液媒染（碘液媒染（1min，水洗）水洗）乙醇脱色（乙醇脱色（20-30s，水洗）水洗）番红复染（番红复染（3min，水洗）水洗）涂片固定（菌悬涂片固定（菌悬液）液）