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1、 第九次实验 方法比较实验 方法比较实验是将候选方法与准确度知的方法做对比，以评价候选方法的准确度。它同时可检测候选方法的恒定误差和比例误差的大小。教学目的与要求教学目的与要求1.掌握方法比较实验的原理和评价。掌握方法比较实验的原理和评价。2.掌握己糖激酶法测血糖和氧化酶法掌握己糖激酶法测血糖和氧化酶法测血糖的测定原理。测血糖的测定原理。3.熟习己糖激酶法和氧化酶法测定血熟习己糖激酶法和氧化酶法测定血清血糖的操作过程。清血糖的操作过程。一、试剂与资料一、试剂与资料1.己糖激酶法测定血糖试剂盒任务己糖激酶法测定血糖试剂盒任务液：试剂液：试剂A、试剂、试剂B按按2：1混合混合。2.氧化酶法测定血糖
2、试剂盒任务液：氧化酶法测定血糖试剂盒任务液：试剂试剂A、试剂、试剂B按按2：1混合混合。3.半自动生化分析仪。半自动生化分析仪。4.实验血清。实验血清。三、血糖的测定己糖激酶法已讲三、血糖的测定己糖激酶法已讲一实验原理一实验原理TrinderTrinder反响反响:GOD葡萄糖酸葡萄糖酸2H2O22H2O2氧化酶法氧化酶法葡萄糖葡萄糖2H2O 2H2O O2 O2 H2O2 4-AAP 酚酚 POD苯醌亚胺苯醌亚胺2H2O 2H2O HClHCl2.2.混匀，混匀，3737水浴水浴7 7分钟，波长分钟，波长 500nm 500nm比色。比色。二操作方法二操作方法 任任务务液液1ml蒸蒸馏馏水水
3、1010ul ul 葡萄糖葡萄糖规范规范10ul血清血清10ul 1.空白管空白管 规范管规范管 测定管测定管 任任务务液液1ml混合混合混合混合3.3.结果计算结果计算测定管吸光度测定管吸光度GLUGLUmmol/L)mmol/L)5.565.56规范管吸光度规范管吸光度GLUGLUmmol/L)mmol/L)5.565.56GLUGLUmmol/L)mmol/L)5.565.56GLUGLUmmol/L)mmol/L)5.565.564.本卷须知本卷须知1.1.新配制的葡萄糖规范液须放置新配制的葡萄糖规范液须放置2h2h以上以上(最好过最好过夜夜)，待变旋平衡后方可运用，待变旋平衡后方可运
4、用.2.2.尿酸会干扰过氧化物酶反响，使结果偏低。尿酸会干扰过氧化物酶反响，使结果偏低。3.3.复原性物质可竞争复原性物质可竞争H2O2,H2O2,使结果偏低。使结果偏低。4.4.严重黄疽、溶血及乳糜样血清使结果偏高应先严重黄疽、溶血及乳糜样血清使结果偏高应先制备无蛋白血滤液，然后再进展测定。制备无蛋白血滤液，然后再进展测定。四、方法比较四、方法比较 以葡萄糖已糖激酶法作为参比如法，葡萄糖氧化酶法为候选方法进展比较。1.搜集标本搜集标本 每天搜集高、中、低不同浓每天搜集高、中、低不同浓度标本度标本8份，份，5天共天共40份。份。2.测定测定 将标本编号，分别用两种方法先将标本编号，分别用两种方
5、法先从从1-8顺序测定，再从顺序测定，再从8-1顺序测定，记顺序测定，记录测定结果。反复录测定结果。反复5天。天。以对比方法的结果为横坐标被评价方法的结果为纵坐标绘制散点图。3.3.绘制散点图绘制散点图YX4.4.检查散点图有无明显离群点检查散点图有无明显离群点1 1分别计算每对结果差值，如：分别计算每对结果差值，如：X1-Y1X1-Y1、X2-Y2.X2-Y2.2 2计算一切差值的平均差值。计算一切差值的平均差值。3 3离群判别离群判别 以以4 4倍平均差值作判别限。倍平均差值作判别限。某对差值超出某对差值超出4 4倍平均差值那么视为离倍平均差值那么视为离群点，剔除，假设有两个离群点，那么群
6、点，剔除，假设有两个离群点，那么另做标本补充另做标本补充8 8分结果。分结果。5.5.回归及相关分析回归及相关分析 根据直线回归分析，求出回归方程y=a+bx及相关系数r。截距a反映恒定系统误差的大小，斜率b反映比例系统误差的大小，相关系数反映两种方法相关性的亲密程度，r0.975或r0.95，可接受。6.6.计算系统误差计算系统误差 根据回归方程的a、b值，可以计算候选方法的系统误差SE；并与不同医学决议程度Xc的允许误差TEa作比较。要求SE=a+bXc-Xc 1/2TEa7.7.配对配对t t检验检验 经过统计软件进展配对t检验，t值是方法比较实验中系统误差和随机误差的比值，假设tt0.05(v)，阐明两种方法间的系统误差和随机误差量相比相差不大，虽然有偏向，但能够由随机误差为主所致，不一定确实存在方法间的系统误差。请预习：请预习：甘油三脂测定甘油三脂测定吸收曲线检测吸收曲线检测
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