实验一--药物的杂质检查

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1、实验一 药物的杂质检查实验目的：1. 掌握药物的一般杂质检查原理与实验措施。2. 掌握杂质限度实验的概念及计算措施。 3. 熟悉一般杂质检查项目与意义。实验原理：酸碱度、氯化物、硫酸盐、不挥发物、重金属的检查原理参见教材第三章中杂质检查部分。实验器材：纳氏比色管，试药：葡萄糖、氯化钠原料药。仪器：50mL纳氏比色管、刻度吸管、100mL测砷瓶，药物天平。实验内容与措施：（一）葡萄糖1、酸度 取本品2.0g，加水20mL溶解后，加酚酞批示液3滴与氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）0.20mL，应显粉红色。2、溶液的澄清度与颜色 取本品5g，加热水溶解后，放冷，用水稀释至10mL，溶液应澄清无色

2、；如显浑浊，与1号浊度原则液（附录H）比较，不得更浓；如显色，与对照液（取比色用氯化钴液3mL、比色用重铬酸钾液3mL与比色用硫酸铜液6mL，加水稀释成50mL）1.0mL加水稀释至10mL比较，不得更深。3、乙醇溶液的澄清度 取本品1.0g，加90%乙醇30mL，置水浴上加热回流约10分钟，溶液应澄清。4、氯化物 取本品0.6g，加水溶解使成25mL，再加稀硝酸10mL；溶液如不澄清，应滤过；置50mL纳氏比色管中，加水使成约40mL，摇匀，即得供试溶液。另取原则氯化钠溶液6.0mL，置50mL纳氏比色管中，加稀硝酸10mL，加水使成40mL，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别

3、加入硝酸银试液1.0mL，用水稀释，使成50mL，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观测、比较（附录A）。供试溶液所显浑浊度不得较对照液更浓（0.01%）。5、硫酸盐 取本品2.0g，加水溶解使成约40mL；溶液如不澄清，应滤过；置50mL纳氏比色管中，加稀盐酸2mL，摇匀，即得供试溶液。另取原则硫酸钾溶液2.0mL，置50mL纳氏比色管中，加水使成约40mL，加稀盐酸2mL，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入25%氯化钡溶液5mL，用水稀释至50mL，充足摇匀，放置10分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观测、比较（附录B）。供试溶液所显浑浊度不得较

4、对照液更浓（0.01%）。6、亚硫酸盐与可溶性淀粉 取本品1.0g，加水10mL溶解后，加碘试液1滴，应即显黄色。7、干燥失重取本品，在105干燥至恒重，减失重量不得过9.5%（附录E）。8、炽灼残渣 不得过0.1%（附录F）。9、铁盐 取本品2.0g，加水20mL溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，加水稀释使成45mL，加硫氰酸铵溶液（30100）3mL，摇匀，如显色，与原则铁溶液2.0mL用同一措施制成的对照液比较，不得更深（0.001%）。10、重金属 取25mL纳氏比色管两支，甲管中加原则铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2mL后，加水稀释成25mL。取本品4.0g，置乙管

5、中，加水适量溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2mL，加水使成25mL；若供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其她无干扰的有色溶液，使之与乙管颜色一致。再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2mL，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深（附录C），含重金属不得过百万分之五。11、砷盐 取本品2.0g，加水5mL溶解后，加稀硫酸5mL与溴化钾溴试液0.5mL，置水浴上加热约20分钟，使保持稍过量的溴存在，必要时，再补加溴化钾溴试液适量，并随时补充蒸散的水分，放冷，加盐酸5mL与水适量使成28mL，置测砷瓶中，作为供试溶液。另精密量取原则砷溶液2

6、mL，照供试品制备项下措施，自加水5mL溶解后起，至置测砷瓶中，同法解决，作为原则液。取供试溶液和原则液分别进行如下操作：加碘化钾试液5mL与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将装妥的导气管密塞于测砷瓶上，并将测砷瓶置2540水浴中，反映45分钟，取出溴化汞试纸，比较。供试溶液生成的砷斑与原则砷斑比较（附录D），不得更深（0.0001%）。实验注意事项：1、比色管的对的使用选择配对的两支纳氏比色管，用清洁液荡洗除去污物，再用水冲洗干净。采用旋摇的措施使管内液体混合均匀。2、对的选用量具根据检查实验一般容许误差为10%的规定和药物、试剂的取用量，选择合适的容量仪器。3、

7、平行操作原则与样品必须同步进行实验，加入试剂量等均应一致。观测时，两管受光照的限度应一致，使光线从正面照入，比色时置白色背景上，比浊时置黑色背景上，自上而下地观测。4、注意刻度吸管的对的使用和观测。5、限量计算:杂质限量%=(V原则C原则)/W样)100%。式中V原则为原则液体积，C原则为原则液浓度，W样为样品取样量。实验报告： 实验结束后，书写实验报告。实验一指引要点：1. 比色管的选择、洗涤和使用选择两支配对的纳氏比色管，50mL比色管有25mL和50mL两个刻度，规定两管的粗细、长短、玻璃颜色、刻度高下等一致。比色管的清洁不能用毛刷刷，以免玻璃发毛，影响比色、比浊，应用清洁液荡洗，然后用

8、水冲洗干净。比色管使用中不能直火加热或高温烘烤。比色、比浊操作要注意平行原则，即样品与原则须同步进行实验，加入试剂的量、顺序，放置时间，稀释限度等均应一致。在比色管中加入试剂后，规定旋摇均匀，即用手指握住比色管上端，运用手腕旋转的惯性使比色管向四周作圆锥形旋摇。观测方式，比浊时以黑色为背景，比色时以白色为背景，使两管受到的光线照射限度一致。让光线从正前方射入向上反射，由上而下垂直观测，比较样品管与原则管的浑浊或颜色深浅限度。2. 对的选用量器在杂质检查中容许的误差为10%，量筒的绝对误差为1毫升至数毫升，刻度吸管的绝对误差为0.010.1mL，药物天平的绝对误差为0.1g。在实验中，应根据样品

9、、原则液的取用量，对的选用量器。例：取原则液2mL，容许的误差为：X/2100%=10%，X=0.2mL，故应选择刻度吸管吸取原则液。取样品2g，容许的误差为0.2 g，可选用药物天平称取。3. 葡萄糖铁盐检查时，采用硝酸氧化Fe2+Fe3+，不再加过硫酸铵，原则液与样品液同法操作。样品液加硝酸煮沸时，采用小火，注意爆沸，必要时补充适量水。4. 重金属检查时，若样品液有色，需用稀焦糖溶液调节原则液颜色。稀焦糖溶液的制备：取蔗糖置烧杯中，用小火加热使成焦状，然后加水溶解，取上清液备用。根据供试品溶液的颜色深浅，掌握加热限度和加水稀释限度，随加热温度与时间的不同，得到的水溶液呈黄、褐或棕黑色。原则

10、管中加入的稀焦糖溶液量一般控制在12滴。5.葡萄糖砷盐检查时采用湿法破坏，在酸性溶液中用溴进行有机破坏使砷游离。有机破坏在小烧杯中进行，20分钟内要保持过量的溴存在，随时补充消耗的溴化钾溴试液，使溶液呈黄色，20分钟后要将多余的溴除尽，使溶液无色。6.选择配对的测砷瓶和测砷管，加砷粒前按装好醋酸铅棉花和溴化汞试纸，醋酸铅棉花的填塞松紧度、长短要合适，溴化汞试纸应盖住测砷管孔，并盖紧盖子，勿使漏气（示范）。加砷粒后必须立即塞紧测砷管，在规定温度下反映1小时。7.比较氯化钠和葡萄糖中杂质限度检查的几种措施。附录A 氯化物检查法原则氯化钠溶液的制备: 精密称取干燥至恒重的氯化钠0.165g，置100

11、0mL量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储藏液。临用前，精密量取储藏液10mL，置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得每1mL相称于10g Cl的原则溶液。干扰的排除：供试溶液如带颜色，可取供试溶液两份，分置50mL纳氏比色管中，一份中加硝酸银试液1.0mL，摇匀，放置10分钟，如显浑浊，可反复滤过，至滤液完全澄清，再加规定量的原则氯化钠溶液与水适量使成50mL，摇匀，在暗处放置5分钟，作为对照溶液；另一份中加硝酸银试液1.0mL与水适量使成50mL，摇匀，在暗处放置5分钟，按上述措施与对照溶液比较，即得。用滤纸滤过时，应预先用品有硝酸的水洗净滤纸中的氯化物后再过滤。B硫酸

12、盐检查法原则硫酸钾溶液的制备：精密称取干燥至恒重的硫酸钾0.181g，置1000mL量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1mL相称于100g SO4的原则溶液。干扰的排除：供试溶液如带颜色，可取供试溶液两份，分置50mL纳氏比色管中，一份中加25%氯化钡溶液5mL，摇匀，放置10分钟，如显浑浊，可反复滤过，至滤液完全澄清，再加规定量的原则硫酸钾溶液与水适量使成50mL，摇匀，放置10分钟，作为对照溶液；另一份中加25%氯化钡溶液5mL与水适量使成50mL，摇匀，放置10分钟，按上述措施与对照溶液比较，即得。C重金属检查法原则铅溶液的制备：精密称取干燥至恒重的硝酸铅0.160g，置1

13、000mL量瓶中，加硝酸5mL与水50mL溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为储藏液。临用前，精密量取储藏液10mL，置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得每1mL相称于10g Pb的原则溶液。干扰的排除：若供试液带颜色，可在原则管中滴加少量的稀焦糖溶液或其她无干扰的有色溶液，使之与样品管颜色一致。如在原则管中滴加稀焦糖溶液仍不能使颜色一致时，可取该药物项下规定的二倍量的供试品和试液，加水或该药物项下规定的溶剂使成30mL，将溶液提成甲乙二等份，乙管中加水或该药物项下规定的溶剂稀释成25mL；甲管中加入硫代乙酰胺试液2mL，摇匀，放置2分钟，经滤膜（孔径3mm）滤过，然后甲管中加入原则铅

14、溶液一定量，加水或该药物项下规定的溶剂使成25mL；再分别在乙管中加硫代乙酰胺试液2mL，甲管中加水2mL，依法比较，即得。配制与贮存用的玻璃容器均不得含铅。D砷盐检查法仪器装置：A为100mL原则磨口锥形瓶（测砷瓶）；B为中空的原则磨口塞，上连导气管C；D为具孔的有机玻璃旋塞，E为中央具有圆孔的有机玻璃旋塞盖。测试时，于导气管C中装入醋酸铅棉花60mg（装管高度6080mm），再于旋塞D的顶端平面上放一片溴化汞试纸（试纸大小以能覆盖孔径而不露出平面外为宜），盖上旋塞盖E并旋紧，即得。 原则砷溶液的制备： 精密称取干燥至恒重的三氧化二砷0.132g，置1000mL量瓶中，加20%氢氧化钠溶液5mL溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10mL，用水稀释至刻度，摇匀，作为储藏液。临用前，精密量取储藏液10mL，置1000mL量瓶中，加稀硫酸10mL，用水稀释至刻度，摇匀，即得每1mL相称于1g As的原则溶液。