酶促反应动力学实验.ppt
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酶促反应动力学实验 实验目的 通过完成一定的实验方案设计 以分析研究各种因素对酶促反应速率的影响 学习鉴定温度 抑制剂等影响酶促反应速率的方法和了解测定酶的Km值和Vmax值的方法 一 温度对于唾液淀粉酶活性的影响 1 实验原理 酶作为生物催化剂 在酶促反应开始时反应速率随温度升高而增快 达到最大反应速率时的温度称为某种酶的最适温度 达到最适温度后 随着温度的升高酶促反应速率下降 测定酶活性在最适温度下进行 本实验以唾液淀粉酶为例 利用淀粉水解过程中不同阶段的产物与碘有不同的颜色反应 定性观察唾液淀粉酶在不同温度下的酶活性 并根据底物即淀粉水解的快慢来判断酶活性的高低 淀粉经淀粉酶水解为葡萄糖的不同阶段 与碘试试剂作用的颜色反应如下 淀粉 蓝色 紫色糊精 紫色 红色糊精 红色 无色糊精 无色 麦芽糖 无色 葡萄糖 无色 2 实验步骤 首先按如图所示在1到6号试管中加入试剂 3 实验结果记录 4 实验讨论 实际意义 探究温度对酶的影响可方便提高酶活性 延长酶活有效期 生产或实验中可使酶处于最适条件下能提高产量和质量 也可阻止一些不利生产的酶的繁殖 而将条件提升到适合有益酶的条件 择优或者达到两个酶都有益的条件 起到协同作用 增加效益 琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制 一 实验原理 抑制剂和底物的结构相似 结合部位相同 抑制效应与酶浓度有关 底物浓度不变时 酶活性的抑制程度随抑制剂浓度的增加而增加 抑制剂浓度不变时 酶活性随底物浓度的增加而逐渐恢复 琥珀酸脱氢酶的活性 在隔绝空气的条件下 可从加入的甲烯蓝的褪色情况来判断 琥珀酸脱氢酶琥珀酸 甲烯蓝延胡索酸 甲烯白 二 实验步骤 1 酶提取液的制备 取大鼠骨骼肌适量 用冷水洗3次 加入1 15mol LpH7 4的磷酸缓冲液 在高速组织捣碎机中进行捣碎 然后用纱布过滤 用干净的烧杯收集过滤的备用 2 取试管5支 编号 再按图所示步骤操作 3 各管均在最后加入琥珀酸 并立刻将各试管溶液混匀 沿试管壁加入液体石蜡 约0 5cm 各试管置于37 C的水浴中保温 切勿摇动试管 随时观察比较各试管颜色的变化 记录蓝色消退时间 四 实验结果记录 五 实验讨论 实际意义 琥珀酸脱氢酶是唯一嵌入到线粒体内膜的酶 是线粒体内膜的一个重要部分 其它酶大多存在于线粒体的基质 作用于有氧呼吸过程 作为参与三羧酸循环的关键酶 琥珀酸脱氢酶是反映线粒体功能的标志酶 markerenzyme 之一 其活性一般可作为评价三羧酸循环运行程度的指标 对于评价精子线粒体功能 研究致奶牛酮缺乏症病理过程等具有重要意义- 配套讲稿:
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- 反应 动力学 实验
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