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1、毛细管电泳法测定阿司匹林中的水杨酸、实验目的1进一步理解毛细管电泳的基本原理；2熟悉毛细管电泳仪器的构成；3 了解影响毛细管电泳分离的主要操作参数。实验原理:毛细管电泳又称高效毛细管电泳(High Performa nee Capillary Electrophoresis, HPCE) 是一种仪器分析方法。通过施加10-40kV的高电压于充有缓冲液的极细毛细管，对液体中离子或荷电粒子进行高效、快速的分离。现在，HPCE已广泛应用于氨基酸、蛋白质、多肽、低聚核苷酸、DNA等生物分子分离分析，药物分析，临床分析，无机离子分析，有机分子 分析，糖和低聚糖分析及高聚物和粒子的分离分析。人类基因组工程
2、中DNA的分离是用毛细管电泳仪进行的。1仪器结构毛细管电泳较高效液相色谱有较多的优点。其中之一是仪器结构简单(见图1 )。它包括一个高电压源，一根毛细管，紫外检测器及计算机处理数据装置。另有两个供毛细管两端插入而又可和电源相连的缓冲液池。capi l l aryEl ectrode2. 分离原理毛细管中的带电粒子在电场的作用下，一方面发生定向移动的电泳迁移， 另一方面，由于电泳过程伴随电渗现象， 粒子的运动速度还明显受到溶液电渗流速度的影响。粒子的实际流速V是泳流速度 Vep和渗流速度 Veo的矢量和。即：V = Vep + Veo(1)电渗是一种液体相对于带电的管壁移动的现象。溶液的这一运动
3、是由硅/水表面的Zeta势引起的。CE通常采用的石英毛细管柱表面一般情况下(pH3)带负电。当它和溶液接触时，双电层中产生了过剩的阳离子。高电压下这些水合阳离子向阴极迁移形成一个扁平的 塞子流，如图2。毛细管管壁的带电状态可以进行修饰，管壁吸附阴离子表面活性剂增加电渗流， 管壁吸附阳离子表面活性剂减少电渗流甚至改变电渗流的方向。O-O-O-O-0一 o_一一_ CZ3 _I IIIIIII毛细管区带电泳(CZE)也称自由溶液电泳,是HPCE中最基本也是应用最广的一种模式它是基于分析物表面电荷密度的差别进行分离的。实验中，在毛细管和电解池中充以相同的缓冲液，样品用电迁移或流体动力学法从毛细管一端
4、导入，加入电压后，样品离子在电场力驱动下以不同的泳动速度迁移至检测器端，形成不连续的移动区带分离出来。图3是不同电荷密度的阳离子到达检测端的信号。操作电压、缓冲液的选择及其浓度和pH值、进样的电压和时间等都是 CZE操作的重要参量，合理优化选择柱温、分离时间、柱尺寸、进样和 检测体积、溶质吸附和样品浓度等也将大大提高柱效。CZE中还可通过改变电渗流的方向3 紫外检测本仪器的检测器是 UV/vis。UV/vis通用性好，是使用最广泛的一种检测器。由朗伯 -比 耳定律：A=lg(IO/l)(2)式中，A为吸光度，I0为入射光强度，I为经检测物吸收后的透射光强度。在固定的实验条件下：A=K c(3)
5、式(3)就是定量分析的基础。定量方法可用标准曲线法等。小内径毛细管限制了光吸收型检测器的灵敏度。一般检测限不低于10-6mol/L。4.阿司匹林及水杨酸阿司匹林(乙酰水杨酸)为一常用解热镇痛药，自问世以来的近百年里， 一直是世界上最广 泛应用的药物之一。近年来，又被用于预防心血管疾病。游离水杨酸是阿司匹林在生产过程水杨酸对人体有毒性，刺激中由于乙酰化不完全而带入或在贮存期间阿司匹林水解产生的。肠胃道产生恶心、呕吐。、仪器与试剂:1仪器1） 贝克曼高效毛细管电泳仪 , 毛细管电泳仪主要有以下五部分组成：高压电源、进样系统、毛细管柱、检测器和信号接收系统（计算机 ）；2）其它：注射器若干，带盖子的
6、小瓶子若干，移液管，容量瓶，分析天平，药匙，烧 杯，洗耳球， Ph 计，电磁搅拌器、磁搅拌子、2.试剂水杨酸、四硼酸钠、氢氧化钠、十二烷基硫酸钠（SDS）、盐酸、乙醇、甲醇、阿司匹林样品，二次蒸馏水四、实验步骤：1. 配制 30mmol/L 的四硼酸钠缓冲溶液，调 Ph 至 9.022. 配制 50mmol/L 的水杨酸标准溶液， 0.1mol/L 的氢氧化钠溶液3. 准确称取 0.2g 左右的样品，用乙醇溶解至 10mL ，移取 1mL 用二次蒸馏水稀释 100 倍。4. 向 5 个 10mL 容量瓶中移取 2mL 样品稀释液，依次加入 0，0. 5，1.0， 2.0，5.0mmol 的水 杨酸标准溶液，用二次蒸馏水定容至刻度线。5. 将所有溶液（缓冲液，氢氧化钠，水，加标样）经微孔滤膜过滤后装入小瓶子里6. 测定：毛细管柱在使用前分别用0.1 mol 的 NaOH 溶液和二次蒸馏水及缓冲液冲洗 3min后，在运行电压下平衡 10min 。以后每次进样前均用缓冲液冲柱，在运行电压下平衡5min 。本实验采用电迁移进样（ 20Kv、 0.5s）。 高压端进样， 低压端检测， 20 Kv 的工作电压。 检测波长为 214nm 。
毛细管电泳法测定阿司匹林中的水杨酸
