药物分析湖南大学第04章药物定量分析与分析方法验证

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1、第四章第四章 药物定量分析与分析方法验证药物定量分析与分析方法验证第一节第一节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证第四节第四节 生物样品分析方法的基本要求生物样品分析方法的基本要求第一节第一节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法在进行药物定量分析之前，一般需根据分析方在进行药物定量分析之前，一般需根据分析方法的特点，化学原料药的结构与性质及药物制法的特点，化学原料药的结构与性质及药物制剂的处方组成采用不同的方法对试样进行前处剂的处方组成采用不同的方法对试样进行前处理，

2、以满足所选用的分析方法对试样的要求。理，以满足所选用的分析方法对试样的要求。含金属或卤素、氮、硫、磷等元素的药物的分含金属或卤素、氮、硫、磷等元素的药物的分析方法通常可分为：析方法通常可分为：（1 1）不经有机破坏的分析方法）不经有机破坏的分析方法（2 2）经有机破坏的分析方法）经有机破坏的分析方法一、不经有机破坏的分析方法一、不经有机破坏的分析方法l不对药物分子中的有机结构进行完全破坏不对药物分子中的有机结构进行完全破坏;l仅选用适当的溶剂溶解样品使待测元素离仅选用适当的溶剂溶解样品使待测元素离子电离或经简单回流处理使有机结合的待子电离或经简单回流处理使有机结合的待测元素原子离解而转化为无机

3、盐类后测定。测元素原子离解而转化为无机盐类后测定。l适用于含金属有机药物或结合不牢固的含适用于含金属有机药物或结合不牢固的含卤素等药物的分析。卤素等药物的分析。l根据操作方法不同，主要有：根据操作方法不同，主要有：直接测定法、直接测定法、经水解后测定法、经还原分解后测定法经水解后测定法、经还原分解后测定法。1. 直接测定法直接测定法凡金属原子不直接与碳原子相连的含金属的有机药凡金属原子不直接与碳原子相连的含金属的有机药物或某些物或某些C-MC-M（金属原子直接与碳原子相连）键结（金属原子直接与碳原子相连）键结合不牢固的有机金属药物，在水溶液中可电离，不合不牢固的有机金属药物，在水溶液中可电离，

4、不需经有机破坏，直接进行测定。需经有机破坏，直接进行测定。 配位滴定法：配位滴定法：利用二价金属离子可与乙二胺四乙利用二价金属离子可与乙二胺四乙酸二钠形成配位化合物，直接酸二钠形成配位化合物，直接乙二胺四乙酸二钠乙二胺四乙酸二钠滴定液滴定。滴定液滴定。 氧化还原滴定法：氧化还原滴定法：利用不同价态的金属离子的氧利用不同价态的金属离子的氧化还原性，选用适当的滴定液直接或间接滴定法化还原性，选用适当的滴定液直接或间接滴定法测定含量。测定含量。例例1 1：葡萄糖酸钙的含量测定：葡萄糖酸钙的含量测定取本品，加水溶解后，在氢氧化钠碱性条件下，以取本品，加水溶解后，在氢氧化钠碱性条件下，以钙紫红素为指示剂

5、，用钙紫红素为指示剂，用乙二胺四乙酸二钠滴定液滴乙二胺四乙酸二钠滴定液滴定至溶液自紫色转变为纯蓝色。定至溶液自紫色转变为纯蓝色。例例2 2：葡萄糖酸锑钠的含量测定：葡萄糖酸锑钠的含量测定本品所含的五价本品所含的五价锑具有氧化性，在酸性溶液中可氧锑具有氧化性，在酸性溶液中可氧化碘化钾并析出碘化碘化钾并析出碘，选用间接碘量法，用硫代硫酸，选用间接碘量法，用硫代硫酸钠滴定液滴定。钠滴定液滴定。2KISb2KISb23564322ONaS2NaIO2NaSI2. 经水解后测定法经水解后测定法 碱水解后测定法：碱水解后测定法：将含卤素的有机药物溶解于适将含卤素的有机药物溶解于适当的溶剂中，加当的溶剂中，

6、加NaOHNaOH溶液回流使其水解，将有机溶液回流使其水解，将有机结合的卤素转变为无机形式的卤素离子，然后选结合的卤素转变为无机形式的卤素离子，然后选用间接银量法用间接银量法。本法适用于含卤素有机药物结构。本法适用于含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢固的药物，如卤素和脂肪碳中卤素原子结合不牢固的药物，如卤素和脂肪碳相连者。相连者。 酸水解后测定法酸水解后测定法：将含金属的有机药物与适当的将含金属的有机药物与适当的矿酸（如盐酸）共热，将不溶性金属盐类水解置矿酸（如盐酸）共热，将不溶性金属盐类水解置换为可溶性盐，然后选用配位滴定或剩余酸碱滴换为可溶性盐，然后选用配位滴定或剩余酸碱滴定法测定。定法

7、测定。例例2 2：三氯叔丁醇的含量测定：三氯叔丁醇的含量测定取本品，溶于乙醇后，加取本品，溶于乙醇后，加NaOHNaOH溶液并加热回流，使溶液并加热回流，使有机结合的氯水解生成有机结合的氯水解生成NaClNaCl，与，与AgNOAgNO3 3生成生成AgClAgCl沉淀，沉淀，过量的过量的AgNOAgNO3 3用用NHNH4 4SCNSCN溶液滴定溶液滴定( (指示剂指示剂:Fe:Fe3+3+) )。例例1 1：十一烯酸锌的含量测定：十一烯酸锌的含量测定本品与稀盐酸共沸本品与稀盐酸共沸，水解生成十一烯酸和氯化锌，水解生成十一烯酸和氯化锌，用乙二胺四乙酸钠滴定液直接滴定锌离子。用乙二胺四乙酸钠滴

8、定液直接滴定锌离子。CCl3- -C(CH3)2- -OH + 4NaOH 回流回流(CH3)2- -CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2ONaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCNAgSCN + NH4NO3（淡棕红色）（淡棕红色）(Ksp=1.561010 )(Ksp=1.010- -12 )Fe3+ + SCN Fe (SCN) 2+ 3. 经还原分解后测定法。经还原分解后测定法。含碘有机药物，当碘原子直接与芳环连接时，碘的含碘有机药物，当碘原子直接与芳环连接时，碘的结合比较牢固，采用碱性溶液回流是难以使结合比较牢固，采用碱性溶液回流是

9、难以使C-I键键断裂，但可在碱性人溶液中加入还原剂（如锌粉）断裂，但可在碱性人溶液中加入还原剂（如锌粉）回流，使其转化为无机碘化物后测定。回流，使其转化为无机碘化物后测定。例：泛影酸的含量测定例：泛影酸的含量测定取本品约取本品约0.4g0.4g（精密称定），加（精密称定），加NaOHNaOH试液试液30ml30ml与锌与锌粉粉1.0g1.0g，加热回流，加热回流30min30min，放冷，冷凝管用少量水，放冷，冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤三次，每次洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤三次，每次15ml15ml，洗液与滤液合并，加冰醋酸洗液与滤液合并，加冰醋酸5ml5ml与曙红钠指示液

10、与曙红钠指示液5 5滴，滴，用用AgNOAgNO3 3（0.1mol/L0.1mol/L）滴定液滴定。）滴定液滴定。COOHIIINHCOCH3CH3CONH+ 11NaOH + 3Zn + 11NaOH + 3Zn + 3NaI + 2CH+ 3NaI + 2CH3 3COONa + 3NaCOONa + 3Na2 2ZnOZnO2 2 + 3H + 3H2 2O OCOONaNH2NH2NaINaI + AgNo + AgNo3 3 AgI AgI+ NaNO+ NaNO3 3碘他拉酸、胆影酸、碘番酸等均采用同法测定碘他拉酸、胆影酸、碘番酸等均采用同法测定COOHIIINH C(CH2)4

11、OC NHOCOOHIII胆影酸胆影酸COOHIIICONHCH3CH3CONH碘他拉酸碘他拉酸IH2NIICH2CHCOOHC2H5碘番酸碘番酸二、经有机破坏的分析方法二、经有机破坏的分析方法l含金属及含卤素、氮、硫、磷等有机药物含金属及含卤素、氮、硫、磷等有机药物结构中的待测原子与碳原子结合牢固者，结构中的待测原子与碳原子结合牢固者，用水解或氧化还原的方法难以将有机结合用水解或氧化还原的方法难以将有机结合的待测原子转变为无机形式；的待测原子转变为无机形式；l须采用有机破坏的方法将药物分子中有机须采用有机破坏的方法将药物分子中有机结构部分完全破坏，使有机结合形式的待结构部分完全破坏，使有机结

12、合形式的待测原子转变为可测的无机离子（或氧化物、测原子转变为可测的无机离子（或氧化物、无氧酸等）后方可分析。有机破坏方法包无氧酸等）后方可分析。有机破坏方法包括：括：湿法破坏、干法破坏。湿法破坏、干法破坏。1. 湿法破坏湿法破坏适用于含氮有机合成药物分析的前处理，在生物制适用于含氮有机合成药物分析的前处理，在生物制品分析中用于氮（包括蛋白质）、磷、硫柳汞及氯品分析中用于氮（包括蛋白质）、磷、硫柳汞及氯化钠测定法的前处理；化钠测定法的前处理； 亦可用于生物样品中金属元素测定时生物基质的去亦可用于生物样品中金属元素测定时生物基质的去除。除。主要分解剂：硫酸主要分解剂：硫酸辅助分解剂：硝酸、高氯酸、

13、过氧化氢。辅助分解剂：硝酸、高氯酸、过氧化氢。湿法破坏可分为：硫酸湿法破坏可分为：硫酸- -硝酸法、硫酸硝酸法、硫酸- -高氯酸法、高氯酸法、硫酸硫酸- -硫酸盐法硫酸盐法、硝酸、硝酸- -高锰酸钾法。高锰酸钾法。以硫酸以硫酸- -硫酸盐法为基础的含氮有机药物定量硫酸盐法为基础的含氮有机药物定量分析方法分析方法凯氏定氮法凯氏定氮法原理原理将含氮有机药物与硫酸和将含氮有机药物与硫酸和硫酸盐硫酸盐在凯氏烧瓶中共热，在凯氏烧瓶中共热，药物分子中有机结构被氧化分解成二氧化碳和水，药物分子中有机结构被氧化分解成二氧化碳和水，有机结合的氮则转变为无机氨，并于过量的硫酸结有机结合的氮则转变为无机氨，并于过量

14、的硫酸结合为硫酸氢铵及硫酸铵；合为硫酸氢铵及硫酸铵；经经NaOHNaOH碱化后释放出氨气，并随水蒸汽馏出，用硼碱化后释放出氨气，并随水蒸汽馏出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或碱滴定酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或碱滴定液滴定。液滴定。加入硫酸盐的作用是：提高硫酸的沸点，增强硫酸加入硫酸盐的作用是：提高硫酸的沸点，增强硫酸的氧化破坏能力，且防止硫酸的分解损失。的氧化破坏能力，且防止硫酸的分解损失。以硫酸以硫酸- -硫酸盐法为基础的含氮有机药物定量硫酸盐法为基础的含氮有机药物定量分析方法分析方法凯氏定氮法凯氏定氮法原理原理（续）（续）催化剂（如汞或汞盐、硒粉、铜盐、二氧化锰）：催

15、化剂（如汞或汞盐、硒粉、铜盐、二氧化锰）：加快氧化分解的速度，以缩短反应时间。加快氧化分解的速度，以缩短反应时间。硫酸铜因价廉易得，且无挥发、毒性低，常被用作硫酸铜因价廉易得，且无挥发、毒性低，常被用作本法的催化剂。本法的催化剂。对某些难以分解的药物（如含氮杂环结构药物），对某些难以分解的药物（如含氮杂环结构药物），在氧化分解过程中常需加入辅助氧化剂，使分解完在氧化分解过程中常需加入辅助氧化剂，使分解完全并缩短分解时间。常用的辅助氧化剂有全并缩短分解时间。常用的辅助氧化剂有30%30%过氧过氧化氢和高氯酸。高氯酸为强氧化剂，用量不宜过大。化氢和高氯酸。高氯酸为强氧化剂，用量不宜过大。以硫酸以硫

16、酸- -硫酸盐法为基础的含氮有机药物定量硫酸盐法为基础的含氮有机药物定量分析方法分析方法凯氏定氮法凯氏定氮法操作（常量法）操作（常量法） 氧化分解氧化分解供试品适量供试品适量置于置于500ml500ml凯氏烧瓶中凯氏烧瓶中依次加入依次加入10g 10g K K2 2SO4SO4和和0.5g 0.5g CuSOCuSO4 4粉末粉末沿瓶壁加入沿瓶壁加入20ml H20ml H2 2SOSO4 4加热至溶液加热至溶液成澄明的绿成澄明的绿色后，继续色后，继续加热加热30min30min放冷，沿瓶壁放冷，沿瓶壁加加250ml250ml水，水，振摇混合振摇混合放冷，加放冷，加75ml 40% 75ml

17、40% NaOHNaOH溶液溶液加锌粒数粒加锌粒数粒（防爆沸）（防爆沸）用氮气球将用氮气球将凯氏烧瓶与凯氏烧瓶与冷凝管连接冷凝管连接 吸收与滴定吸收与滴定取取2%2%硼酸溶液硼酸溶液50ml50ml置置500ml500ml锥形瓶中锥形瓶中加甲基红加甲基红- -溴溴甲酚绿混合甲酚绿混合指示剂指示剂1010滴滴将冷凝管下端将冷凝管下端插入硼酸溶液插入硼酸溶液的液面下的液面下轻轻摆动凯轻轻摆动凯氏烧瓶后，氏烧瓶后，加热蒸馏加热蒸馏馏出液用硫酸滴定馏出液用硫酸滴定液（液（0.05mol/L0.05mol/L）滴定至溶液由蓝绿滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色色变为灰紫色将滴定的结果用将滴定的结果用空白实验校

18、正空白实验校正以硫酸以硫酸- -硫酸盐法为基础的含氮有机药物定量硫酸盐法为基础的含氮有机药物定量分析方法分析方法凯氏定氮法凯氏定氮法应用范围应用范围中国药典主要应用本法测定含氨基或酰胺结构的药中国药典主要应用本法测定含氨基或酰胺结构的药物含量；物含量；对于以偶氮或肼等结构存在的含氮药物，因在消解对于以偶氮或肼等结构存在的含氮药物，因在消解过程中易于生成氮气而损失，需在消解前加入锌粉过程中易于生成氮气而损失，需在消解前加入锌粉还原后再依法处理；还原后再依法处理；杂环中的氮，因不易断键而难以消解，可用氢碘酸杂环中的氮，因不易断键而难以消解，可用氢碘酸或红磷还原为氢化杂环后再行消解；或红磷还原为氢化

19、杂环后再行消解；对于含氮量较高（对于含氮量较高（10%10%）的样品，可在消解液中加）的样品，可在消解液中加入少量多碳化合物，如蔗糖、淀粉等作为还原剂，入少量多碳化合物，如蔗糖、淀粉等作为还原剂，以利于氮转变为氨。以利于氮转变为氨。2. 干法破坏干法破坏本法主要适用于含卤素、硫、磷等有机药物分析的本法主要适用于含卤素、硫、磷等有机药物分析的前处理，亦可用于某些药物中硒及砷盐的检查。根前处理，亦可用于某些药物中硒及砷盐的检查。根据破坏方式可分为高温炽灼法和氧瓶燃烧法。据破坏方式可分为高温炽灼法和氧瓶燃烧法。 高温炽灼法高温炽灼法：a)a) 原理：原理：将含待测元素的有机药物经高温灼烧灰化，将含待

20、测元素的有机药物经高温灼烧灰化，使有机结构分解而到测元素转化为无机元素使有机结构分解而到测元素转化为无机元素或可溶性无机盐，以供分析。或可溶性无机盐，以供分析。b)b) 应用范围：应用范围：本法主要适用于含卤素药物的鉴本法主要适用于含卤素药物的鉴别，亦可用于含磷药物的定量测定和药物中别，亦可用于含磷药物的定量测定和药物中砷盐的检查。根据分析对象与目的不同，常砷盐的检查。根据分析对象与目的不同，常加无水加无水NaNa2 2COCO3 3、MgMg（NONO3 3) )2 2、Ca(OH)Ca(OH)2 2、ZnOZnO等辅等辅助灰化。助灰化。c)c) 含碘药物的鉴别：含碘药物的鉴别：将适量样品置

21、于坩锅中。将适量样品置于坩锅中。直火炽灼，或与无水直火炽灼，或与无水NaNa2 2COCO3 3混匀后，炽灼至紫混匀后，炽灼至紫色的碘蒸汽产生。色的碘蒸汽产生。d)d) 含氟、氯、溴等元素药物的鉴别：含氟、氯、溴等元素药物的鉴别：将适量样将适量样品置于坩锅中，与无水品置于坩锅中，与无水NaNa2 2COCO3 3（或（或NaNa2 2COCO3 3- -K K2 2COCO3 3混合物）混合，炽灼至完全灰化，加水混合物）混合，炽灼至完全灰化，加水溶解后鉴别。溶解后鉴别。e.e. 含磷药物（如甘油磷酸钠注射液）的定量测定：含磷药物（如甘油磷酸钠注射液）的定量测定：精密称取样品精密称取样品1ml1

22、ml，置于瓷坩锅中，加氧化锌，置于瓷坩锅中，加氧化锌1g1g，加热碳化后在加热碳化后在600600炽灼炽灼1h1h，放冷，加水与盐酸，放冷，加水与盐酸个个5ml5ml，加热煮沸使溶解后，用钼蓝比色法测定。，加热煮沸使溶解后，用钼蓝比色法测定。f.f. 砷盐的检查：砷盐的检查：有机结合的砷经与无水有机结合的砷经与无水NaNa2 2COCO3 3或或Ca(OH)Ca(OH)2 2、Mg(NOMg(NO3 3) )2 2共热（共热（700700）转化为无机砷）转化为无机砷酸盐后，依法检查。本法主要用于高分子化合物酸盐后，依法检查。本法主要用于高分子化合物（如：右旋糖酐铁）或植物提取物（如：大豆油）（

23、如：右旋糖酐铁）或植物提取物（如：大豆油）中砷盐的检查，亦应用与少数有机药物（如吡罗中砷盐的检查，亦应用与少数有机药物（如吡罗昔康、布美他尼等）昔康、布美他尼等）. . 氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法：a)a) 原理：原理：将含待测元素的有机药物置于充满氧将含待测元素的有机药物置于充满氧气的密闭燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部气的密闭燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部分彻底分解为分彻底分解为COCO2 2和和H H2 2O O，而待测元素根据电负，而待测元素根据电负性的不同转化为不同的氧化物（或无氧酸），性的不同转化为不同的氧化物（或无氧酸），被吸收于适当的吸收液中（多以酸根离子形被吸收于适当的吸收液中（多以

24、酸根离子形式存在）以供分析。本法适用于含卤素或硫、式存在）以供分析。本法适用于含卤素或硫、磷等元素的有机药物的鉴别、限度检查或含磷等元素的有机药物的鉴别、限度检查或含量测定，亦可用于药物中杂质硒的检查。量测定，亦可用于药物中杂质硒的检查。b)b) 仪器装置仪器装置：燃烧瓶为：燃烧瓶为500ml500ml、1000ml1000ml或或2000ml2000ml的磨口、硬质锥形瓶，瓶塞应严密，底部熔的磨口、硬质锥形瓶，瓶塞应严密，底部熔封铂丝一根（直径：封铂丝一根（直径：1mm1mm），铂丝下端做成网），铂丝下端做成网状或螺旋状，长度约为瓶身长度的状或螺旋状，长度约为瓶身长度的2/32/3。通常。通

25、常取样量为取样量为101020mg20mg，使用，使用500ml500ml燃烧瓶；加大燃烧瓶；加大样品取样量（样品取样量（200mg200mg）时可选用）时可选用1000ml1000ml或或2000ml2000ml的燃烧瓶的燃烧瓶A AF F氧瓶燃烧装置与样品包装操作图氧瓶燃烧装置与样品包装操作图c)c) 吸收液的选择：吸收液的选择：根据待测元素的种类与所选根据待测元素的种类与所选用的分析方法选择适当的吸收液，可使样品用的分析方法选择适当的吸收液，可使样品经燃烧分解所生成的不同价态的待测元素定经燃烧分解所生成的不同价态的待测元素定量地被吸收并转变为单一价态，以满足分析量地被吸收并转变为单一价态

26、，以满足分析方法的要求。方法的要求。含氟药物含氟药物一般选用茜素氟蓝比色法检查氟含一般选用茜素氟蓝比色法检查氟含量，其燃烧产物为单一的氟化氢，可选用水量，其燃烧产物为单一的氟化氢，可选用水作为吸收液。作为吸收液。吸收液的选择吸收液的选择 采用银量法测定含氯药物时采用银量法测定含氯药物时，燃烧产物亦为，燃烧产物亦为单一的氯化氢，但氯化氢在水中溶解度较低，单一的氯化氢，但氯化氢在水中溶解度较低，需用需用H H2 2O-NaOHO-NaOH溶液作为吸收液。溶液作为吸收液。采用银量法测定含溴药物时采用银量法测定含溴药物时，分解产生的溴，分解产生的溴化氢可被氧气氧化成单质溴，故其燃烧产物化氢可被氧气氧化

27、成单质溴，故其燃烧产物为单质溴和溴化氢的混合物，可在为单质溴和溴化氢的混合物，可在H H2 2O-NaOHO-NaOH吸收液中加入还原剂吸收液中加入还原剂SOSO2 2饱和溶液，将单质溴饱和溶液，将单质溴还原为溴负离子。还原为溴负离子。吸收液的选择吸收液的选择 测定含碘药物时测定含碘药物时，分解产生的碘化氢可被氧，分解产生的碘化氢可被氧气进一步氧化，其燃烧产物主要为单质碘，气进一步氧化，其燃烧产物主要为单质碘，并含有少量的五价碘（并含有少量的五价碘（HIOHIO3 3）与一价碘）与一价碘（HIHI）。当使用）。当使用AgNOAgNO3 3滴定法测定含量时，用滴定法测定含量时，用H H2 2O-

28、NaOHO-NaOH溶液溶液-SO-SO2 2饱和溶液作为吸收液，上述饱和溶液作为吸收液，上述不同价态的碘均转变为负一价的碘（不同价态的碘均转变为负一价的碘（NaINaI）；）；若使用间接碘量法测定时，用若使用间接碘量法测定时，用H H2 2O-NaOHO-NaOH溶液溶液为吸收液，此时吸收液中的待测物转变为碘为吸收液，此时吸收液中的待测物转变为碘酸钠（酸钠（NaIONaIO3 3）与碘化钠，可用溴）与碘化钠，可用溴- -醋酸溶液醋酸溶液将其氧化为同一价态，即将其氧化为同一价态，即HIOHIO3 3后，再加后，再加KIKI使使之定量生成单质碘，再用硫代硫酸钠滴定生之定量生成单质碘，再用硫代硫酸

29、钠滴定生成的碘。成的碘。吸收液的选择吸收液的选择 含硫药物含硫药物的燃烧产物主要为的燃烧产物主要为SOSO3 3，可用浓，可用浓H H2 2O O2 2与水的混合液作为吸收液，燃烧产物经吸收与水的混合液作为吸收液，燃烧产物经吸收转变为转变为H H2 2SOSO4 4，加入盐酸溶液并煮沸除去剩余，加入盐酸溶液并煮沸除去剩余的过氧化氢后，加入的过氧化氢后，加入BaClBaCl2 2，使硫酸生成，使硫酸生成BaSOBaSO4 4，以重量法测定含量。以重量法测定含量。含磷药物含磷药物（有机膦酸类）的燃烧产物为（有机膦酸类）的燃烧产物为P P2 2O O5 5，以水为吸收液，加入少量硝酸溶液并经煮沸以水

30、为吸收液，加入少量硝酸溶液并经煮沸使焦磷酸（使焦磷酸（H H4 4P P2 2O O7 7）和偏磷酸）和偏磷酸(HPO(HPO3 3)n)n转化转化为磷酸后，采用钼蓝比色法测定含量。为磷酸后，采用钼蓝比色法测定含量。硒化合物硒化合物在有机燃烧分解的同时转化为在有机燃烧分解的同时转化为SeOSeO2 2（含有少量的（含有少量的SeOSeO3 3），经硝酸溶液（），经硝酸溶液（130130）吸收后转变为硒酸（吸收后转变为硒酸（H H2 2SeOSeO4 4），再用二氨基奈），再用二氨基奈比色法测定。比色法测定。吸收液的选择吸收液的选择 d)d) 操作法：操作法：燃烧瓶内加入燃烧瓶内加入规定的吸收液

31、规定的吸收液瓶口用水湿润瓶口用水湿润小心急速通入氧小心急速通入氧气后盖上表面皿气后盖上表面皿点燃包有供试品点燃包有供试品的滤纸，迅速放的滤纸，迅速放入燃烧瓶中入燃烧瓶中按紧瓶塞，按紧瓶塞，用少量水封用少量水封闭瓶口闭瓶口俟燃烧完毕后充分俟燃烧完毕后充分振摇，使生成的烟振摇，使生成的烟雾完全吸收雾完全吸收用少量水冲洗瓶用少量水冲洗瓶塞和铂丝，合并塞和铂丝，合并洗液和吸收液洗液和吸收液用同法另作用同法另作空白实验空白实验依法进行鉴别、依法进行鉴别、检查或含量测定检查或含量测定例：例：碘苯碘苯酯的含量测定酯的含量测定本品主要为本品主要为10-10-对碘苯基十一酸乙酯与邻、间位的对碘苯基十一酸乙酯与邻

32、、间位的碘苯基十一酸乙酯的混合物。碘苯基十一酸乙酯的混合物。碘苯酯碘苯酯CHCH3(CH2)8COOCH2CH3I精密称定本精密称定本品约品约20mg20mg照氧瓶燃烧法照氧瓶燃烧法进行有机破坏进行有机破坏吸收液：吸收液：2ml2ml氢氧氢氧化钠试液化钠试液+10ml+10ml水水吸收完全后，加吸收完全后，加10ml10ml溴溴- -醋酸溶液醋酸溶液密塞，振摇，密塞，振摇，放置数分钟，放置数分钟，加甲酸约加甲酸约1ml1ml用水洗涤瓶口，用水洗涤瓶口，通空气通空气3 35 5分钟分钟除去剩余除去剩余BrBr蒸汽蒸汽加碘化钾加碘化钾2g2g，密塞，摇匀密塞，摇匀用用NaNa2 2S S2 2O

33、O3 3（0.02mol/L0.02mol/L）滴定，指示剂：淀粉；滴定，指示剂：淀粉；结果用空白实验校正结果用空白实验校正测定方法测定方法CHCH3(CH2)8COOCH2CH3IO O2 2/ /燃烧燃烧I I2 2(HIO(HIO3 3、HIOHIO、HI)HI)I2 + 2NaOHNaIO + NaI + H2O3NaIONaIO3 + 2NaI3Br2 + I- + 3H2OIO3- + 6HBrBr2 （过量的过量的）+ HCOOH2HBr + CO2IO3- + 5I- + 6H+3I2+ 3H2OOHOH- -I2 + 2Na2S2O32NaI + Na2S4O61.1.氧瓶燃

34、烧法中的装置和材料有氧瓶燃烧法中的装置和材料有（）（）A. A. 磨口硬质玻璃锥形瓶磨口硬质玻璃锥形瓶B. B. 磨口软质玻璃锥形瓶磨口软质玻璃锥形瓶C. C. 铂丝铂丝D. D. 铁丝铁丝E. E. 无灰滤纸无灰滤纸F. F. 铝丝铝丝自测题自测题2. 氧瓶燃烧法可用于氧瓶燃烧法可用于A. A. 含卤素有机药物的含量测定含卤素有机药物的含量测定B. B. 醚类药物的含量测定醚类药物的含量测定C. C. 检查甾体激素类药物中的氟检查甾体激素类药物中的氟D. D. 检查甾体激素类药物中的硒检查甾体激素类药物中的硒E. E. 芳酸类药物的含量测定芳酸类药物的含量测定3.3.氧瓶燃烧法测定含氯有机药

35、物时所用氧瓶燃烧法测定含氯有机药物时所用的吸收液多数为（）的吸收液多数为（）3.3.A. HA. H2 2O O2 2溶液溶液4.4.B. HB. H2 2O O2 2- -NaOHNaOH溶液溶液5.5.C. NaOHC. NaOH溶液溶液6.6.D D硫酸肼饱和液硫酸肼饱和液7.7.E. NaOHE. NaOH- -硫酸肼饱和液硫酸肼饱和液第二节第二节 定量分析法的特点定量分析法的特点一、容量分析法一、容量分析法容量分析法（也称滴定法），是将已知浓度容量分析法（也称滴定法），是将已知浓度的标准物质溶液（滴定液）滴定被测药物溶的标准物质溶液（滴定液）滴定被测药物溶液，直至滴定液与被测药物反应

36、完全（通过液，直至滴定液与被测药物反应完全（通过适当方法指示），根据滴定液的浓度和消耗适当方法指示），根据滴定液的浓度和消耗的体积，按化学计量关系计算出被测药物的的体积，按化学计量关系计算出被测药物的含量。含量。1. 容量分析法的特点容量分析法的特点在容量分析法中，常需借助指示剂的颜色改变来判在容量分析法中，常需借助指示剂的颜色改变来判断滴定终点的到达。但滴定终点与反应的化学计量断滴定终点的到达。但滴定终点与反应的化学计量点不一定恰好符合，二者之差称为滴定误差，是容点不一定恰好符合，二者之差称为滴定误差，是容量分析误差的来源之一，为了减少滴定误差，需要量分析误差的来源之一，为了减少滴定误差，需

37、要选择合适的指示剂。选择合适的指示剂。容量分析法所用仪器价廉易得，操作简便、快捷，容量分析法所用仪器价廉易得，操作简便、快捷，方法耐用性高，测定结果准确（通常相对误差方法耐用性高，测定结果准确（通常相对误差0.2%100100）；）；100100：浓度换算因素，将：浓度换算因素，将g/100mlg/100ml换算成换算成g/mlg/ml。%11cmEc.c. 显色法显色法: :当供试品在紫外当供试品在紫外- -可见光区没有强吸可见光区没有强吸收，或虽有吸收，但为了避免干扰或提高灵收，或虽有吸收，但为了避免干扰或提高灵敏度，加入适当的显色剂显色后进行测定。敏度，加入适当的显色剂显色后进行测定。2

38、.2.荧光分析法荧光分析法利用荧光强度与溶液中发射荧光的物质的浓度成正利用荧光强度与溶液中发射荧光的物质的浓度成正比关系进行定量分析。比关系进行定量分析。 特点特点a.a. 灵敏度高（灵敏度高（1010-10-101010-12-12g/mlg/ml）b.b. 适用与低浓度溶液（浓度太高可致适用与低浓度溶液（浓度太高可致“自熄自熄灭灭”）c.c. 对易被光分解的样品，需使用基准溶液代替对易被光分解的样品，需使用基准溶液代替对照品溶液校正仪器的灵敏度。对照品溶液校正仪器的灵敏度。d.d. 能产生荧光的物质较少，常需使用荧光衍生能产生荧光的物质较少，常需使用荧光衍生试剂得到强荧光，以提高灵敏度和选

39、择性。试剂得到强荧光，以提高灵敏度和选择性。 干扰因素的排除干扰因素的排除a.a. 溶剂：溶剂：溶剂不纯会带来较大误差，蒸馏后再溶剂不纯会带来较大误差，蒸馏后再使用。使用。b.b. 溶液：溶液：悬浮物对光有散射作用，悬浮物对光有散射作用，过滤或离心过滤或离心除去；溶解氧有降低荧光的作用，通入惰性除去；溶解氧有降低荧光的作用，通入惰性气体除氧。气体除氧。c.c. 玻璃仪器：玻璃仪器：玻璃仪器和测定池应高度洁净。玻璃仪器和测定池应高度洁净。d.d. 温度：温度：温度对荧光强度有较大影响，需控制温度对荧光强度有较大影响，需控制温度。温度。 测定法测定法rrbrXbXXCRRRRC-C CX X：供试

40、品溶液的浓度：供试品溶液的浓度C Cr r：对照品溶液的浓度：对照品溶液的浓度R RX X：供试品溶液的荧光强度：供试品溶液的荧光强度R Rr r：对照品溶液的荧光强度：对照品溶液的荧光强度R RXbXb：供试品溶液试剂空白的荧光强度：供试品溶液试剂空白的荧光强度R Rrbrb：对照品溶液试剂空白的荧光强度：对照品溶液试剂空白的荧光强度3.3.色谱分析法色谱分析法利用混合物中各组分在吸附剂上的吸附能力的不同利用混合物中各组分在吸附剂上的吸附能力的不同或在两相中的分配系数的不同，先行分离后再在线或在两相中的分配系数的不同，先行分离后再在线对各组分逐一进行分析。对各组分逐一进行分析。 高效液相色谱

41、法：高效液相色谱法：l灵敏度高（灵敏度高（1010-12-121010-15-15g/mlg/ml）l高选择性高选择性l高效能高效能l高速度高速度l应用广泛应用广泛a.a. 对仪器的一般要求对仪器的一般要求色谱柱填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶、辛色谱柱填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶、辛基（或氨基、氰基）硅烷键和硅胶、离子交基（或氨基、氰基）硅烷键和硅胶、离子交换剂（离子交换色谱）、凝胶或高分子多孔换剂（离子交换色谱）、凝胶或高分子多孔微球（分子排阻色谱）；微球（分子排阻色谱）；十八烷基硅烷键合硅胶（十八烷基硅烷键合硅胶（C C1818）固定相：甲醇）固定相：甲醇- -水、乙腈、缓冲液、反离子物质等

42、可为流动水、乙腈、缓冲液、反离子物质等可为流动相。但流动相中有机溶剂不应相。但流动相中有机溶剂不应5%99.599.5) )或对照品考察方法或对照品考察方法的精密度，相对标准差：的精密度，相对标准差：0.20.2；回收率：；回收率：99.799.7100.3100.3。 UVUV法法用适当浓度的精制品进行测定，用适当浓度的精制品进行测定，RSDRSD1 1；制剂的；制剂的测定，回收率：测定，回收率：9898102102；吸光度；吸光度A A：0.20.20.70.7；浓度点：；浓度点：n n5 5。用浓度。用浓度c c 对对A A 作线性回归处作线性回归处理，得一直线方程，理，得一直线方程，r

43、 r0.999(0.999(n n5)5)，方程截距，方程截距应近零。应近零。各种含量测定方法对效能指标的要求各种含量测定方法对效能指标的要求 HPLCHPLC法法RSD2RSD0.9990.999，截距应趋于零，截距应趋于零; ;专属性：要考查辅料、有关物质或降解产物对主专属性：要考查辅料、有关物质或降解产物对主药的色谱峰是否有干扰，如有干扰应设法排除药的色谱峰是否有干扰，如有干扰应设法排除. .各种含量测定方法对效能指标的要求（续）各种含量测定方法对效能指标的要求（续）1.1.精密度是指（）精密度是指（）A.A.测得的测量值与真值接近的程度测得的测量值与真值接近的程度B.B.测得的一组测量

44、值彼此符合的程度测得的一组测量值彼此符合的程度C.C.表示该法测量的正确性表示该法测量的正确性D.D.在各种正常试验条件下，对同一样品分在各种正常试验条件下，对同一样品分析所得结果的准确程度析所得结果的准确程度E.E.对供试物准确而专属的测定能力对供试物准确而专属的测定能力自测题自测题2.2.药物杂质检查所要求的效能指标为（）药物杂质检查所要求的效能指标为（） A. A. 准确度准确度 B. B. 精密度精密度 C C选择性选择性 D. D. 检测限检测限 E. E. 耐用性耐用性 3.3.精密度的一般表示方法有精密度的一般表示方法有( ( ) )3.3.A. A. 相对标准差相对标准差4.4

45、.B. B. 相对平均偏差相对平均偏差5.5.C. C. 相对误差相对误差6.6.D. D. 绝对误差绝对误差7.7.E. E. 标准差标准差 4.4.检测限的表示方法有（）检测限的表示方法有（）4.4.A. A. 百分数百分数 5.5.B. ppmB. ppm 6.6.C. ppbC. ppb7.7.D. D. g g 8.8.E. ngE. ng5.5.用信噪比法表示检测限时，信噪比一用信噪比法表示检测限时，信噪比一般应为（）般应为（）A. 1A. 11 1 B. 3B. 31 1C. 4C. 41 1 D. 5D. 51 16.6.用碘量法测定维生素用碘量法测定维生素C C原料药时，要原

46、料药时，要求碘量法应具备（）求碘量法应具备（）A. A. 选择性选择性 B. B. 定量限定量限C. C. 精密度精密度 D. D. 检测限检测限E. E. 线性线性7.7.测定药物片剂的溶出度或释放度时，测定药物片剂的溶出度或释放度时，对所用测定方法应要求对所用测定方法应要求( ( ) )A. A. 精密度精密度 B. B. 定量限定量限C. C. 耐用性耐用性 D. D. 回收率回收率E. E. 检测限检测限 8.8.药物鉴别试验所要求的效能指标（）药物鉴别试验所要求的效能指标（）A. A. 准确度准确度B. B. 精密度精密度C. C. 选择性选择性D. D. 检测限检测限E. E. 耐

47、用性耐用性第四节第四节 生物样品分析方法的基本要求生物样品分析方法的基本要求一、常用样品的种类、采集和贮藏一、常用样品的种类、采集和贮藏生物样品包括各种体液和组织。在体内药物生物样品包括各种体液和组织。在体内药物分析中常用的是血液、尿液和唾液。分析中常用的是血液、尿液和唾液。1. 血样血样包括血浆、血清和全血。其中血浆（包括血浆、血清和全血。其中血浆（plasmaplasma）和）和血清（血清（serumserum）为常用生物样品。）为常用生物样品。测定血中的药物浓度通常是指测定血浆或血清中测定血中的药物浓度通常是指测定血浆或血清中的药物浓度，而非全血中的药物浓度。的药物浓度，而非全血中的药物

48、浓度。供测定用血样的采集：供测定用血样的采集：动物实验时，可从动脉或动物实验时，可从动脉或心脏取血；对与患者或志愿者，采取静脉血（或心脏取血；对与患者或志愿者，采取静脉血（或用毛细管采血）。用毛细管采血）。血浆的制备：血浆的制备：将采取全血置于含有抗凝剂（如肝将采取全血置于含有抗凝剂（如肝素、草酸盐、素、草酸盐、EDTAEDTA等）的试管中，混匀后，以等）的试管中，混匀后，以250025003000r/min3000r/min离心离心5min5min使血浆与血细胞分离，使血浆与血细胞分离，上清液为血浆。上清液为血浆。血清的制备：血清的制备：将采取全血在室温下放置将采取全血在室温下放置0.50.

49、51 1小小时，待血液凝固后，用细玻棒剥离血饼，以时，待血液凝固后，用细玻棒剥离血饼，以200020003000r/min3000r/min离心离心5 510min10min，上清液为血清。，上清液为血清。药物与纤维蛋白几乎不结合，血浆与血清中的药药物与纤维蛋白几乎不结合，血浆与血清中的药物浓度测定值通常是相同的。但血浆比血清分离物浓度测定值通常是相同的。但血浆比血清分离快，且制取的量多，所以血浆较血清更常用。快，且制取的量多，所以血浆较血清更常用。血样采取后，应及时分离血浆或血清，并立即进血样采取后，应及时分离血浆或血清，并立即进行分析。如不能立即测定，应置于具塞硬质玻璃行分析。如不能立即测

50、定，应置于具塞硬质玻璃管或聚乙烯塑料离心管中密塞保存。管或聚乙烯塑料离心管中密塞保存。短期保存时，可置于冰箱冷藏（短期保存时，可置于冰箱冷藏（4 4C C）；长期保）；长期保存需在存需在-20-20C C或或-80-80C C下冷冻贮藏。下冷冻贮藏。2. 唾液唾液由腮腺、额下腺、舌下腺和口腔粘膜内腺体分泌由腮腺、额下腺、舌下腺和口腔粘膜内腺体分泌液混合组成的。口腔粘膜受化学刺激，各唾液腺液混合组成的。口腔粘膜受化学刺激，各唾液腺的分泌会受到影响，造成唾液组成发生较大变化。的分泌会受到影响，造成唾液组成发生较大变化。唾液的采集：唾液的采集：在安静状态下进行，漱口后在安静状态下进行，漱口后1515

51、分钟分钟收集；采集后立即除去泡沫，并以收集；采集后立即除去泡沫，并以3000r/min3000r/min离离心心1010分钟，取上清液分析。分钟，取上清液分析。若分泌量少，可转动舌尖促进唾液分泌，也可采若分泌量少，可转动舌尖促进唾液分泌，也可采用物理的（如嚼石蜡）或化学的（如酒石酸）方用物理的（如嚼石蜡）或化学的（如酒石酸）方法刺激。但经刺激后唾液中的药物浓度会受影响。法刺激。但经刺激后唾液中的药物浓度会受影响。唾液采集后，应在唾液采集后，应在4 4C以下保存。以下保存。3. 尿液尿液其主要成分：其主要成分：水、含氮化合物（大部分为尿素）水、含氮化合物（大部分为尿素）及盐类。及盐类。体内药物（

52、原型或代谢物及其缀合物）的清除主体内药物（原型或代谢物及其缀合物）的清除主要通过尿液排出。要通过尿液排出。尿液中药物浓度高，采集方便、且采集量大。但尿液中药物浓度高，采集方便、且采集量大。但尿液浓度变化较大尿液浓度变化较大。尿液中药物浓度的改变不能。尿液中药物浓度的改变不能直接反应血药中的浓度。直接反应血药中的浓度。尿液测定主要用于药物剂量回收，尿清除率、生尿液测定主要用于药物剂量回收，尿清除率、生物利用度、以及药物代谢及其代谢途径、类型、物利用度、以及药物代谢及其代谢途径、类型、速率等的研究。速率等的研究。采集的尿液是自然排尿。采集的尿液是自然排尿。测定尿中药物的总量时，应收集用药后的一定时

53、测定尿中药物的总量时，应收集用药后的一定时间内（如间内（如8h8h、12h12h或或24h24h）排泄的全部尿液，记录）排泄的全部尿液，记录体积后，量取一部分用于药物浓度的测定，在乘体积后，量取一部分用于药物浓度的测定，在乘以尿量求得排泄总量。以尿量求得排泄总量。肾功能不良者不宜采集尿样。肾功能不良者不宜采集尿样。尿液采集后应立即测定，否则应加入防腐剂后置尿液采集后应立即测定，否则应加入防腐剂后置于冰箱中保存。于冰箱中保存。常用防腐剂：常用防腐剂：甲苯、二甲苯、三氯甲烷，以及醋甲苯、二甲苯、三氯甲烷，以及醋酸、盐酸等。酸、盐酸等。二、生物样品分析前处理技术二、生物样品分析前处理技术生物样品的前

54、处理应主要考虑生物样品的种生物样品的前处理应主要考虑生物样品的种类、被测药物的性质和所采用的测定方法。类、被测药物的性质和所采用的测定方法。依据生物样品类型：依据生物样品类型：l 血浆或血清需除蛋白，使药物从蛋白结合物血浆或血清需除蛋白，使药物从蛋白结合物中释出。中释出。l 唾液样品应采用离心去除粘蛋白。唾液样品应采用离心去除粘蛋白。l 尿液样品常采用酸或酶水解药物使从缀和物尿液样品常采用酸或酶水解药物使从缀和物中释出。中释出。 依据被测药物的结构及性质，以及存在形式：依据被测药物的结构及性质，以及存在形式：l 药物的酸碱性与溶解性涉及药物的萃取手段。药物的酸碱性与溶解性涉及药物的萃取手段。l

55、 是否具有挥发性涉及能否采用气相色谱法测是否具有挥发性涉及能否采用气相色谱法测定。定。l 光谱特性及官能团性质涉及是否需要制成衍光谱特性及官能团性质涉及是否需要制成衍生物。生物。l 浓度大的样品对前处理要求低，浓度大的样品对前处理要求低，浓度越低的浓度越低的样品对前处理要求越高，样品对前处理要求越高， 依据所采用的测定方法：依据所采用的测定方法：l 纯化程度与所采用的测定方法的专属性、检纯化程度与所采用的测定方法的专属性、检测系统对不纯样品污染的程度密切相关。测系统对不纯样品污染的程度密切相关。l 放射免疫测定法具有较高的灵敏度和专属性，放射免疫测定法具有较高的灵敏度和专属性，生物样品只需经初

56、步处理除去主要干扰物即生物样品只需经初步处理除去主要干扰物即可测定。可测定。l 高效液相色谱法要求除去生物样品中的蛋白高效液相色谱法要求除去生物样品中的蛋白质，以防止蛋白质等物质在色谱柱上沉积。质，以防止蛋白质等物质在色谱柱上沉积。1. 蛋白质的去除蛋白质的去除原因：原因：l 除去蛋白质可使蛋白质结合型的药物释放出除去蛋白质可使蛋白质结合型的药物释放出来。来。l 避免溶剂萃取过程中的乳化现象。避免溶剂萃取过程中的乳化现象。l 保护仪器性能（如保护保护仪器性能（如保护HPLCHPLC柱不被玷污），柱不被玷污），延长使用寿命。延长使用寿命。2.2. 方法：方法： 加入与水混融的有机溶剂加入与水混融

57、的有机溶剂l 有机溶剂有机溶剂使蛋白质凝聚，释放与之结合的使蛋白质凝聚，释放与之结合的药物。药物。l 常用有机溶剂：乙腈、甲醇、丙酮、四氢常用有机溶剂：乙腈、甲醇、丙酮、四氢呋喃。呋喃。l 含药物的血浆与有机溶剂的体积为含药物的血浆与有机溶剂的体积为1:1:(1(13)3)时，可除去时，可除去90%90%以上的蛋白质。以上的蛋白质。 加入中性盐加入中性盐l 中性盐中性盐使溶液离子强度发生变化，将与蛋使溶液离子强度发生变化，将与蛋白质结合的水置换出来，使蛋白质脱水而白质结合的水置换出来，使蛋白质脱水而沉淀。沉淀。l 常用中性盐：饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、常用中性盐：饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷酸

58、盐及枸橼酸盐磷酸盐及枸橼酸盐 加入强酸加入强酸l 当溶液的当溶液的pHpH低于蛋白质的等电点时，以阳低于蛋白质的等电点时，以阳离子形式存在的蛋白质可与酸根离子形成离子形式存在的蛋白质可与酸根离子形成不溶性盐而沉淀析出。不溶性盐而沉淀析出。l 含药物血清与强酸比例为含药物血清与强酸比例为1:0.61:0.6混合，可除混合，可除去去90%90%以上蛋白质。以上蛋白质。l 常用强酸：常用强酸：10%10%三氯醋酸、三氯醋酸、65%65%高氯酸、高氯酸、5%5%偏磷酸。偏磷酸。l 过量的三氯醋酸经加热分解为三氯甲烷和过量的三氯醋酸经加热分解为三氯甲烷和二氧化碳而除去。二氧化碳而除去。l 过量的高氯酸可

59、用碳酸钾、醋酸钾、氢氧过量的高氯酸可用碳酸钾、醋酸钾、氢氧化钠等中和后，加乙醇使之生成高氯酸钾化钠等中和后，加乙醇使之生成高氯酸钾（或钠）沉淀除去。偏磷酸可用同法去除。（或钠）沉淀除去。偏磷酸可用同法去除。 加入含锌盐及铜盐的沉淀剂加入含锌盐及铜盐的沉淀剂l 当当pH高于蛋白质的等电点时，蛋白质分子高于蛋白质的等电点时，蛋白质分子中带负电荷的羧基与金属阳离子形成不溶中带负电荷的羧基与金属阳离子形成不溶性盐而沉淀性盐而沉淀。l 含药物血清与沉淀剂比例为含药物血清与沉淀剂比例为1:21:2混合。混合。l 常用沉淀剂：常用沉淀剂：CuSOCuSO4 4-Na-Na2 2WOWO4 4、ZnSOZnS

60、O4 4-NaOH-NaOH。 酶解法酶解法l 测定某些与蛋白质结合牢固、且对酸不稳测定某些与蛋白质结合牢固、且对酸不稳定的药物时，需用酶解法使蛋白质分解而定的药物时，需用酶解法使蛋白质分解而释放出药物。释放出药物。l 常用酶：枯草菌溶素（适用常用酶：枯草菌溶素（适用pHpH：7.07.011.011.0，温度：温度：50506060C ）。）。2. 缀合物的水解缀合物的水解原因：原因：l 含羟基、羧基、氨基和巯基的药物可与内源含羟基、羧基、氨基和巯基的药物可与内源性物质葡萄糖醛酸或硫酸形成葡萄糖酸酐或性物质葡萄糖醛酸或硫酸形成葡萄糖酸酐或硫酸酯缀合物。硫酸酯缀合物。l 缀合物较原型药物具有较

61、大的极性，不易被缀合物较原型药物具有较大的极性，不易被有机溶剂萃取。有机溶剂萃取。l 尿中药物多数呈缀合物状态，测定之前，需尿中药物多数呈缀合物状态，测定之前，需将缀合物中的药物释放出来。将缀合物中的药物释放出来。方法：方法：l 酸水解：加入适量的盐酸溶液进行水解。酸水解：加入适量的盐酸溶液进行水解。l 酶水解酶水解 遇酸及受热不稳定的药物，可用酶水解；遇酸及受热不稳定的药物，可用酶水解； 酶水解具有较高的选择性、很少使被测药酶水解具有较高的选择性、很少使被测药物发生降解，常被优先采用；物发生降解，常被优先采用； 常用葡萄酸酐酶或硫酸酯酶或二者混合物；常用葡萄酸酐酶或硫酸酯酶或二者混合物； 但

62、酶水解时间长、酶制剂带入的粘液蛋白但酶水解时间长、酶制剂带入的粘液蛋白可能导致乳化及污染色谱柱。可能导致乳化及污染色谱柱。3. 有机破坏有机破坏l 生物样品中的金属离子常与蛋白结合且难以生物样品中的金属离子常与蛋白结合且难以用溶剂萃取，同时金属离子可耐受高温。用溶剂萃取，同时金属离子可耐受高温。l 测定生物样品中金属离子时，多采用有机破测定生物样品中金属离子时，多采用有机破坏方法进行前处理。坏方法进行前处理。l 常用常用HNOHNO3 3-HClO-HClO4 4作为消解剂，其破坏能力强，作为消解剂，其破坏能力强，适用与各种生物样品。所得金属离子一般为适用与各种生物样品。所得金属离子一般为高价

63、态。高价态。l 仪器常用硅玻璃和磞玻璃制成的凯氏烧瓶。仪器常用硅玻璃和磞玻璃制成的凯氏烧瓶。4. 分离、纯化与浓集分离、纯化与浓集生物样品中的药物浓度较低或分析方法的特异性生物样品中的药物浓度较低或分析方法的特异性或灵敏度不够高时，生物样品需进行分离、纯化或灵敏度不够高时，生物样品需进行分离、纯化与浓集处理。与浓集处理。 液液- -液萃取法液萃取法l 多数药物是亲酯性的，而血样或尿样中的多数药物是亲酯性的，而血样或尿样中的多数内源性干扰物是强极性的水溶性物质。多数内源性干扰物是强极性的水溶性物质。有机溶剂萃取可去除大部分干扰物。有机溶剂萃取可去除大部分干扰物。l 有机溶剂的要求：对被测药物的溶

64、解度大、有机溶剂的要求：对被测药物的溶解度大、沸点低、易于挥发浓集、与水不相混溶、沸点低、易于挥发浓集、与水不相混溶、无毒、不易乳化。无毒、不易乳化。l 常用有机溶剂：乙醚和三氯甲烷常用有机溶剂：乙醚和三氯甲烷l 有机溶剂相与水相的容积比为有机溶剂相与水相的容积比为1:11:1或或2:12:1。l 多数药物是亲酯性的碱性物质，而生物样多数药物是亲酯性的碱性物质，而生物样品中的内源性物质多数是酸性的，生物样品中的内源性物质多数是酸性的，生物样品中的药物一般在碱性下萃取。品中的药物一般在碱性下萃取。l 对碱性对碱性pHpH不稳定的药物，可在近中性不稳定的药物，可在近中性pHpH处处用三氯甲烷和异丙

65、醇萃取。用三氯甲烷和异丙醇萃取。l 中性药物则在中性药物则在pH=7pH=7附近萃取。附近萃取。 液液- -固萃取法固萃取法将具有吸附、分配及离子交换性质的、表面将具有吸附、分配及离子交换性质的、表面积大的担体作为萃取剂填入小柱，以溶剂淋积大的担体作为萃取剂填入小柱，以溶剂淋洗后，将生物样品通过，使其药物或内源性洗后，将生物样品通过，使其药物或内源性干扰物保留在担体上，用适当的溶剂洗去干干扰物保留在担体上，用适当的溶剂洗去干扰物后，再用适当的溶剂将药物洗脱下来。扰物后，再用适当的溶剂将药物洗脱下来。 优点：较少引入杂质、消除了乳化现象、萃优点：较少引入杂质、消除了乳化现象、萃取效率高、处理样品

66、速度快，在室温下操作、取效率高、处理样品速度快，在室温下操作、适于处理挥发性及对热不稳定的药物。适于处理挥发性及对热不稳定的药物。担体：亲水性的硅藻土、疏水性的活性炭、担体：亲水性的硅藻土、疏水性的活性炭、聚苯乙烯或聚苯乙烯或C C1818化学键合硅胶。化学键合硅胶。 浓集浓集a.a. 末次少量溶剂萃取法末次少量溶剂萃取法在末次萃取时加入的萃取液尽量少，使被在末次萃取时加入的萃取液尽量少，使被测组分萃取到小体积溶剂中，然后直接吸测组分萃取到小体积溶剂中，然后直接吸取适量供测定。取适量供测定。b.b. 挥发萃取溶剂法。挥发萃取溶剂法。l 避免直接加热，防止被测组分破坏或挥避免直接加热，防止被测组分破坏或挥发损失。发损失。l 挥发萃取溶剂的常用方法是直接通入氮挥发萃取溶剂的常用方法是直接通入氮气流吹干。气流吹干。l 对与易随气流挥发或遇热不稳定的药物，对与易随气流挥发或遇热不稳定的药物，可用减压法挥发溶剂。可用减压法挥发溶剂。l 溶剂蒸发所用试管，底部应为尖锥形，溶剂蒸发所用试管，底部应为尖锥形，便于最终量取。便于最终量取。5. 化学衍生化化学衍生化药物中含有活泼药物中含有活泼H H者（如