鹌鹑蛋清溶菌酶的分离纯化及其性质研究
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1、临床兽医学专业毕业论文 精品论文 鹌鹑蛋清溶菌酶的分离纯化及其性质研究关键词:鹌鹑蛋清 溶菌酶 分离纯化 体外抗茵活性摘要:为了更进一步了解蛋清溶菌酶的性质,本试验利用CM Sepharose FF阳离子交换柱层析和Sephadex G-75凝胶层析对鹌鹑蛋清溶菌酶进行分离纯化,结果表明,分离纯化效果比较理想,峰之间区分非常明显,纯化过程中阳离子交换柱层析纯化效果最为明显,纯度提高了25.9倍,去除了大部分杂蛋白,最终溶菌酶经纯化比活达到14821.5U/mg,纯度提高了29.0倍,活力回收率为38。 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及温度、pH值、常见金属离子对鹌鹑蛋清溶菌
2、酶进行鉴定和性质研究,电泳结果显示均见单一务带,表明该溶菌酶已达到电泳纯,其分子量约为16000Da。该酶在1020其活性较低,30活性最高,4060活性下降,这表明该酶最适温度为30左右。在pH67近中性环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶活性最强,在偏酸性(pH<6.0)和偏碱性(pH>7.5)的环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶的活性降低。Zn2+、Cu2+对该酶有激活作用,Mn2+和Ag+对该酶有抑制作用,Ba2+、Ca2+、Fe3+、Na+等对该酶活性没有显著影响。 对鹌鹑蛋清溶菌酶进行体外抗菌活性的研究,研究其抑菌谱、最小抑菌浓度,同时应用透射电镜研究其抑菌机制,结果表明,鹌鹑蛋
3、清溶菌酶对革兰氏阳性菌有抑菌的作用,如金黄色葡萄球菌,枯草杆菌抑菌效果显著,对部分革兰氏阴性菌有抑菌作用,如嗜水气单胞菌、鳗弧菌也有不同程度的抑制,对大肠杆菌,耶尔森菌抑菌作用不明显。对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌,嗜水气单胞菌,鳗弧菌最小抑菌浓度分别为125,250,500,500g/mL。透射电镜观察,鹌鹑蛋清溶菌酶可使金黄色葡萄球菌细胞质不均匀,细胞壁变薄,内容物外流而死亡。正文内容 为了更进一步了解蛋清溶菌酶的性质,本试验利用CM Sepharose FF阳离子交换柱层析和Sephadex G-75凝胶层析对鹌鹑蛋清溶菌酶进行分离纯化,结果表明,分离纯化效果比较理想,峰之间区分非常明显,纯
4、化过程中阳离子交换柱层析纯化效果最为明显,纯度提高了25.9倍,去除了大部分杂蛋白,最终溶菌酶经纯化比活达到14821.5U/mg,纯度提高了29.0倍,活力回收率为38。 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及温度、pH值、常见金属离子对鹌鹑蛋清溶菌酶进行鉴定和性质研究,电泳结果显示均见单一务带,表明该溶菌酶已达到电泳纯,其分子量约为16000Da。该酶在1020其活性较低,30活性最高,4060活性下降,这表明该酶最适温度为30左右。在pH67近中性环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶活性最强,在偏酸性(pH<6.0)和偏碱性(pH>7.5)的环境中,鹌鹑蛋清溶
5、菌酶的活性降低。Zn2+、Cu2+对该酶有激活作用,Mn2+和Ag+对该酶有抑制作用,Ba2+、Ca2+、Fe3+、Na+等对该酶活性没有显著影响。 对鹌鹑蛋清溶菌酶进行体外抗菌活性的研究,研究其抑菌谱、最小抑菌浓度,同时应用透射电镜研究其抑菌机制,结果表明,鹌鹑蛋清溶菌酶对革兰氏阳性菌有抑菌的作用,如金黄色葡萄球菌,枯草杆菌抑菌效果显著,对部分革兰氏阴性菌有抑菌作用,如嗜水气单胞菌、鳗弧菌也有不同程度的抑制,对大肠杆菌,耶尔森菌抑菌作用不明显。对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌,嗜水气单胞菌,鳗弧菌最小抑菌浓度分别为125,250,500,500g/mL。透射电镜观察,鹌鹑蛋清溶菌酶可使金黄色葡萄球
6、菌细胞质不均匀,细胞壁变薄,内容物外流而死亡。为了更进一步了解蛋清溶菌酶的性质,本试验利用CM Sepharose FF阳离子交换柱层析和Sephadex G-75凝胶层析对鹌鹑蛋清溶菌酶进行分离纯化,结果表明,分离纯化效果比较理想,峰之间区分非常明显,纯化过程中阳离子交换柱层析纯化效果最为明显,纯度提高了25.9倍,去除了大部分杂蛋白,最终溶菌酶经纯化比活达到14821.5U/mg,纯度提高了29.0倍,活力回收率为38。 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及温度、pH值、常见金属离子对鹌鹑蛋清溶菌酶进行鉴定和性质研究,电泳结果显示均见单一务带,表明该溶菌酶已达到电泳纯,其分
7、子量约为16000Da。该酶在1020其活性较低,30活性最高,4060活性下降,这表明该酶最适温度为30左右。在pH67近中性环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶活性最强,在偏酸性(pH<6.0)和偏碱性(pH>7.5)的环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶的活性降低。Zn2+、Cu2+对该酶有激活作用,Mn2+和Ag+对该酶有抑制作用,Ba2+、Ca2+、Fe3+、Na+等对该酶活性没有显著影响。 对鹌鹑蛋清溶菌酶进行体外抗菌活性的研究,研究其抑菌谱、最小抑菌浓度,同时应用透射电镜研究其抑菌机制,结果表明,鹌鹑蛋清溶菌酶对革兰氏阳性菌有抑菌的作用,如金黄色葡萄球菌,枯草杆菌抑菌效果显著,对
8、部分革兰氏阴性菌有抑菌作用,如嗜水气单胞菌、鳗弧菌也有不同程度的抑制,对大肠杆菌,耶尔森菌抑菌作用不明显。对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌,嗜水气单胞菌,鳗弧菌最小抑菌浓度分别为125,250,500,500g/mL。透射电镜观察,鹌鹑蛋清溶菌酶可使金黄色葡萄球菌细胞质不均匀,细胞壁变薄,内容物外流而死亡。为了更进一步了解蛋清溶菌酶的性质,本试验利用CM Sepharose FF阳离子交换柱层析和Sephadex G-75凝胶层析对鹌鹑蛋清溶菌酶进行分离纯化,结果表明,分离纯化效果比较理想,峰之间区分非常明显,纯化过程中阳离子交换柱层析纯化效果最为明显,纯度提高了25.9倍,去除了大部分杂蛋白,最终
9、溶菌酶经纯化比活达到14821.5U/mg,纯度提高了29.0倍,活力回收率为38。 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及温度、pH值、常见金属离子对鹌鹑蛋清溶菌酶进行鉴定和性质研究,电泳结果显示均见单一务带,表明该溶菌酶已达到电泳纯,其分子量约为16000Da。该酶在1020其活性较低,30活性最高,4060活性下降,这表明该酶最适温度为30左右。在pH67近中性环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶活性最强,在偏酸性(pH<6.0)和偏碱性(pH>7.5)的环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶的活性降低。Zn2+、Cu2+对该酶有激活作用,Mn2+和Ag+对该酶有抑制作用,B
10、a2+、Ca2+、Fe3+、Na+等对该酶活性没有显著影响。 对鹌鹑蛋清溶菌酶进行体外抗菌活性的研究,研究其抑菌谱、最小抑菌浓度,同时应用透射电镜研究其抑菌机制,结果表明,鹌鹑蛋清溶菌酶对革兰氏阳性菌有抑菌的作用,如金黄色葡萄球菌,枯草杆菌抑菌效果显著,对部分革兰氏阴性菌有抑菌作用,如嗜水气单胞菌、鳗弧菌也有不同程度的抑制,对大肠杆菌,耶尔森菌抑菌作用不明显。对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌,嗜水气单胞菌,鳗弧菌最小抑菌浓度分别为125,250,500,500g/mL。透射电镜观察,鹌鹑蛋清溶菌酶可使金黄色葡萄球菌细胞质不均匀,细胞壁变薄,内容物外流而死亡。为了更进一步了解蛋清溶菌酶的性质,本试验利
11、用CM Sepharose FF阳离子交换柱层析和Sephadex G-75凝胶层析对鹌鹑蛋清溶菌酶进行分离纯化,结果表明,分离纯化效果比较理想,峰之间区分非常明显,纯化过程中阳离子交换柱层析纯化效果最为明显,纯度提高了25.9倍,去除了大部分杂蛋白,最终溶菌酶经纯化比活达到14821.5U/mg,纯度提高了29.0倍,活力回收率为38。 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及温度、pH值、常见金属离子对鹌鹑蛋清溶菌酶进行鉴定和性质研究,电泳结果显示均见单一务带,表明该溶菌酶已达到电泳纯,其分子量约为16000Da。该酶在1020其活性较低,30活性最高,4060活性下降,这表明
12、该酶最适温度为30左右。在pH67近中性环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶活性最强,在偏酸性(pH<6.0)和偏碱性(pH>7.5)的环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶的活性降低。Zn2+、Cu2+对该酶有激活作用,Mn2+和Ag+对该酶有抑制作用,Ba2+、Ca2+、Fe3+、Na+等对该酶活性没有显著影响。 对鹌鹑蛋清溶菌酶进行体外抗菌活性的研究,研究其抑菌谱、最小抑菌浓度,同时应用透射电镜研究其抑菌机制,结果表明,鹌鹑蛋清溶菌酶对革兰氏阳性菌有抑菌的作用,如金黄色葡萄球菌,枯草杆菌抑菌效果显著,对部分革兰氏阴性菌有抑菌作用,如嗜水气单胞菌、鳗弧菌也有不同程度的抑制,对大肠杆菌,耶尔森
13、菌抑菌作用不明显。对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌,嗜水气单胞菌,鳗弧菌最小抑菌浓度分别为125,250,500,500g/mL。透射电镜观察,鹌鹑蛋清溶菌酶可使金黄色葡萄球菌细胞质不均匀,细胞壁变薄,内容物外流而死亡。为了更进一步了解蛋清溶菌酶的性质,本试验利用CM Sepharose FF阳离子交换柱层析和Sephadex G-75凝胶层析对鹌鹑蛋清溶菌酶进行分离纯化,结果表明,分离纯化效果比较理想,峰之间区分非常明显,纯化过程中阳离子交换柱层析纯化效果最为明显,纯度提高了25.9倍,去除了大部分杂蛋白,最终溶菌酶经纯化比活达到14821.5U/mg,纯度提高了29.0倍,活力回收率为38。 采
14、用聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及温度、pH值、常见金属离子对鹌鹑蛋清溶菌酶进行鉴定和性质研究,电泳结果显示均见单一务带,表明该溶菌酶已达到电泳纯,其分子量约为16000Da。该酶在1020其活性较低,30活性最高,4060活性下降,这表明该酶最适温度为30左右。在pH67近中性环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶活性最强,在偏酸性(pH<6.0)和偏碱性(pH>7.5)的环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶的活性降低。Zn2+、Cu2+对该酶有激活作用,Mn2+和Ag+对该酶有抑制作用,Ba2+、Ca2+、Fe3+、Na+等对该酶活性没有显著影响。 对鹌鹑蛋清溶菌酶进行体外抗
15、菌活性的研究,研究其抑菌谱、最小抑菌浓度,同时应用透射电镜研究其抑菌机制,结果表明,鹌鹑蛋清溶菌酶对革兰氏阳性菌有抑菌的作用,如金黄色葡萄球菌,枯草杆菌抑菌效果显著,对部分革兰氏阴性菌有抑菌作用,如嗜水气单胞菌、鳗弧菌也有不同程度的抑制,对大肠杆菌,耶尔森菌抑菌作用不明显。对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌,嗜水气单胞菌,鳗弧菌最小抑菌浓度分别为125,250,500,500g/mL。透射电镜观察,鹌鹑蛋清溶菌酶可使金黄色葡萄球菌细胞质不均匀,细胞壁变薄,内容物外流而死亡。为了更进一步了解蛋清溶菌酶的性质,本试验利用CM Sepharose FF阳离子交换柱层析和Sephadex G-75凝胶层析对鹌
16、鹑蛋清溶菌酶进行分离纯化,结果表明,分离纯化效果比较理想,峰之间区分非常明显,纯化过程中阳离子交换柱层析纯化效果最为明显,纯度提高了25.9倍,去除了大部分杂蛋白,最终溶菌酶经纯化比活达到14821.5U/mg,纯度提高了29.0倍,活力回收率为38。 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及温度、pH值、常见金属离子对鹌鹑蛋清溶菌酶进行鉴定和性质研究,电泳结果显示均见单一务带,表明该溶菌酶已达到电泳纯,其分子量约为16000Da。该酶在1020其活性较低,30活性最高,4060活性下降,这表明该酶最适温度为30左右。在pH67近中性环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶活性最强,在偏酸性(pH&
17、amp;lt;6.0)和偏碱性(pH>7.5)的环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶的活性降低。Zn2+、Cu2+对该酶有激活作用,Mn2+和Ag+对该酶有抑制作用,Ba2+、Ca2+、Fe3+、Na+等对该酶活性没有显著影响。 对鹌鹑蛋清溶菌酶进行体外抗菌活性的研究,研究其抑菌谱、最小抑菌浓度,同时应用透射电镜研究其抑菌机制,结果表明,鹌鹑蛋清溶菌酶对革兰氏阳性菌有抑菌的作用,如金黄色葡萄球菌,枯草杆菌抑菌效果显著,对部分革兰氏阴性菌有抑菌作用,如嗜水气单胞菌、鳗弧菌也有不同程度的抑制,对大肠杆菌,耶尔森菌抑菌作用不明显。对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌,嗜水气单胞菌,鳗弧菌最小抑菌浓度分别为12
18、5,250,500,500g/mL。透射电镜观察,鹌鹑蛋清溶菌酶可使金黄色葡萄球菌细胞质不均匀,细胞壁变薄,内容物外流而死亡。为了更进一步了解蛋清溶菌酶的性质,本试验利用CM Sepharose FF阳离子交换柱层析和Sephadex G-75凝胶层析对鹌鹑蛋清溶菌酶进行分离纯化,结果表明,分离纯化效果比较理想,峰之间区分非常明显,纯化过程中阳离子交换柱层析纯化效果最为明显,纯度提高了25.9倍,去除了大部分杂蛋白,最终溶菌酶经纯化比活达到14821.5U/mg,纯度提高了29.0倍,活力回收率为38。 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及温度、pH值、常见金属离子对鹌鹑蛋清溶
19、菌酶进行鉴定和性质研究,电泳结果显示均见单一务带,表明该溶菌酶已达到电泳纯,其分子量约为16000Da。该酶在1020其活性较低,30活性最高,4060活性下降,这表明该酶最适温度为30左右。在pH67近中性环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶活性最强,在偏酸性(pH<6.0)和偏碱性(pH>7.5)的环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶的活性降低。Zn2+、Cu2+对该酶有激活作用,Mn2+和Ag+对该酶有抑制作用,Ba2+、Ca2+、Fe3+、Na+等对该酶活性没有显著影响。 对鹌鹑蛋清溶菌酶进行体外抗菌活性的研究,研究其抑菌谱、最小抑菌浓度,同时应用透射电镜研究其抑菌机制,结果表明,鹌鹑
20、蛋清溶菌酶对革兰氏阳性菌有抑菌的作用,如金黄色葡萄球菌,枯草杆菌抑菌效果显著,对部分革兰氏阴性菌有抑菌作用,如嗜水气单胞菌、鳗弧菌也有不同程度的抑制,对大肠杆菌,耶尔森菌抑菌作用不明显。对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌,嗜水气单胞菌,鳗弧菌最小抑菌浓度分别为125,250,500,500g/mL。透射电镜观察,鹌鹑蛋清溶菌酶可使金黄色葡萄球菌细胞质不均匀,细胞壁变薄,内容物外流而死亡。为了更进一步了解蛋清溶菌酶的性质,本试验利用CM Sepharose FF阳离子交换柱层析和Sephadex G-75凝胶层析对鹌鹑蛋清溶菌酶进行分离纯化,结果表明,分离纯化效果比较理想,峰之间区分非常明显,纯化过程中
21、阳离子交换柱层析纯化效果最为明显,纯度提高了25.9倍,去除了大部分杂蛋白,最终溶菌酶经纯化比活达到14821.5U/mg,纯度提高了29.0倍,活力回收率为38。 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及温度、pH值、常见金属离子对鹌鹑蛋清溶菌酶进行鉴定和性质研究,电泳结果显示均见单一务带,表明该溶菌酶已达到电泳纯,其分子量约为16000Da。该酶在1020其活性较低,30活性最高,4060活性下降,这表明该酶最适温度为30左右。在pH67近中性环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶活性最强,在偏酸性(pH<6.0)和偏碱性(pH>7.5)的环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶的活
22、性降低。Zn2+、Cu2+对该酶有激活作用,Mn2+和Ag+对该酶有抑制作用,Ba2+、Ca2+、Fe3+、Na+等对该酶活性没有显著影响。 对鹌鹑蛋清溶菌酶进行体外抗菌活性的研究,研究其抑菌谱、最小抑菌浓度,同时应用透射电镜研究其抑菌机制,结果表明,鹌鹑蛋清溶菌酶对革兰氏阳性菌有抑菌的作用,如金黄色葡萄球菌,枯草杆菌抑菌效果显著,对部分革兰氏阴性菌有抑菌作用,如嗜水气单胞菌、鳗弧菌也有不同程度的抑制,对大肠杆菌,耶尔森菌抑菌作用不明显。对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌,嗜水气单胞菌,鳗弧菌最小抑菌浓度分别为125,250,500,500g/mL。透射电镜观察,鹌鹑蛋清溶菌酶可使金黄色葡萄球菌细胞质
23、不均匀,细胞壁变薄,内容物外流而死亡。为了更进一步了解蛋清溶菌酶的性质,本试验利用CM Sepharose FF阳离子交换柱层析和Sephadex G-75凝胶层析对鹌鹑蛋清溶菌酶进行分离纯化,结果表明,分离纯化效果比较理想,峰之间区分非常明显,纯化过程中阳离子交换柱层析纯化效果最为明显,纯度提高了25.9倍,去除了大部分杂蛋白,最终溶菌酶经纯化比活达到14821.5U/mg,纯度提高了29.0倍,活力回收率为38。 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及温度、pH值、常见金属离子对鹌鹑蛋清溶菌酶进行鉴定和性质研究,电泳结果显示均见单一务带,表明该溶菌酶已达到电泳纯,其分子量约为
24、16000Da。该酶在1020其活性较低,30活性最高,4060活性下降,这表明该酶最适温度为30左右。在pH67近中性环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶活性最强,在偏酸性(pH<6.0)和偏碱性(pH>7.5)的环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶的活性降低。Zn2+、Cu2+对该酶有激活作用,Mn2+和Ag+对该酶有抑制作用,Ba2+、Ca2+、Fe3+、Na+等对该酶活性没有显著影响。 对鹌鹑蛋清溶菌酶进行体外抗菌活性的研究,研究其抑菌谱、最小抑菌浓度,同时应用透射电镜研究其抑菌机制,结果表明,鹌鹑蛋清溶菌酶对革兰氏阳性菌有抑菌的作用,如金黄色葡萄球菌,枯草杆菌抑菌效果显著,对部分革兰
25、氏阴性菌有抑菌作用,如嗜水气单胞菌、鳗弧菌也有不同程度的抑制,对大肠杆菌,耶尔森菌抑菌作用不明显。对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌,嗜水气单胞菌,鳗弧菌最小抑菌浓度分别为125,250,500,500g/mL。透射电镜观察,鹌鹑蛋清溶菌酶可使金黄色葡萄球菌细胞质不均匀,细胞壁变薄,内容物外流而死亡。为了更进一步了解蛋清溶菌酶的性质,本试验利用CM Sepharose FF阳离子交换柱层析和Sephadex G-75凝胶层析对鹌鹑蛋清溶菌酶进行分离纯化,结果表明,分离纯化效果比较理想,峰之间区分非常明显,纯化过程中阳离子交换柱层析纯化效果最为明显,纯度提高了25.9倍,去除了大部分杂蛋白,最终溶菌酶经
26、纯化比活达到14821.5U/mg,纯度提高了29.0倍,活力回收率为38。 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及温度、pH值、常见金属离子对鹌鹑蛋清溶菌酶进行鉴定和性质研究,电泳结果显示均见单一务带,表明该溶菌酶已达到电泳纯,其分子量约为16000Da。该酶在1020其活性较低,30活性最高,4060活性下降,这表明该酶最适温度为30左右。在pH67近中性环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶活性最强,在偏酸性(pH<6.0)和偏碱性(pH>7.5)的环境中,鹌鹑蛋清溶菌酶的活性降低。Zn2+、Cu2+对该酶有激活作用,Mn2+和Ag+对该酶有抑制作用,Ba2+、
27、Ca2+、Fe3+、Na+等对该酶活性没有显著影响。 对鹌鹑蛋清溶菌酶进行体外抗菌活性的研究,研究其抑菌谱、最小抑菌浓度,同时应用透射电镜研究其抑菌机制,结果表明,鹌鹑蛋清溶菌酶对革兰氏阳性菌有抑菌的作用,如金黄色葡萄球菌,枯草杆菌抑菌效果显著,对部分革兰氏阴性菌有抑菌作用,如嗜水气单胞菌、鳗弧菌也有不同程度的抑制,对大肠杆菌,耶尔森菌抑菌作用不明显。对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌,嗜水气单胞菌,鳗弧菌最小抑菌浓度分别为125,250,500,500g/mL。透射电镜观察,鹌鹑蛋清溶菌酶可使金黄色葡萄球菌细胞质不均匀,细胞壁变薄,内容物外流而死亡。特别提醒:正文内容由PDF文件转码生成,如您电脑未
28、有相应转换码,则无法显示正文内容,请您下载相应软件,下载地址为 。如还不能显示,可以联系我q q 1627550258 ,提供原格式文档。 垐垯櫃换烫梯葺铑?endstreamendobj2x滌?U閩AZ箾FTP鈦X飼?狛P?燚?琯嫼b?袍*甒?颙嫯?4)=r宵?i?j彺帖B3锝檡骹笪yLrQ#?0鯖l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛渓?擗#?#綫G刿#K芿$?7.耟?Wa癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb皗E|?pDb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$Fb癳$F?責鯻0橔C,f薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵秾腵薍秾腵%?秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍G?螪t俐猻覎?烰:X=勢)趯飥?媂s劂/x?矓w豒庘q?唙?鄰爖媧A|Q趗擓蒚?緱鳝嗷P?笄nf(鱂匧叺9就菹$
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