还原糖的测定方法国标

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1、还原糖得测定方法(1)食物中还原糖得测定方法:岛镒酸钾滴定法与直接滴定法。一.高链酸钾滴定法1-0原理鼻 样品经除去貳白质后其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜加硫酸铁后氧化亚铜被氧化为铜盐. 以岛猛酸钾溶液滴定氧化作用后生成得亚铁盐，根据岛镒酸钾消耗虽计算氧化亚同含虽，再査表得还原糖量。儿适用范鬧GB5009. 7 一85木法适用于所有食品中还原糖得测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖得非还原 性糖类物质得测定。3。仪器(1 )滴定管(2) 25ml古氏坦竭或G 4垂融划圳-(3 )真空泵水浴锅4 试剂除特殊说明外实验用水为蒸係水，试剂为分析纯。4.1 6 mol/L盐酸:址収50m

2、l盐酸加水稀释至100 ml。4。2甲基红指示剂:称取10mg甲基红，用10 0ml乙醇溶解。4。3 5 mo 1 /L氢氧化钠溶液:称取20g氢氧化钠加水溶解并稀祥至1 0 Om 1 o 4. 4喊性酒石酸铜 甲液:称収34。639g硫酸铜(CuSO45 H20),加适虽水溶解加0。5ml硫酸，再加水稀释至500ml.用精制 石棉过滤。4、5碱性酒石酸铜乙液:称取173g酒石酸钾钠与5 0 g氢氧化钠加适虽水溶解并稀释至500讥用精制石棉 过滤贮存干橡胶塞玻璃瓶中。4。6精制石棉:取石棉先用3mo 1 /L盐酸浸泡23天用水洗汛再加2、5mol/L氢氧化钠溶液浸泡23天, 倾去溶液，再用热碱

3、性酒石酸铜已液浸泡数小时用水洗净。再以3 mol/L盐酸浸泡数小时,以水洗至不呈 酸性。然后加水振摇使成微细得浆状软县委用水浸泡并贮存于玻璃瓶中,即可用做填充占氏珀圳用.4.7 0、100 0 mol/L商猛酸钾标准溶液。4、8 1 mol/L氢氧化钠溶液:称取4g氢氧化钠加水溶解并稀释至lOOmL4。9硫酸诜溶液:称取50g硫酸诜，加入200ml水溶解后，慢慢加入1 0 0ml硫酸冷却后加水稀释至1 J鼻4、10 3mo 1 /L盐酸:虽取30ml盐酸加水稀释至120m仁 弘操作方法5、I样品处理：鼻5。1、1乳类.乳制品及含蛋白质得食品:称取约Oc 52 g固体样品(吸取21 0 ml液体

4、样品)，置于250 ml容fit瓶中，加5 0 ml水,摇匀。加入1 0 ml碱性酒石酸铜甲液及4 milmol/L氢 氧化钠溶液加水至刻度混匀。静宜30min.用干燥遊纸过滤弃去初滤液麓液备用 (注:此步骤目得就是沉 淀黃白1。2酒精性饮料:吸取100 ml样品启于蒸发1U1中，用1 mol/L氢氧化钠溶液中与至中性， 在水浴上蒸发至原体积1/4后(注:如果蒸发时间过长，应注总:保持溶液pH为中性)移入25 0 m 1容虽瓶中。 加50 m 1水,混匀。以下按5O 1. 1自”加10m 1碱性酒石酸铜甲液”起依法操作。 5。1.3含多量淀 粉得食品:称取2-10 g样品宜于250 ml容虽瓶

5、中，加200 ml水在4 5 t水浴中加热1 h，并时时振摇。 (注总:此步骤就是使还原糖溶于水中切忌温度过商因为淀粉在商温条件下可糊化、水解影响检测结果。) 冷却后加水至刻度，混匀，静置。吸取200 ml上清液于另-250 ml容址瓶中，以下按父1 . 1自加10m 1碱性酒石酸铜甲液”起依法操作。鼻5、4含有脂肪得食品:称取21 0 g样臥先用乙碰或石汕碰淋洗 3次，去除醴层、加入50m 1水混匀以下按5.1、1自咖10ml碱性酒石酸铜甲液”起依法操作。5。1。5汽水等含有二氧化碳得饮料:吸取1 00 ml样品宜于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后移入25 0 ml容虽瓶中并用水洗涤蒸发皿洗

6、液并入容虽瓶中再加水至刻度,混匀后备用。鼻5 2样品测定：吸取50ml处理后得样品溶液于4 00ml烧杯中加入2 5ml碱性酒石酸铜卩液及2 5 ml乙液于烧杯上盖一 表面皿，加热,控制在4min内沸腾，再准确慝沸2m i n,乘热用铺好石棉得古氏坦塀或G 4垂融坦甥抽滤，并用6 0C热水洗涤烧杯及沉淀，至洗液不成碱性为止。(注:还原椭与碱性酒石酸铜试剂得反应一定要在沸腾状态下 进行,沸腾时间需严格控制。点沸得溶液应保持蓝色如果蓝色消失,说明还原糖含虽过岛,应将样品溶液稀禅 后重做)将占氏堆圳或垂融圳圳放回原4 0(加1烧杯中,加2 5 ml硫酸铁溶液及25ml水用玻棒搅拌使氧 化亚铜完全溶解

7、以0、1 mo 1/L岛鎰酸钾标准液滴定至微红色为终点。鼻同时吸収5 0ml水加与测样品 时相同址得碱性酒石酸镉甲、乙液硫酸铁溶液及水按同一方法做试剂空白实验、 4 i|算： Xl=(V-V0)xNx7 1 .54(1)鼻式中：XI样品中还原糖质址相、”于氧化亚铜得质虽.mg:小一测定用样品液消耗高猛酸钾标准液得体积,ml：v 0试剂空白消耗高症酸钾标准液得休积.ml;鼻N商铉酸钾标准溶液得浓度；鼻7 1、54lml lmol/ L岛猛酸钾溶液相、i于氧化亚铜得质量m g。根据(1)式中讣算所得氧化亚铜质邑查附表氧化亚铜质虽相半于葡萄糖、果糖.乳糖、转化糖得质址表 再计算样品中还原糖含量。X2

8、=(m 1 xV2Km2xVl)x(10 0/l 0 0 0)鼻式中:X2样品中还原糖得含ft,g/100g(g/100 ml);ml査表得还原糖质址.mg: -m2 样品质虽(或体枳)，g(m 1 ):VI测定用样品处理液得体积1 ; -V2样品处理后得总休积,ml。7 举例1称取某食物样品3。OOg,经过处理后用水定容至250ml。取50ml进行测定，消耗0。1003mol / L高忧酸钾标准液5、20mL同时测试剂空白为0、3 6mL则 样品中还原糖质虽相半于氧化亚铜得质St为:Xl(mg) =(5200、3 6)x0、1003x71.54= S4. 73查表得还原糖质址为相、I于葡萄椭

9、16、22 mg.亠样品中还原糖含虽(以葡萄糖讣)为：X2(g/100g)=(l 6 x 2 2x250X3. 0 0x5 0 )x(10 0/10 0 0 )= 2. 70 4 注鄴:木法用碱性酒石酸铜溶液作为氧化剂。由于硫酸铜与氢氧化钠反应可生成氢氧化铜沉淀氢氧化铜沉淀可被 酒石酸钾钠缓慢还庶析出少虽氧化亚铜沉淀使氧化亚铜汁虽发生误差，所以甲、乙试剂要分别配制及贮瓶 用时等虽混合。还原糖得测定方法(2)二、直接滴定法41。原理鼻样品经除去蛋白质后,在加热条件下，直接滴定已标定过得费林氏液费林氏液 被还原析出氧化亚铜后，过虽得还原糖立即将次甲基蓝还原,使蓝色褪色。根据样品消耗体积，汁算还原糖

10、址.池、适用范鬧aGB 5 0 09. 785木方法适用干所有食品中还原糖得检测。检出限0.1 mgo3、主婆仪器鼻滴定管人4、试剂除特殊说明外，实验用水为蒸镉水试剂为分析纯。-(1)费林甲液:称取15 g硫酸铜(CuS045H20)及0.05 g次甲基蓝溶于水中并稀释至1 Lo 费林乙液:称取50 g酒石酸钾钠与75 g氢氣化钠溶于水中再加入4 g亚铁氛化钾完全溶解后，用水 稀释至500 ml,贮存于橡胶塞玻璃瓶内。 乙酸锌溶液:称取21、9 g乙酸锌，加3 ml冰乙酸，加水溶解并稀释至100 mb列4)亚恢鼠化钾溶液。 称取1 0 6g亚恢鼠化钾用水溶解并稀释至1 00m 1 鼻(5)盐酸

11、。(6)葡萄糖标准溶液:精密称取K000 g经过80 C干燥至恒虽得超萄糖(纯度在9 9 %以上)加水溶解后加 入5 ml盐酸并以水稀释至1 Lo此溶液相、于1 m g/m 1葡萄糖、(注:加盐酸得目得就是防腐标准溶 液也可用饱与苯甲酸溶液配制)5。操作方法4。1样品处理：-5. L I乳类.乳制品及含蛋白质得食品:称取约052 g固体样品(吸 取21 0 ml液休样品)迓于100 m 1容虽瓶中加50 ml水,摇匀。边摇边慢慢加入5 ml乙酸锌溶液 及5 ml亚诜氢化钾溶液加水至刻度混匀。静宜30 min用干燥滤纸过滤S：去初滤液滤液备用.(注慰:乙 酸锌可去除贺白质、糅质、树脂等使它们形成

12、沉淀经过滤除去.如果钙离子过多时易与衙萄糖、果糖生 成络合物，使滴定速度缓慢;从而结果偏低，可向样品中加入草酸粉，与钙结合形成沉淀并过滤。)5.1o 2酒精性饮料:吸取50 ml样品,豊于蒸发皿中，用1 mol / L氢氧化钠溶液中与至中性,在水浴上蒸发 至原体积1/4后，移入100 ml容fit瓶中.加25 ml水,混匀。以下按4、1。1自”加5 ml乙酸锌溶液” 起依法操作。5。1。3含多量淀粉得食品:称取25 g样品，置于100 ml容量瓶中，加50 ml水，在45C水浴中加热1h.并时时振摇(注意:此步骤就是使还原糖溶干水中切忌温度过商大I为淀粉在岛温条件下可糊化.水轍影 响检测结果。

13、）、冷后加水至刻度混匀静宜。吸取50 ml上淸液干另一 100 ml容虽瓶中以下按4。1 自” 5 ml乙酸锌溶液”起依法操作。5、1.4汽水等含有二氧化碳得饮料:吸取50 ml样品置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后移入100 ml容址瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容fit瓶中,再加水至刻度，混匀后,备用。（注总:样品中稀释得还原糖最终浓度应接近于葡萄糖标准液得浓度。）5。2标定费林氏液溶液:吸取5s 0 ml费林氏甲液及5、0 ml乙液過于1 5 0 ml锥形瓶中（注意:甲液与 乙液混合可生成氧化亚铜沉淀应将甲液加入乙液使开始生成得氧化亚铜沉淀重溶），加水1 0 ml.加入玻璃 珠2粒从

14、滴定管滴加约9 ml衙萄籀标准溶液控制在2 min内加热至沸趁沸以每两秒1滴得速度继续滴加 超萄糖标准溶液直至溶液兰色刚好褪去并出现淡黄色为终点记录消耗得葡萄榊标准溶液总体积平行操作 三份取其平均值汁算每10 ml（甲、乙液各5 ml）贼性酒石酸铜溶液相半于葡萄糖得质址（mg）.（注总:还原 得次甲基蓝易被空气中得氧氧化恢复成原來得蓝色所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态并且避免滴 定时间过长。）5 c 3样品溶液预测:吸取5、0 ml费林氏甲液及5 0 ml乙液置于1 5 0 ml锥形瓶中加水10 ml加入 玻璃珠2粒控制在2 mi n内加热至沸趁沸以先快后慢得速度从滴定管中滴加样品溶液并保

15、持溶液沸腾 状态，待溶液颜色变浅时以每秒1滴得速度滴定，直至溶液兰色褪去，出现亮黄色为终点。如果样品液颜色较 深滴定终点则为兰色褪去岀现明亮颜色（如亮红），记录消耗样液得总体枳、（注总:如果滴定液得颜色变浅后 复又变深,说明滴定过虽需重新滴定。）5.4样品溶液测定:吸取5o 0 ml碱性酒石酸铜甲液及5.0 ml乙液，宜于150 ml锥形瓶中，加水10 m 1 ,加 入玻璃珠2粒，在2 min内加热至沸快速从滴定管中滴加比预测休枳少1 ml得样品溶液傑后趁沸继续以 每两秒1滴得速度滴定直至终点。记录消耗样液得总体枳，同法平行操作两至三份,得出平均消耗体枳。人6 . 计算aX3 =（Cx v 1

16、 x VXmx v2 xl000）xl00 式中：X_样品中还原糖得含址（以葡萄糖计）,； C一超萄椭标准溶液得浓度-mg/ml;vl一一滴定10 ml费林氏溶液（甲、乙液幹5 ml）消耗葡萄糖标准溶液得休积.ml;小2一测定时平均消耗 样品溶液得体积ml: 2样品定容体积Q1:及m样品质址.g： a7o注意爭项（1 ）木方法测定得就是一类具有还原性质得糖，包括衙萄糖、果糖.乳韓、麦芽糖等,只就是结果用葡萄糖 或其她转化糖得方式表示所以不能误解为还原糖=葡萄糖或其她糖。但如果已知样品中只含有某一种糖如 乳制品中得乳糖侧可以认为还原糖=某糖鼻分别用葡萄糖、果臥 乳糊、麦芽糖标准品配制标准溶液 分别滴定等虽已标定得费林氏液，所消耗标准溶液得体积有所不同。证明即便同就是还廉版在物化性质上仍 有所差别，所以还原糖得结果只就是反映样品整体情况并不完全等于各还原糖含址之与。如果已知样品只含 有某种还原糖则应以该还原糖做标准品结果为该还原糖得含址。如果样品中还原糖得成分未知或为蚩种 还原糖得混合物则以某种还原糖做标准品结果以该还原糖汁，但不代表该糖得真实含虽。