第六章自由基清除剂及其加工技术

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1、第六章第六章 自由基清除剂及其自由基清除剂及其加工技术加工技术了解自由基的概念和对人体的危害了解自由基的概念和对人体的危害掌握几种常见自由基清除剂的结构和生理掌握几种常见自由基清除剂的结构和生理功能功能了解国内外自由基清除剂的种类及作用机了解国内外自由基清除剂的种类及作用机理理掌握几种常见自由基清除剂制备的方法和掌握几种常见自由基清除剂制备的方法和要点要点 第一节第一节 自由基清除剂种类和作用机理自由基清除剂种类和作用机理 u自由基的概念及其对人体的影响自由基的概念及其对人体的影响 任何包含一个或多个未成对电子并能独立任何包含一个或多个未成对电子并能独立存在的原子或基团。存在的原子或基团。 氢

2、自由基、超氧阴离子、羟自由基、烷氧氢自由基、超氧阴离子、羟自由基、烷氧基、氢过氧基、单线态氧。基、氢过氧基、单线态氧。 过氧化氢是活性氧，有高反应性，可促进过氧化氢是活性氧，有高反应性，可促进自由基生成，称自由基关联物质。自由基生成，称自由基关联物质。 氧的损伤氧的损伤 氧分子轨道有两个未成对电子，很易转氧分子轨道有两个未成对电子，很易转变为自由基或活性氧。变为自由基或活性氧。 氧化应激氧化应激 生物体内氧化与抗氧化失去平衡。生物体内氧化与抗氧化失去平衡。 氧化应激原因氧化应激原因 营养不良造成膳食抗氧化剂耗竭；活性营养不良造成膳食抗氧化剂耗竭；活性氧自由基产生过多。氧自由基产生过多。 自由基

3、处于产生与清除的动态平衡自由基处于产生与清除的动态平衡 体内物质和能量的转化（氨基酸的氧化体内物质和能量的转化（氨基酸的氧化等）；维持在一个适当水平（破坏细胞等）；维持在一个适当水平（破坏细胞结构）。结构）。 自由基引发并参与脂质过氧化作用。自由基引发并参与脂质过氧化作用。 改善膳食（改善膳食（减少脂肪减少脂肪、增加水果蔬菜和增加水果蔬菜和谷物谷物），食物抗氧化剂的积累，延迟或），食物抗氧化剂的积累，延迟或预防疾病。预防疾病。 u自由基清除剂的种类和作用机理自由基清除剂的种类和作用机理 能清除体内自由基或能阻断自由基参与能清除体内自由基或能阻断自由基参与氧化反应的物质。氧化反应的物质。 非酶类

4、清除剂非酶类清除剂 抗氧化剂（抗氧化剂（VE、VC、胡萝卜素、还原、胡萝卜素、还原型谷胱甘肽）。型谷胱甘肽）。 酶类清除剂酶类清除剂 抗氧化酶（抗氧化酶（超氧化物歧化酶、过氧化氢超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化酶）。酶、谷胱甘肽过氧化酶）。 抗氧化酶抗氧化酶 能清除活性氧的酶能清除活性氧的酶。 非酶类清除剂非酶类清除剂 抗氧化剂：食品和药物中的抗氧化成分；抗氧化剂：食品和药物中的抗氧化成分； 自由基清除剂：能清除自由基实现抗氧自由基清除剂：能清除自由基实现抗氧化作用的物质；化作用的物质； 自由基清除剂只有在足够浓度时才起作自由基清除剂只有在足够浓度时才起作用；用； 清除剂只有在产生自

5、由基的位置附近才清除剂只有在产生自由基的位置附近才能起作用；能起作用； 清除剂与自由基反应后本身会成为新自清除剂与自由基反应后本身会成为新自由基，这个新自由基的毒性应小于原来由基，这个新自由基的毒性应小于原来的才能起防护作用。的才能起防护作用。第二节第二节 黄酮类化合物黄酮类化合物u黄酮类化合物的结构及生理功能黄酮类化合物的结构及生理功能 黄酮类化合物的结构黄酮类化合物的结构 基本母核：基本母核：2-苯基色原酮类化合物苯基色原酮类化合物； 黄酮、黄酮醇黄酮、黄酮醇，人体每天从食物中摄取可，人体每天从食物中摄取可达达1g； 二氢黄酮、二氢黄酮醇类、二氢黄酮、二氢黄酮醇类、异黄酮异黄酮、二氢、二氢

6、异黄酮、双黄酮类、查尔酮类、橙酮类、异黄酮、双黄酮类、查尔酮类、橙酮类、黄烷醇类、黄烷醇类、花青素花青素、新黄酮类。、新黄酮类。 黄酮类化合物的生理功能黄酮类化合物的生理功能 清除自由基清除自由基 与超氧阴离子反应阻止自由基反应的引与超氧阴离子反应阻止自由基反应的引发，与铁离子络合阻止羟基自由基的生发，与铁离子络合阻止羟基自由基的生成，与脂质过氧化基反应阻止脂质过氧成，与脂质过氧化基反应阻止脂质过氧化过程。化过程。调节免疫功能调节免疫功能 增强巨噬细胞吞噬能力和自然杀伤细胞活增强巨噬细胞吞噬能力和自然杀伤细胞活性；性； 增加抗体产量，调节体液免疫功能和细胞增加抗体产量，调节体液免疫功能和细胞免

7、疫功能；免疫功能； 通过血脑屏障吸收活性自由基，起抗衰老通过血脑屏障吸收活性自由基，起抗衰老作用。作用。 保护心血管系统保护心血管系统 能影响血管的能影响血管的脆性脆性和和渗透性渗透性，改善血液，改善血液循环状态，增加寇脉流量；循环状态，增加寇脉流量； 选择性地与血管壁上的血栓结合，起抗选择性地与血管壁上的血栓结合，起抗血栓形成作用；血栓形成作用； 防治血管老化和脑血管供血不足作用；防治血管老化和脑血管供血不足作用； 抗癌作用抗癌作用 致癌物致癌物(苯、苯并芘、亚硝基化合物苯、苯并芘、亚硝基化合物)，由惰性物经生物转化成的高活性物质，由惰性物经生物转化成的高活性物质，能破坏细胞结构，引发疾病，

8、转化中产能破坏细胞结构，引发疾病，转化中产生一些自由基中间物，进一步形成活性生一些自由基中间物，进一步形成活性很强的羟基自由基和单线态氧，引发癌很强的羟基自由基和单线态氧，引发癌症。症。 黄酮类化合物作为寻找有效抗癌活性物黄酮类化合物作为寻找有效抗癌活性物质。质。 抗炎作用抗炎作用 具有抗病原微生物、抗炎症、抗感染作具有抗病原微生物、抗炎症、抗感染作用。用。 保护肝脏作用保护肝脏作用 能促进组织再生，修复内脏器官的病变能促进组织再生，修复内脏器官的病变组织。组织。 调节内分泌功能调节内分泌功能 植物激素植物激素异黄酮异黄酮，具有抗雌激素作，具有抗雌激素作用。用。 抗菌及抗病毒作用抗菌及抗病毒作

9、用 木犀草素、黄芩素有抗菌作用。木犀草素、黄芩素有抗菌作用。 解痉作用解痉作用 解除平滑肌痉挛作用，如异甘草素、解除平滑肌痉挛作用，如异甘草素、黄豆甘原。黄豆甘原。 黄酮类化合物的制备工艺黄酮类化合物的制备工艺 原料原料 豆类豆类：大豆；：大豆； 水果类水果类：山楂、葡萄柚、蔷薇果、柑桔、：山楂、葡萄柚、蔷薇果、柑桔、柠檬、红桔、樱桃、李；柠檬、红桔、樱桃、李； 蔬菜类蔬菜类：花茎甘蓝、洋葱、番茄；：花茎甘蓝、洋葱、番茄； 沙棘、茶叶、葡萄酒、蜂蜜、啤酒、咖啡；沙棘、茶叶、葡萄酒、蜂蜜、啤酒、咖啡； 减压蒸馏法减压蒸馏法 水中有一定溶解度，易溶于甲醇、乙水中有一定溶解度，易溶于甲醇、乙醇、醋酸

10、乙酯等有机溶剂。醇、醋酸乙酯等有机溶剂。 用热水浸提出多糖、脂类及黄酮类化用热水浸提出多糖、脂类及黄酮类化合物等可溶性成分，再用有机物溶剂合物等可溶性成分，再用有机物溶剂进一步提纯。进一步提纯。 树脂柱纯化法树脂柱纯化法 离子交换树脂是一种不溶性高分子物离子交换树脂是一种不溶性高分子物质，对溶液中的离子具有选择吸附能质，对溶液中的离子具有选择吸附能力力; 适宜的树脂，极性相近的黄酮类被吸适宜的树脂，极性相近的黄酮类被吸附在树脂柱内，得到富集、纯化，用附在树脂柱内，得到富集、纯化，用洗脱剂洗脱。洗脱剂洗脱。 碱提取酸沉淀法碱提取酸沉淀法 黄酮苷类不溶于酸性水，易溶于碱性水黄酮苷类不溶于酸性水，易

11、溶于碱性水; 在提取液中加酸，黄酮苷类即可沉淀析在提取液中加酸，黄酮苷类即可沉淀析出。出。 简便易行，如芦丁、橙皮苷、黄芩苷的简便易行，如芦丁、橙皮苷、黄芩苷的提取。提取。 超声波提取超声波提取 破坏植物细胞壁，使细胞内有效成分破坏植物细胞壁，使细胞内有效成分大量溶于有机溶剂，提高提取效率。大量溶于有机溶剂，提高提取效率。 超临界超临界CO2提取提取 u黄酮类化合物的应用黄酮类化合物的应用 植物提取液直接制取功能食品。植物提取液直接制取功能食品。 提取液经浓缩、分离纯化、干燥，制取提取液经浓缩、分离纯化、干燥，制取高纯度的黄酮化合物，用于食品抗氧化高纯度的黄酮化合物，用于食品抗氧化剂和制造功能

12、食品。剂和制造功能食品。 饮料饮料中应用中应用 葛根黄酮功能饮料：葛根黄酮功能饮料：2030倍的水量浸倍的水量浸提；提； 精制后的产品，添加入果汁中，再调配。精制后的产品，添加入果汁中，再调配。 焙烤食品焙烤食品的应用的应用 面包、桃酥等。面包、桃酥等。 小吃食品小吃食品的应用的应用 冰淇淋、绿豆糊、黑米糊等。冰淇淋、绿豆糊、黑米糊等。 其他食品其他食品中的应用中的应用 奶粉、糖果、植物油等。奶粉、糖果、植物油等。u酶解酶解-溶剂法提取罗汉果中黄酮类物质溶剂法提取罗汉果中黄酮类物质 研究酶法与溶剂提取相结合提取罗汉果研究酶法与溶剂提取相结合提取罗汉果中黄酮类化合物的工艺条件；中黄酮类化合物的工

13、艺条件； 通过正交试验找出纤维素酶法及溶剂提通过正交试验找出纤维素酶法及溶剂提取的最佳工艺条件。取的最佳工艺条件。 罗汉果的果实和叶含有罗汉果三萜皂苷，罗汉果的果实和叶含有罗汉果三萜皂苷，还含有大量的果糖、黄酮类化合物、十多还含有大量的果糖、黄酮类化合物、十多种人体必需氨基酸、脂肪酸、维生素种人体必需氨基酸、脂肪酸、维生素C、微量元素等。微量元素等。 酶法提取：根据植物药材细胞壁的构成，酶法提取：根据植物药材细胞壁的构成，利用酶反应所具有的高度专一性等特点，利用酶反应所具有的高度专一性等特点，选择相应的酶，将细胞壁的组成成分水解选择相应的酶，将细胞壁的组成成分水解或降解，破坏细胞壁的结构，使有

14、效成分或降解，破坏细胞壁的结构，使有效成分充分暴露出来，溶解、混悬或胶溶于溶剂充分暴露出来，溶解、混悬或胶溶于溶剂中，达到提取细胞内有效成分的目的的提中，达到提取细胞内有效成分的目的的提取方法。取方法。 提取工艺流程提取工艺流程 罗汉果罗汉果粉碎、过目粉碎、过目一定量的原料加一定量的原料加溶剂酶解溶剂酶解过滤过滤一次提取物一次提取物浓缩浓缩乙醇沉淀乙醇沉淀石油醚萃取石油醚萃取乙酸乙酯萃取乙酸乙酯萃取罗汉果黄酮类物质罗汉果黄酮类物质 对酶解温度、酶解时间、酶的浓度及对酶解温度、酶解时间、酶的浓度及pH等影响因素进行四因素三水平的正交试等影响因素进行四因素三水平的正交试验。验。 无水乙醇沉淀除去溶

15、液中的多糖、蛋无水乙醇沉淀除去溶液中的多糖、蛋白质等大分子物质，石油醚为萃取剂白质等大分子物质，石油醚为萃取剂除去溶液中的脂溶性色素等，乙酸乙除去溶液中的脂溶性色素等，乙酸乙酯可萃取出罗汉果黄酮。酯可萃取出罗汉果黄酮。 用正交试验确定无水乙醇、石油醚、用正交试验确定无水乙醇、石油醚、乙酸乙酯的用量，确定分离纯化的工乙酸乙酯的用量，确定分离纯化的工艺条件。艺条件。 纤维酶酶解条件的正交因素表纤维酶酶解条件的正交因素表水平ABCD酶解温度/酶浓度/( U/mL)pH值酶解时间/min165304.950270505.280375705.5110编号ABCD得率g.100g-1)111112.010

16、212223.610313331.942421231.323522311.470623121.148731321.207832130.769933211.129K12.5213.6002.8893.680K24.5643.7974.0433.929K33.5933.2833.7483.071极差1.4860.5430.7110.644 酶解温度影响最大。酶解温度影响最大。 各影响因素的作用强度依次为：各影响因素的作用强度依次为：ACDB。 溶剂提取条件的正交因素表溶剂提取条件的正交因素表水平abc乙醇:粗提液/体积比石油醚:粗提液/体积比乙酸乙酯:粗提液/体积比11:281:11:121:18

17、2:12:131:83:13:1编号abc得率/(g.100g-1)11112.84721225.00231335.61642122.75252234.96362313.30273135.31383213.11993326.123K115.58612.63010.726K212.75315.14516.059K316.84317.40718.395极差4.0904.7787.669 乙酸乙酯用量的影响最大。乙酸乙酯用量的影响最大。 各影响因素的作用强度依次为：乙酸各影响因素的作用强度依次为：乙酸乙酯乙酯石油醚石油醚乙醇。乙醇。 提取物的紫外光谱分析提取物的紫外光谱分析 Anm 在在250nm、

18、320nm处均有吸收峰，在处均有吸收峰，在黄酮类化合物紫外吸收范围内，所得黄酮类化合物紫外吸收范围内，所得的产物为罗汉果黄酮类化合物。的产物为罗汉果黄酮类化合物。 该方法的提取率要比一般的提取方法该方法的提取率要比一般的提取方法的提取率高。的提取率高。 传统的提取方法，温度高，收率低，成本传统的提取方法，温度高，收率低，成本高，消耗大量的溶剂，会造成对环境的污高，消耗大量的溶剂，会造成对环境的污染。染。 酶制剂具有专一性、特异性，在常温、常酶制剂具有专一性、特异性，在常温、常压条件下就能起催化作用，能有效地提高压条件下就能起催化作用，能有效地提高植物药中的有效成分的含量，减少污染物植物药中的有

19、效成分的含量，减少污染物的排放，能真正实现的排放，能真正实现“绿色中药工业绿色中药工业”。 第三节第三节 茶多酚茶多酚u茶多酚的结构及其生理功能茶多酚的结构及其生理功能 茶多酚的结构茶多酚的结构 儿茶素类、黄酮、黄酮醇、花青素酚酸、儿茶素类、黄酮、黄酮醇、花青素酚酸、缩酚酸缩酚酸。 儿茶素类化合物儿茶素类化合物，占茶多酚总量，占茶多酚总量70%。 茶多酚的生理功能茶多酚的生理功能 清除自由基、增强机体免疫力清除自由基、增强机体免疫力 当当L-表没食子儿茶素没食子酸酯浓度为表没食子儿茶素没食子酸酯浓度为0.006mg/ml，对超氧阴离子消除率达，对超氧阴离子消除率达98%；当浓度为；当浓度为0.

20、1mg/ml，对羟自由基，对羟自由基消除率达消除率达99.9%。 抗衰老作用抗衰老作用 提高提高SOD活性，减低细胞的脂质过氧化活性，减低细胞的脂质过氧化物，延缓肌脂褐素形成，起抗衰老延寿物，延缓肌脂褐素形成，起抗衰老延寿作用。作用。 抗辐射作用抗辐射作用 抗癌作用抗癌作用 消炎、抑菌及抗病毒作用消炎、抑菌及抗病毒作用 没食子酸酯有抑制伤寒、副伤寒、霍没食子酸酯有抑制伤寒、副伤寒、霍乱和痢疾乱和痢疾 维持正常血管功能维持正常血管功能 防龋齿作用防龋齿作用 有杀死龋齿细菌。有杀死龋齿细菌。 茶多酚的制备工艺茶多酚的制备工艺 沉淀萃取法提取沉淀萃取法提取 水溶液将茶多酚浸提；水溶液将茶多酚浸提；

21、利用茶多酚能与利用茶多酚能与Bi2+、Ca2+、Hg2+、Sb3+等金属离子产生络合沉淀，将茶多酚从等金属离子产生络合沉淀，将茶多酚从含茶多酚的水浸提液中分离出来；含茶多酚的水浸提液中分离出来； 用酸转溶，用乙酸乙酯抽提。用酸转溶，用乙酸乙酯抽提。 溶剂萃取法溶剂萃取法 利用茶多酚及其杂质在不同溶剂中溶解度利用茶多酚及其杂质在不同溶剂中溶解度的不同；的不同； 用溶剂去杂或抽提。用溶剂去杂或抽提。 粗制品粗制品的纯化的纯化 粗制品溶于水，用乙醚萃取，乙醚层粗制品溶于水，用乙醚萃取，乙醚层减压回收，干燥即得较纯茶多酚；减压回收，干燥即得较纯茶多酚； 水层用乙酸乙酯反复萃取，除去水层，水层用乙酸乙酯

22、反复萃取，除去水层，收集乙酸乙酯层；收集乙酸乙酯层； 将乙酸乙酯溶液层减压低温浓缩，干将乙酸乙酯溶液层减压低温浓缩，干燥，得茶多酚初级氧化聚合物。燥，得茶多酚初级氧化聚合物。 u茶多酚的应用茶多酚的应用 饮料饮料茶叶软饮料、发酵酒饮料茶叶软饮料、发酵酒饮料等。等。茶多酚添加量为茶多酚添加量为250mg/mL。 小吃食品小吃食品冷冻制品（冷冻制品（雪糕、冰淇淋）雪糕、冰淇淋）；糖果（；糖果（硬硬糖、奶糖、水果糖、口香糖）糖、奶糖、水果糖、口香糖）。 糕点糕点食品中食品中 面包、饼干、桃酥、羊羹、云片等。面包、饼干、桃酥、羊羹、云片等。 添加量：茶多酚添加量：茶多酚150200mg/mg食品食品

23、茶膳茶膳中中 茶叶挂面、茶叶汤面、茶叶馒头、茶叶茶叶挂面、茶叶汤面、茶叶馒头、茶叶紫菜浇饭紫菜浇饭第四节第四节 超氧化物歧化酶超氧化物歧化酶u超氧化物歧化酶的基本特性及生理功超氧化物歧化酶的基本特性及生理功 超氧化物歧化酶的组成和分类超氧化物歧化酶的组成和分类 Cu,Zn-SOD， 绿色；绿色； Mn-SOD，紫色；，紫色； Fe-SOD，黄褐色。，黄褐色。 超氧化物歧化酶的主要理特性超氧化物歧化酶的主要理特性 等电点等电点pH46，偏酸性，酸性蛋白；，偏酸性，酸性蛋白； 对热、对热、pH和蛋白水解酶的稳定性好。和蛋白水解酶的稳定性好。 超氧化物歧化酶的物化特性和生理功能超氧化物歧化酶的物化特

24、性和生理功能 延缓由于自由基侵害引起的衰老现象延缓由于自由基侵害引起的衰老现象自由基引起机体衰老的机制：自由基引起机体衰老的机制： 生物大分子的交联聚合和脂褐素积累；生物大分子的交联聚合和脂褐素积累； 器官组织细胞的死亡和癌变；器官组织细胞的死亡和癌变； 免疫力降低。免疫力降低。 治疗由自由基损伤而诱发的疾病治疗由自由基损伤而诱发的疾病 消除肌肉疲劳消除肌肉疲劳 提高人体的抵抗力提高人体的抵抗力u超氧化物歧化酶的制备超氧化物歧化酶的制备 原料原料 动物动物：牛血、猪血、马血、兔血、蛋黄、：牛血、猪血、马血、兔血、蛋黄、 鸭血、猪肝、牛乳等；鸭血、猪肝、牛乳等； 植物植物：剌梨、大蒜、小白菜、饭

25、豆等；：剌梨、大蒜、小白菜、饭豆等； 微生物微生物：酵母菌。：酵母菌。 沉淀法沉淀法 热稳定性好，温度低于热稳定性好，温度低于80，短时间热，短时间热处理酶活力损失不大，一般杂蛋白在高处理酶活力损失不大，一般杂蛋白在高于于55易变性沉淀。易变性沉淀。 酶蛋白在等电点时，溶液中的静电荷为酶蛋白在等电点时，溶液中的静电荷为零，酶蛋白的溶解度最小而沉淀下来。零，酶蛋白的溶解度最小而沉淀下来。 粗酶溶液中加入一些弱极性有机溶剂（丙粗酶溶液中加入一些弱极性有机溶剂（丙酮），改变溶液的介电常数，使不同种类酮），改变溶液的介电常数，使不同种类的蛋白质的溶解度产生不同程度的下降；的蛋白质的溶解度产生不同程度的

26、下降； 可以把超氧化物歧化酶和其他的杂蛋白分可以把超氧化物歧化酶和其他的杂蛋白分开。开。 离子交换层析法离子交换层析法 离子交换剂为固定相，液体为流动相的离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行。系统中进行。 等电点在等电点在46之间，之间，pH7.0时带负电，时带负电，能被阴离子交换剂吸附，能被阴离子交换剂吸附， 根据离子交换剂对蛋白质结合力差异，根据离子交换剂对蛋白质结合力差异，用具有一定离子强度流动相进行洗脱，用具有一定离子强度流动相进行洗脱，就可和其他杂蛋白分开。经透析，冷冻就可和其他杂蛋白分开。经透析，冷冻干燥。干燥。 盐析法和金属螯合亲和层析法盐析法和金属螯合亲和层析法 盐的浓

27、度增高到一定数值时，水活度降盐的浓度增高到一定数值时，水活度降低；低； 蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏；膜逐渐被破坏； 引起蛋白质分子间相互聚集从溶液中析引起蛋白质分子间相互聚集从溶液中析出。出。 一定浓度范围的盐浓度一定浓度范围的盐浓度(如如1%25%饱和饱和度硫酸铵度硫酸铵)，使部分杂质呈，使部分杂质呈“盐析盐析”(沉淀沉淀)状态。状态。 有效成分呈有效成分呈“盐溶盐溶”(溶解溶解)状态；状态； 离心分离得上清液，选择一定浓度范围的离心分离得上清液，选择一定浓度范围的盐浓度盐浓度(如如25%60%饱和度的盐溶液饱和度的盐溶液)； 使使SOD

28、呈盐析状态，另一部分杂质呈盐溶呈盐析状态，另一部分杂质呈盐溶状态；状态； 离心收集的沉淀为初步分离制备的离心收集的沉淀为初步分离制备的SOD。 亲和层析亲和层析 把对把对SOD具有识别能力的配体具有识别能力的配体Cu2+以共价以共价键的方式固化到含有活化基团基质如壳聚键的方式固化到含有活化基团基质如壳聚糖上，然后装入层析柱；糖上，然后装入层析柱； SOD粗酶液通过该柱量，由于静电引力，粗酶液通过该柱量，由于静电引力，结构互补效应等作用使其被吸附，而无亲结构互补效应等作用使其被吸附，而无亲和力或非特异吸附的物质被起始缓冲液洗和力或非特异吸附的物质被起始缓冲液洗涤出来。涤出来。 改变起始缓冲液的改

29、变起始缓冲液的pH，或增加离子强度，或增加离子强度，或加入抑制剂等；或加入抑制剂等； 把把SOD解离下来。解离下来。 这一操作可把这一操作可把SOD和杂蛋白分开。和杂蛋白分开。 酵母发酵法酵母发酵法 酵母菌种进行摇瓶培养；酵母菌种进行摇瓶培养； 离心收集菌体，悬浮于磷酸钾缓冲液中，离心收集菌体，悬浮于磷酸钾缓冲液中，超声波破壁，离心除去残渣，得粗酶提取超声波破壁，离心除去残渣，得粗酶提取液；液； 经盐析和柱层析得酵母经盐析和柱层析得酵母SOD。u超氧化物歧化酶的修修饰工艺超氧化物歧化酶的修修饰工艺 硬脂酸修饰法硬脂酸修饰法 硬脂酸活化成硬脂酰氯；硬脂酸活化成硬脂酰氯； 在一定条件下对在一定条件

30、下对SOD分子中的赖氨酸分子中的赖氨酸氨氨基进行修饰，提高了其稳定性。基进行修饰，提高了其稳定性。 糖酯修饰法糖酯修饰法 一定条件下，将葡萄糖酸内酯与超氧化物一定条件下，将葡萄糖酸内酯与超氧化物歧化酶上赖氨酸的歧化酶上赖氨酸的氨基结合，提高其稳氨基结合，提高其稳定性。定性。 聚乙二醇修饰法聚乙二醇修饰法 一定条件下，经活化的聚乙二醇对一定条件下，经活化的聚乙二醇对SOD非非活性部位上赖氨酸的活性部位上赖氨酸的氨基进行修饰，增氨基进行修饰，增强强SOD对环境的稳定性。对环境的稳定性。u超氧化物歧化酶的应用超氧化物歧化酶的应用 SOD作为药物在临床上被广泛应用，研作为药物在临床上被广泛应用，研究证

31、明经口摄究证明经口摄入入SOD是有效的，为是有效的，为SOD应用于功能食品的开发提供理论依据。应用于功能食品的开发提供理论依据。 欧、美、日等发达国家和地区欧、美、日等发达国家和地区SOD保健保健食品已被消费者广泛接受。食品已被消费者广泛接受。 保健品保健品 SOD有清除细胞中超氧阴离子的作用。有清除细胞中超氧阴离子的作用。 具有防病、抗衰老的具有防病、抗衰老的SOD潜在的市场容潜在的市场容量及经济价值巨大。量及经济价值巨大。 国内外已有不少添加国内外已有不少添加SOD的抗衰老的保的抗衰老的保健品。健品。 药品药品 作为药物有三个特殊的作用，抗炎、抗超作为药物有三个特殊的作用，抗炎、抗超氧化物

32、和抗病毒。氧化物和抗病毒。 SOD是是国际医学界公认的唯一能清除人体国际医学界公认的唯一能清除人体细胞中自由基的酶，具有极强的抗氧化、细胞中自由基的酶，具有极强的抗氧化、防辐射、消炎、防衰老和抗癌作用，治疗防辐射、消炎、防衰老和抗癌作用，治疗高压氧中毒、肺气肿、糖尿病、肝病等病高压氧中毒、肺气肿、糖尿病、肝病等病症效果明显。症效果明显。 自身免疫性疾病自身免疫性疾病 类风湿关节炎，结肠炎，皮肌炎及肺气肿类风湿关节炎，结肠炎，皮肌炎及肺气肿等。特别是治疗顽固性风湿性关节炎、慢等。特别是治疗顽固性风湿性关节炎、慢性多发性关节炎。性多发性关节炎。 抗辐射、抗肿瘤抗辐射、抗肿瘤 具有保护具有保护DNA

33、，蛋白质和细胞膜，使其免，蛋白质和细胞膜，使其免遭遭O2引起的破坏作用，用于良性肿瘤辅引起的破坏作用，用于良性肿瘤辅助治疗、恶性肿瘤预防、防止癌细胞扩散助治疗、恶性肿瘤预防、防止癌细胞扩散方面及放射治疗后的并发症等。方面及放射治疗后的并发症等。 抗氧化抗氧化 治疗氧中毒，心肌缺氧及某些心血管治疗氧中毒，心肌缺氧及某些心血管疾病，用作早产婴儿的氧中毒症的解疾病，用作早产婴儿的氧中毒症的解毒药。毒药。 延缓机体的衰老延缓机体的衰老 生物体内的生物体内的SOD含量与其寿命有密切含量与其寿命有密切关系，关系，SOD能增强能增强免疫力、延缓老年免疫力、延缓老年斑的出现、防止和消除色素沉着。斑的出现、防止

34、和消除色素沉着。 为药用酶，在美国、德国、日本等国已有为药用酶，在美国、德国、日本等国已有产品。产品。 食品食品 作为食品添加剂用于糕点、饮料等，形成作为食品添加剂用于糕点、饮料等，形成一种独具特色的保健食品。一种独具特色的保健食品。 SOD奶粉、SOD胶丸、SOD啤酒等；SOD口服液，添加量为口服液，添加量为5U/mL。牛乳的。牛乳的SOD含含量为量为3.2U/mL。 作为保健食品可申报的功能有：免疫调作为保健食品可申报的功能有：免疫调节、调节血脂、调节血糖、调节血压、节、调节血脂、调节血糖、调节血压、抗突变、抗疲劳、抑制肿瘤等。抗突变、抗疲劳、抑制肿瘤等。 SOD苹果苹果 原有天然风味和营

35、养成分不破坏的前提原有天然风味和营养成分不破坏的前提下，用微生态生物工程技术对自然生长下，用微生态生物工程技术对自然生长过程中的苹果进行特殊处理而开发的富过程中的苹果进行特殊处理而开发的富集集SOD酶的功能苹果。酶的功能苹果。 食用食用SOD苹果，对炎症、高血压、心脏苹果，对炎症、高血压、心脏病、癌症等疾病及辐射、化疗损伤有预病、癌症等疾病及辐射、化疗损伤有预防和辅助治疗作用。防和辅助治疗作用。 SOD苹果是苹果是SOD功能食品开发方面的一功能食品开发方面的一大突破，人们在食用大突破，人们在食用新鲜绿色食品的同新鲜绿色食品的同时，又获得保健食品疗效，价格又低于时，又获得保健食品疗效，价格又低于

36、一般保健品及口服液、胶囊等。一般保健品及口服液、胶囊等。 日用化工品日用化工品 日用化工品的成份之一。日用化工品的成份之一。 具有抗氧化，消除色素沉淀作用，改善皮肤具有抗氧化，消除色素沉淀作用，改善皮肤细胞的微循环，阻止脸部色斑的形成，祛除细胞的微循环，阻止脸部色斑的形成，祛除细小皱纹，增加肌肤弹性，延缓衰老。细小皱纹，增加肌肤弹性，延缓衰老。 对清除面部黄褐斑，黑斑，老年斑有独特效对清除面部黄褐斑，黑斑，老年斑有独特效果。果。 添加添加SOD的化妆品（大宝的化妆品（大宝SOD蜜等）倍受女蜜等）倍受女士们的青睐。士们的青睐。 烟酒烟酒 香烟经香烟经SOD处理，可以去除焦油及尼古处理，可以去除焦油及尼古丁。丁。 报道，日本已生产出低焦油含量的报道，日本已生产出低焦油含量的SOD卷烟。卷烟。