[毕业论文]大孔树脂分离与纯化红檵木花色素的初步研究

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1、吉 首 大 学学 士 学 位 论 文大孔树脂分离与纯化红檵木花色素的初步研究余 璐 二00六 年 六 月吉 首 大 学 学 士 学 位 论 文大孔树脂分离与纯化红檵木花色素的初步研究The Seperating and Purifying Study on the flower pigment from Loropetalum chinense var.rubrum by macroporous resin学 生 姓 名 余 璐指 导 教 师 唐克华 副教授学 科 专 业 生物科学（专本沟通）研 究 方 向 天 然 色 素 研 发提交论文日期2006年6月5日 论文答辩日期2006年6月10日

2、答辩委员会主席 论文评阅人学士授予日期二00六年六月目 录摘 要 1前 言 21 材料、试剂及设备 31.1 材料 31.2 试剂 31.3主要设备 32 研究方法 42.1研究流程 42.2色素原液及待分离纯化母液的制备及吸收光谱测定52.3红檵木花色素的树脂纯化研究52.4红檵木花色素树脂分离纯化的效果63 结果与分析63.1红檵木花色素的吸收光谱图73.2红檵木花色素树脂吸附类型及洗脱剂的筛选73.3红檵木花色素在树脂上的动态吸附与解吸附 103.4 X-5大孔树脂分离纯化红檵木花色素的效果 104 论与结论114.1讨论 114.2讨论 11致 谢 11参考文献1213红檵木花色素的大

3、孔树脂分离与纯化初步研究摘 要采用微波辅助提取与有机溶剂萃取分离，获得红檵木花色素的精制浓缩液及干燥物，在8种大孔树脂对该色素浓缩液的吸附与解吸附性能初步研究基础上，选取其中效果最好的树脂运用正交实验法进行溶剂浓度、pH、固液比（树脂质量与解吸附液体积比）及最大吸附容量等系统研究。结果表明：8种大孔树脂中，以D392对红檵木花色素的吸附量最大，但其解吸附效果较差；大孔树脂X-5对色素的吸附容量次之，但其解吸附效果较好。X-5大孔树脂对红檵木花色素的最大吸附量为2.252mL/g（湿树脂，树脂含水率70.8%），在pH5、乙醇浓度50%、固液比1:10时的解吸附效果最好。经X-5树脂分离纯化，红

4、檵木花色素制品的色价达198，比精制色素浓缩液的提高2倍多。关键词 红檵木；花；色素；大孔树脂；分离纯化Studies on the circuit of puring by macroporous resin on the flower pigment from Loropetalum chinense var.rubrum AbstractUsing microwave attachment extracting and organic solvent separating,the purifying concentrated solution and its drying product

5、 of the pigment from Loropetalum chinense var.rubrum flower have been gotten. By means of orthogonal test,system study on the most suitable desorption conditions of the solvent strength、pH、the solid-to-liquid ratio(the macroporous resin mass to the capacity of desorption liquid) have been made, the

6、most adsoptive capacity have been studied meanwhile too. The results showed that: D392 have the most adsorption capacity to the pigment from L. chinense var.rubrum flower in the eghit macroporous resin and have bad desorption effect, otherwise the X-5 have the second adsorption capacity but have goo

7、d desorption effect on the pigment. The most adsorption capacity to the pigment from L. chinense var.rubrum flower of X-5 is 2.252mL/g wet macroporous resin(water content is 70.8%),the best desorption conditions of the X-5 to the flower pigment are pH5、50%ethanol and 1 solid to 10 liquid. Using X-5

8、macroporous resin purifying,the color price of the flower pigment product is 198 ,whcich more than the purifying concentrated pigment solution two times.Key words Loropetalum chinense var.rubrum;flower;pigment; macroporous resin;separating and purifying.前 言红檵木（Loropetalum chinense var.rubrum ）属金缕梅科檵

9、木属，是白檵木的变种，灌木或小乔木，树姿优美，花红叶红，艳丽夺目，独具特色，为湖南特产的一种珍稀观赏树种1。红檵木花生48朵成头状或短穗状花序排列，花瓣具带状线，淡紫红色至紫红色，一年内能多次开花，属珍贵的庭院及盆栽观赏植物。据1997年版中国植物志记载，全世界檵木属仅四个种和一个变种，我国分布有白檵木、大果檵木、大花檵木和红檵木（变种），另一个种分布于印度。野生红檵木产于湘东山区，于19821985年在湖南省林业资源普查时发现；目前应用的红檵木几乎全为人工栽培。红檵木的根、叶、花、果均可入药，能解热止血，通经活络等2。广为栽培应用的红檵木，通常系以白檵木做砧的嫁接苗木，分两个栽培型即花紫红、

10、幼叶及老叶红色、果实暗红褐色型和花淡紫红色、幼叶紫红、而老叶绿色、果实灰褐色型。红檵木花红、叶红、根红，绿化用途广泛而被园艺界称为“全能绿化品种”3，已经大量用于营造色篱、色块、模纹花坛、球类、盆景、高档行道树等各类园林造型。近多年来，通过人工繁殖和园林应用与推广，仅湖南省用于道路绿化的红檵木就达多万株，同时还有多万株苗木存园，湖南浏阳市业据此资源植物已建立红檵木初级产业4，种植面积已达1200hm2，产品行销国内外，产销规模达2亿元。 色素通常可以分为天然和合成两大类。人类最初使用的都是天然色素，天然色素主要是从植物、动物和微生物中提取的（如我国自古以来使用的红曲）。由于天然色素往往较贵又容

11、易变质，因此，当合成色素发明之后，以其具有色泽鲜艳、着色力强、稳定性高的特点，以及无嗅无味、易溶、易调色、成本低、价格廉等优势，逐渐取代了天然色素。但是合成色素一般来源于焦油类物质，物质结构中含有苯环，本身既无任何营养价值，又对人体有害5。天然色素具有安全可靠、没有毒副作用、色调自然，同时它还兼具有如防癌、降血压、降血脂等重要生理功能。因此，当今社会顺应回归自然的绿色消费趋势，天然色素逐步取代存在使用安全问题的合成色素已是色素应用的必然发展趋势，是人类健康的需求。近年来，国内外对其天然色素的生理活性研究也更加深入和广泛，文献6表明：目前我国已经开发出不同原料来源的食用天然色素80余种，有：姜黄

12、素、叶绿素铜钠盐、红药子黄色素、玉米黄色素、红曲色素粉、高粱红色素、枣红色素、栀子黄色素、辣椒红色素、红花黄色素等产品。近年来，欧美等发达国家也相继研究开发了一系列新型天然色素7，如：果红、姜黄、焦糖色素、洋红等。随着现代食品、医药、轻工业的发展，天然色素的市场需求将大幅度增加，新产品的开发和应用范围的扩大，天然色素市场将具有更加广阔的发展前景。关于色素的树脂分离与纯化，党蕊叶等8报道了大孔吸附树脂D61和X-5对牵牛花红色素的吸附效果及纯化牵牛花红色素的方法，其结果表明：X-5树脂的吸附能力较强，以甲醇洗脱液的洗脱效果最佳，洗脱回收率92%左右。连喜军等9对红曲红色素的树脂法分离研究 结果表

13、明：弱碱性阴离子交换树脂D380对红曲霉发酵液中红曲红色素的吸附能力最强，最大吸附量达52U/g，但难以用乙醇洗脱；大孔吸附树脂的平均吸附量为35U/g,但是不能将红曲色素液中的红色素和黄色素分开；弱碱性阴离子交换树脂D301R可用于分离红曲黄色素；弱碱性阳离子交换树脂110H对发酵液中红曲红色素的吸附量为21.6U/g，洗脱量为13.0U/g，洗脱率为65%，是供试树脂中分离红曲红色素效果最佳的树脂。周小华10进行了D61树脂吸附和分离萝卜红色素的研究，结果表明：D61树脂吸附和分离萝卜红色素的交换容量为60.9mg/mL湿树脂，吸附平衡时间为40分钟。被吸附的萝卜红色素用含0.1mol/L

14、的80%乙醇洗脱，洗脱液温度为50，流速为2BV/h。对红檵木开发利用研究始于二十世纪九十年代初，目前的研究集中于其播种、扦插、嫁接及组织培养等多种培育手段，以及多种红檵木的亲缘关系11和品种选育等方面，指导教师近几年则重点开展了红檵木花色素的性质12、性能和成分分离等研究。本研究围绕指导教师的立项课题开展了对红檵木花色素的大孔树脂分离与纯化的初步研究。在红檵木色素方面，唐前瑞13，包志毅、李晨东14等开展了红檵木不同生态型的RAPD分析与突变起源及聚类研究，以及不同生态类型叶的花色苷颜色和稳定性随季节与温度变化、叶色素含量及形态特征与叶绿体超微结构的聚类研究。指导老师开展了红檵木花色素的微波

15、提取及理化性质和光热处理降解动力学研究15 ，研究表明红檵木花色素可能属于醇溶性黄酮类，其耐酸性很好，耐光氧化和热处理性极佳，而耐碱性和耐Fe3+、Fe2+、Cu2+、Pb2+盐离子较差。另外，据2000级生物科学专业李永注1及唐慧注2、陈璇注3和2001级生物科学专业申仕康同学注4研究表明：红檵木花色素不仅有很强的抗氧化、抗热、耐高浓度糖及光照射特性，而且对金黄色葡萄球菌和痢疾杆菌有很好的抑菌效果；红檵木花色素中含有7种成分，可能属于花色苷或黄酮类物质。因此，为了进一步提升红檵木的潜在应用价值，应从其生理活性成分的研究入手。本文运用已确认较佳的红檵木色素提取方法制备其花红色素精制液及干燥物，

16、运用大孔树脂吸附与解吸附的方法对色素进行纯化，初步探索研究出对红檵木花色素吸附效果较好且解吸附效果也较好的树脂，以为今后红檵木花色素的工业化分离纯化制备奠定研发基础。注1: 2004级生物科学专业毕业论文DPPH法分析红檵木花色素抗氧化性研究注2: 2004级生物科学专业毕业论文红檵木花色素分级萃取产物的抑菌研究注3: 2004级生物科学专业毕业论文红檵木花色素组分的TLC分离及其光谱性质研究注4：2005级生物科学专业毕业论文红檵木花色素组分的TLC分离及其光谱性质研究1 材料、试剂及设备1.1材料鲜花瓣，于2005年4月初采于校内一教学楼前栽培的红檵木，其花呈紫红色，嫩叶淡红色，老叶墨绿色

17、，果实灰褐色的品种。1.2试剂 无水乙醇、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、 浓HCl、氢氧化钠，试剂都为分析纯。大孔树脂D3120、X-5、AB-8、D4020、NKA-、NKA-9；大孔弱酸性丙烯酸系阳离子交换树脂D113；大孔弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂D392，均购于南开大学树脂厂。蒸馏水为自制。1.3主要设备格兰仕微波炉，鼓风干燥箱，旋转蒸发仪(Yamato BM-400)，岛津UV-160A紫外可见分光光度计，岛津分析电子天平，低速离心机、树脂柱（40*1.5cm），精密pH计。 2 研究方法2.1 研究流程 花瓣 微波提取浓缩、离心色素粗提液正丁醇：石油醚（1/4）萃取 除去

18、脂类物质乙醚萃取 除去黄酮甙元类物质乙酸乙酯萃取 除去黄酮甙类物质浓缩至固体，精确称取定量，配置一定浓度的色素溶液（母液）大孔树脂静态吸附与解吸附研究大孔树脂动态吸附与解吸附研究图 1 红檵木花色素大孔树脂分离纯化研究流程Fig.1 circuit of puring by macroresin on the flower pigment from Loropetalum chinense var.rubrum2.2色素原液及待分离纯化母液的制备及吸收光谱测定称取若干克红檵木花的干花瓣，按固液比（1:15）加20%的乙醇中浸提4h，再用微波中火力档处理5min，过滤后得色素粗提液，再把粗提液在

19、57 C下减压浓缩至1/4体积得浓缩液，最后将浓缩液在4000r/min离心20min，取上清液即为色素粗提液。参照文献7，取色素粗提液用正丁醇:石油醚萃取除去叶绿素等脂溶性物质，接着用乙醚萃取除去黄酮甙元，再用乙酸乙酯萃取除去黄酮甙，最终得到含一定生药浓度的红檵木花色素精制母液，制备工艺流程如图1。取少量红檵木花色素母液稀释一定倍数，用UV-160A紫外可见分光光度计扫描得到其吸收光谱图及特征吸收峰。2.3红檵木花色素的树脂纯化研究2.3.1树脂的预处理 实验使用的新购大孔树脂中一般含有少量低聚物、有机物及干扰性离子。所以，使用前必须进行预处理。各种大孔吸附树脂按文献16方法做以下具体处理。

20、步骤如下：1装柱前清洗吸附柱，以防物质对树脂的污染，并排尽吸附柱内的水。2先于吸附柱内加入相当于装填树脂体积0.4-0.5倍体积的乙醇，然后将新树脂投 入柱中，使液面高于树脂层约30cm处，并浸泡24小时。3用乙醇以2BV/h流速通过树脂层后，再浸泡4小时。4用乙醇以2BV/h流速通过树脂层，洗至流出液加蒸馏水水不呈白色浑浊为止，然后用蒸馏水以同样的流速洗至流出液呈中性且无醇味。5用2BV的5%的HCl溶液以4-6BV/h的流速通过树脂层，并浸泡2-4个小时后用水以同样流速洗至流出液呈pH中性。6用2BV的5%的NaOH溶液以4-6BV/h的流速通过树脂层，并浸泡2-4个小时后用水以同样流速洗

21、至流出液呈pH中性2.3.2树脂吸附类型及洗脱剂的筛选（1）树脂含水量的测定 树脂经预处理以后，用重量法测定其含水率：先分别称取定量湿树脂，用铝箔纸盛着放到烘箱里在100oC下干燥6h，取出称其重量，再放入烘箱中在100oC下干燥4h，如此直至恒重。（2）红檵木花色素的适宜吸附树脂筛选取按预处理好的8种大孔树脂各5.00g，入100mL三角瓶中，加入15mL稀释100倍的色素母液，每组做三个平行。在摇床上振荡24h，静置、过滤，测定各滤液的吸光度A，并计算其相应的吸附率。各种树脂对红檵木花色素的吸附率计算：色素母液吸附前的吸光度A0，饱和吸附后的滤液吸光度AE，吸附率=（A0-AE）/A0（3

22、）不同溶剂及其浓度对树脂吸附色素后解吸附的影响按平行实验要求，称取已经饱和吸附红檵木花色素的适宜种类湿树脂若干份，每份5.0g，在这几种树脂中分别加入30mL水、50%甲醇溶液、50%乙醇溶液，在摇床上振荡6个小时，使色素从树脂上充分解吸附，静置、过滤，测定滤液的吸光度A，再进行具体分析。（4）溶剂pH、溶剂浓度和溶剂与树脂间固液比对色素解吸附的影响根据前述研究结果，按正交实验表的安排进行最适乙醇洗脱剂的浓度、洗脱的pH、洗脱液与树脂的固液比共三个因素对色素解吸附的影响研究。称取已饱和吸附色素的X-5湿树脂共9份，每份5.0g。分别在树脂中加入相应的解吸附溶剂，放在摇床上振荡6h，静置、过滤，

23、测定其吸光度A，通过分析得出各因素的最佳水平组合，同时对所得最佳因素水平组合进行重复性实验验证。2.3.3红檵木花色素在树脂上的动态吸附与解吸附研究（1）花色素在X-5树脂上的吸附穿露点与最大吸附量采用湿法装柱，将25g预处理好的X-5大孔树脂（含水率70.8%）缓慢装入1.540cm吸附柱中，树脂层高约15cm。将色素母液定量加入树脂柱中，每次4mL，控制流速为1mL/min。并用试管定量收集流出液，每管2mL。测定收集的流出液的吸光度（Ai），以流出液的吸光度Ai与上柱前色素原液的吸光度A0的10%非常接近时为其穿露点，计算得到树脂对色素的最大吸附量。最大吸附量计算：收集液总体积V，树脂含

24、水体积V1，树脂湿质量m，则X-5湿树脂的最大吸附量=V- V1/m，或为mg色素/g湿树脂。 （2）色素的解吸附曲线树脂吸附色素饱和后，用蒸馏水快速清洗树脂柱，然后用50%乙醇溶液（pH=5.2）进行解吸附，用试管定量（每管2mL）收集解吸液，逐管测定解吸液的吸光度（Ai），以Ai为纵坐标，收集液体积V为横坐标绘制解吸附曲线。2.4红檵木花色素树脂分离纯化的效果色价是反映色素制品中色素物质纯度的最重要指标，色价17越高则反映制品中非色素类物质越少，未来作为色素开发的价值的可能较大。色价法18快速准确，简便易行，一般不需要标准样品，只用分光光度计，先测定色素在所用提取液中的最大吸收峰波长，然后

25、在该波长下测定样品的吸光度，就可求得色价。具体算式如下：E1%1cm=A*稀释倍数/W，式中A表示样品溶于100mL提取剂，在一定波长下用1cm比色皿，控制吸光度在0.2-0.7范围的实测值，W表示样品质量（g）。3 结果与分析3.1红檵木花色素的吸收光谱图 取1mL红檵木花色素母液稀释100倍,用UV-160A紫外可见分光光度计在200-700nm波长内扫描，得色素的特征吸收峰为303.5nm。因为红檵木花色素有良好的综合性质，所以本实验均以303.5nm作为色素的吸光度测定波长。3.2红檵木花色素树脂吸附类型及洗脱剂的筛选3.2.1树脂含水率的测定 用重量法测定得8种大孔树脂的含水率见表1

26、.表1 8种大孔树脂的含水率Table 1 Water content of eight species macroresin树脂种类树脂湿重（g）第一次干燥（g）第二次干燥（g）含水率（%）NKA92.756 0.9490.94874.8%X-52.7611.1321.31170.8%D1132.7851.1811.17365.6%NKA-2.7811.4201.41556.4%AB-82.7770.9260.92274.0%D3922.7151.2291.22864.6%D31202.7240.7980.79780.5%D40202.7360.8910.88977.5% 从表1可以看出，8

27、种大孔树脂中以D3120含水率最大，为80.5%；树脂NKA-含水率最小，为56.4%。但8种树脂其含水率大小差异不大。3.2.2红檵木花色素的静态吸附与解吸附（1）8种大孔吸附树脂对红檵木花色素的吸附性能按2.3.2中所述方法研究D3120、X-5、AB-8、D4020、NKA-、NKA-9、D392、D113共8种大孔树脂对红檵木花色素的静态吸附情况，相关结果见表2。从表2可以看出，D392和X-5树脂对红檵木花色素的吸附效果均优于其它树脂。所以本实验初步选择D392和X-5大孔树脂作为花色素的吸附树脂，并进一步研究其对红檵木花色素的吸附及解吸附。表2 8种大孔树脂对红檵木花色素的吸附性能

28、Table 2 performance of eight macroresin on the flower pigment from Loropetalum chinense var.rubrum树脂种类 NKA-D392 X-5 NKA9D3120AB-8D113D4020含水率%74.8%70.8%65.6%56.4%74.0%64.6%80.5%77.5%A01.3921.3921.3921.3921.3921.3921.3921.392Ai1.135-0.0090.1900.6690.3520.3291.1060.294吸附率18.5%100.6%86.4%51.9%74.7%76.4

29、%20.5%78.9%注：A0为母液稀释100倍在303.5nm波长下所测得的吸光度3.2.3 不同溶剂对色素解吸的影响按2.3.2所述，取D392和X-5大孔树脂各9份，每份5g，每种树脂分成三组并分别在三份树脂中各自加入30mL水、50%甲醇、50%乙醇，放置摇床上充分振荡解吸附，静置、过滤的滤液测吸其光度A见表3。表3 水、50%甲醇、50%乙醇对色素的解吸附效果Table 3 result of pigment adsorption deprived water and 50% and50%树脂种类解吸附溶剂解吸附后的吸光度（Ai）X-5X-5水50%甲醇0.3611.581X-5D3

30、9250%乙醇水2.1050.016D392D39250%甲醇50%乙醇0.0380.027从表3可以清楚的看出，50%乙醇对吸附了色素的X-5树脂的解吸效果最好，50%甲醇次之，水的解吸效果最差。而3种解吸附溶剂对饱和吸附了花色素的D392树脂的解吸附效果均差。故选择X-5大孔树脂做以下实验研究。表4 影响X-5树脂的解吸附的因素水平表Table 4 Influencing factors value on the adsorption release performance of X-5 macroresin因素水平123浓度（A）固液比（B）PH（C）30%1:6340%1:8450%1

31、:1053.2.4 溶剂不同pH、溶剂浓度、固液比对色素解吸附的影响表4中列出了设置的与色素解吸附相关的三个因素：pH、浓度、固液比。该三因素设定的水平值分别为：pH=3、4、5，乙醇浓度：30%、40%、50%，加入吸附了色素的树脂中的解吸液体积与树脂质量比为6:1、8:1、10:1，表5为以设置的三个因素水平进行的L9（34）正交实验结果及直观分析。其中的吸光度值为各组解吸附液全部定容到50mL时的吸光度。表5 X-5树脂解吸附的L9（34）正交实验结果Table 5 Result of adsorption release of X-5 macroresin by L9(34) orth

32、ogond erperiment处 A B C D 吸光度（A303.5nm）理 乙醇浓度 固液比 pH 误差 1 1 1 1 1 0.8072 1 2 2 2 0.9863 1 3 3 3 1.2924 2 1 2 3 1.1065 2 2 3 1 1.3696 2 3 1 2 1.2637 3 1 3 2 1.465 8 3 2 2 3 1.394 9 3 3 1 1 1.345K1 3.085 3.378 3.464 3.621 11.127K2 3.838 3.849 3.437 3.714K3 4.204 3.900 4.226 3.792 P=13.757U 13.974 13.8

33、12 13.890 13.762Q 0.217 0.055 0.133 0.005 表6 表5的方差分析表Table 6 variance analysis of Table 5因素偏差平方和自由度F值临界值乙醇浓度（A）固液比（B）pH（C）误差0.2170.0550.1340.005222243.4011.0026.8F0.05（2，2）=19F0.01（2，2）=99总和0.4068从表5结果可以看出，乙醇浓度越高时解吸附的溶液吸光度越高；固液比越大时解吸附的溶液的吸光度越高；pH越高时，解吸附的溶液吸光度越高。依据表5中Q值大小判断是：A3C3B3可能是最好的解吸附组合条件。因为这个组

34、合条件不在9次实验当中，经补充做实验A3C3B3，并与9次实验中最好的第7号实验（A3C3B1）进行了比较。结果是，A3B3C3组合的解吸附液的吸光度为1.476，确实比7号实验组（A3C3B1）的要高，说明A3C3B3组合条件确实是在因素间没有交互作用时的最适条件组合。另外，依据算出的A、B、C各因素不同水平的离差平方和（分别是：QA=0.217，QB=0.055，QC=0.133），也说明乙醇浓度的高低对色素解吸附的效果影响最大，pH次之，固液比值大小的影响最小，三者的F0.05临界值（表6）反映：A、C两因素即乙醇浓度和pH对吸附色素的树脂解吸附影响达显著程度，而B因素（固液比）三个水平

35、值之间差异不显著。所以，洗脱乙醇的体积与吸附色素的树脂质量比为6-10倍量范围均为可满足全部洗脱吸附色素的用量要求。3.3红檵木花色素在树脂上的动态吸附与解吸附3.3.1 X-5对花色素最大吸附量的确定每次上柱4mL，定量收集流出液，每管2mL，待流出液Ai值达到A0（色素母液稀释100后吸光度A0=1.460）的10%时确定为其穿露点，收集的第35管，取其中1mL定容到10mL，测定其吸光度A35=1.392，依上方法测得收集到的第36管A36=1.422；收集到的第37管A37=1.461其吸光度值与母液稀释100倍的吸光度非常接近，据此计算确定X-5树脂对此色素母液的穿露点为74mL，计

36、算得到X-5树脂对此红檵木花色素液的最大吸附量为（74-25*0.708/25）=2.252mL/g湿树脂，或者是123mg色素/g湿树脂3.3.2吸附花色素的X-5树脂的解吸附曲线以最适的解吸附溶剂最适解吸附pH，进行X-5树脂吸附花色素后的动态解吸附研究。测定连续收集的相同体积的解吸液的吸光度（A），以Ai为纵坐标，连续收集液的体积V为横坐标绘制解吸曲线，得到图2。Fig.2 diagram of X-5 macroresin adsorption release to the flowerpigment由图2可知，当乙醇用量在24mL时达到了洗脱的最大Ai值。考虑到今后可能的工业生产需要

37、，从节约解吸附溶剂成本出发，可以选择8mL到42mL止为有效收集的洗脱液。3.4 X-5大孔树脂分离纯化红檵木花色素的效果 准确称取0.5800g纯化色素制品和0.5815g色素粗品，用蒸馏水溶解并定容到58mL。从58mL色素纯化制品液中取出0.5mL用蒸馏水稀释到100mL，在303.5nm波长下测得其吸光度为0.574，则色价E纯化1%=0.574*200/0.5800=198.0。从58mL色素粗品液中取出1mL，用蒸馏水稀释到100mL，在303.5nm波长下的吸光度为0.410，其色价E粗品1%=0.410*100/0.5815=70.5。比较可知，色素在经过X-5树脂分离纯化后色

38、价提高2.8倍。4 讨论与结论4.1 讨论 对红檵木花色素提取精制物制备的高浓度母液进行光谱扫描，因UV160A紫外可见分光光度计性能限制，在可见光区不能扫描出波峰，而紫外区则因色素浓度太高也超出了仪器的测定值范围。所以，本实验中采取对母液稀释100倍后的200-700nm波长扫描，得到303.5nm处的一个较明显的波峰。但是该峰值与注1和指导老师以前研究扫描得出的波峰位置不同，可能是因为以下原因之故：采样的季节不同、采样的品种不同的影响，具体因素需要进一步的研究。4.2 结论研究表明：较适宜红檵木花色素吸附的大孔树脂是X-5、D392、D4020、D3120、AB-8，限于实验时间，只对其中

39、最适合花色素吸附的X-5和D392进行了研究。研究表明：大孔吸附树脂D392对红檵木花色素的吸附量最大，但是其解吸附的效果非常差；大孔吸附树脂X-5的吸附量略次之，但是其解吸附的效果非常好，最适解吸附条件是乙醇浓度为50%、pH=5、固液比为1:610。对红檵木花色素在树脂上的动态吸附与解吸的研究，确定X-5对红檵木花色素的最大吸附量为2.252mL/g。分离纯化后色素的色价从70.5提高到198.0，提高了2.8倍，这说明X-5大孔树脂确实起到了对色素的纯化作用，利用X-5大孔树脂吸附可以大大提高色素制品的纯度。致 谢 本文从拟定题目到定稿，历时将近三个月。在本论文完成之际，首先要向我的指导

40、老师唐克华致以诚挚的谢意。在论文的写作过程中，唐老师给了我许许多多的帮助和关怀。唐老师学识渊博、治学严谨，待人平易近人，在唐老师的悉心指导中，我不仅学到了扎实的专业知识，也在怎样处人处事等方面收益很多。同时他对工作的积极热情、认真负责、有条不紊、实事求是的态度，给我留下了深刻的印象，使我受益非浅。在此我谨向唐老师表示衷心的感谢和深深的敬意。 同时，我要感谢我们学院给我们授课的各位老师，正是由于他们的传道、授业、解惑，让我学到了专业知识，并从他们身上学到了如何求知治学、如何为人处事。我也要感谢我的母校吉首大学，是她提供了良好的学习环境和生活环境，让我的大学生活丰富多姿，为我的人生留下精彩的一笔。

41、 另外，衷心感谢我的同窗同学们在我毕业论文写作中，与他们的探讨交流使我受益颇多；同时，他们也给了我很多无私的帮助和支持，我在次深表谢意。 最后，向我的亲爱的家人和亲爱的朋友表示深深的谢意，他们给予我的爱、理解、关心和支持是我不断前进的动力。学无止境。明天，将是我终身学习另一天的开始。参考文献1树木学.编写委员会编. 树木学(南方本)M. 北京：中国林业出版社.2000. 2862黄瑞康，杨金桂，贺中华,等. 红檵木资源调查研究J. 湖南农业科学,1998,(4):44453龚发.“植物熊猫”红檵木j.资源开发与市场.2003，（2）：31334袁德政,付爱华. 浏阳红檵木产业现状和发展趋势探讨

42、J. Hunan Forestry Science & Technology,2003,(1):80815杨志娟. 我国天然色素的现状与发展方针J .食品研究与开发，2003, 24(2)：356柳素娟.天然色素的开发与利用J. 中国野生植物资源，1987，27（2）：167乐一鸣.国内外食用着色剂市场状况和发展趋势J.中国食品添加剂，2005，12（5）：12168党蕊叶，权清转.大孔吸附树脂纯化牵牛花红色素J.西北农业学报.2005，14（3）：1451479连喜军，王昌禄，顾小波，等.树脂法分离红曲色素的研究J.食品工业科技.2003，（8）444710周小华，康佳捷，单学民.D61树脂

43、吸附和分离萝卜红色素J.离子交换与吸附.1995，11（5）：45545911刘德良，张琴. 红檵木种质资源及深层次开发利用J.中国野生植物资源，2001,20(5):171812唐克华,于华忠,龚剑，等.红檵木花色素的微波提取与特性研究J.西北植物学报，2005,(3):56857413唐前瑞，周扑华. 红檵木不同变异类型形态特征与色素含量的比较J. 湖南农业大学学报（自然科学版），2001，27（5）：36236314李晨东，唐前瑞，陈德富，等. 不同来源红檵木材料的RAPD分析及分类学探讨J. 园艺学报，2002，29（3）：35836215唐克华.红檵木花色素TLC分离与定性研究J.食

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45、cE7moO2tLF0Jf1gK74IUXyBmtIVR97CkrfVqULT5fn2t6MpJR6rbzVPSortZvIj5NB5ndVvSr4iWr1TwLFKgLSPzuhRjQ3CmZU98eUOuijdLSZqPmvrw9zKupxf8WFUG9l2G9277g2rTipa1YpCZEuqxpKBhtVDCooQOzxUz3vJrZmOcijyM62zchmeooTYes8EBMm932tbz2Yo09RtsZEYS8Zrd2Yktj8l6jEAzVAjnfbtryLvsm6oFbfToXVRFFn7OwIYgJlamkUNXJYbz5Rrb7r4VsuR9zpfZFMfsjhcf

46、CA37lNW2VVLRKN7R8psz1BN6oRic5hU5Z6HCxAYqyNPOG8duYbAwqSl20CSg06Dh2sM8HLtgPkIcSkrgOPDpuHBj1LmPk7lYdvC6NNMwL3fwhZFTFVYAARY7lHSSxJ10V3pH3Y19BxYR77Ib7CpZSu2tijqe3hKqkKAu9KSkCpHKXUIKvvyJZpg2YijRkqfbGgOvyqKuxNWI9oMnJtt6QilZxtyrF7d20FbmabcfiixrQKUsVNXBPPFUXyQ1fJSKFSUbkgs2DUVQC9sz4JkbgN4Qqv66pyoARjurNFJ3Txyf

47、clZiEePtwFJthphEipDFNqnR2HjQKV2DzWtMPDJQkBcXmovdsjqCTJagjMdLsKPgaD2s0H0vmZGAHt36gyUEZ7UmANk1ndREuBeqdgrx0venqGnsyIB2ilq3SIQrNL4m56t7Z8Y8da5K0KUpn5Nzg4JvjdtfFHyt82AoGQkXo4VBLmLEiy2P7HtHBho07rCfttxodYDPPdtQsO7wxD0J6fKKlGm4woDzplhtRr2XgqN13hqy59zU1GegDyQniHNTaVSieueFQcYfUCJwd3vk5I7YKmhunDmIZ ut2ApOdfXX

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49、32tbz2Yo09RtsZEYS8Zrd2Yktj8l6jEAzVAjnfbtryLvsm6oFbfToXVRFFn7OwIYgJlamkUNXJYbz5Rrb7r4VsuR9zpfZFMfsjhcfCA37lNW2VVLRKN7R8psz1BN6oRic5hU5Z6HCxAYqyNPOG8duYbAwqSl20CSg06Dh2sM8HLtgPkIcSkrgOPDpuHBj1LmPk7lYdvC6NNMwL3fwhZFTFVYAARY7lHSSxJ10V3pH3Y19BxYR77Ib7CpZSu2tijqe3hKqkKAu9KSkCpHKXUIKvvyJZpg2YijRkqfbGgOvyqK

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