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1、碱 性 磷 酸 酶 K m值 的 测 定 底 物 浓 度酶 浓 度pH温 度激 活 剂抑 制 剂 研 究 一 种 因 素 的 影 响 时 ， 其 余 各 因 素 均 恒 定 。影 响 酶 促 反 应 的 因 素 底 物 浓 度 对 反 应 速 率 影 响在 其 他 因 素 不 变的 情 况 下 ， 底 物 浓 度对 反 应 速 率 的 影 响 呈矩 形 双 曲 线 关 系 。 S： 底 物 浓 度V： 不 同 S时 的 反 应 初 速 度Vmax： 最 大 反 应 速 度 (maximum velocity) m： 米 氏 常 数 (Michaelis constant) VmaxS K m
2、+ S K m值 K m等 于 酶 促 反 应 速 度 为 最 大 反 应 速 度 一 半 时的 底 物 浓 度 。 意 义 ：a) K m是 酶 的 特 征 性 常 数 之 一 ；b) K m可 近 似 表 示 酶 对 底 物 的 亲 和 力 ；c) 同 一 酶 对 于 不 同 底 物 有 不 同 的 K m值 。 K m S 2 K m + S Vmax VmaxS 双 倒 数 作 图 法 VmaxS K m+SV = （ 林 贝 氏 方 程 ） + 1/V= K mVmax 1/Vmax 1/S 两 边 同 取 倒 数 m值 与 max值 的 测 定 注 意 事 项 1 底 物 和 酶
3、取 样 准 确 2 保 温 时 间 准 确 1 2 3 4 5 6 7加 入 酶 的 时间加 入 碱 性 溶 液终 止 反 应 的 时 间 9:00:00 9:00:30 9:01:30 9:02:00 9:02:30 9:03:009:01:009:15:00 9:15:30 9:16:00 9:16:30 9:17:00 9:17:30 9:18:00保 证 每 个 试 管 的 反 应 时 间 为 15分 钟 实 验 报 告 1 绘 制 矩 形 双 曲 线 图 2 绘 制 双 倒 数 图 ， 并 通 过 双 倒 数 图 读 出 碱性 磷 酸 酶 对 磷 酸 本 二 钠 的 K m值 注 意 事 项 1 做 如 下 表 格 2 可 电 脑 作 图 3 若 人 工 作 图 ， 在 坐 标 轴 上 禁 止 出 现 分 数 (1/2,1/16) 4 实 验 的 最 终 目 的 是 测 得 K m值 ， 因 此 实 验 报 告 最 终必 须 得 出 结 论 ： K m值 等 于 多 少1 2 3 4 5 6 7AbsS1/ABS1/S
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