致泻大肠埃希式菌的检验课件.ppt

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1、 俗 称 大 肠 杆 菌1、 革 兰 氏 阴 性 菌2、 杆 状 、 两 端 钝 圆 、 周 生 鞭毛 、 无 荚 膜3、 需 氧 及 兼 性 厌 氧4、 能 在 普 通 琼 脂 上 生 长 普 通 大 肠 埃 希 氏 菌 Escherichia Coli扫 描 照 片 v污 染 水 源 和 土 壤 ， 进 而 污 染 食 物v肉 类 食 品v乳 制 品v水 产 品 等 v 肠 道 内 感 染 腹 泻 、 食 物 中 毒 、 肠 热 症v 肠 道 外 感 染 鼠 疫 （ 烈 性 传 染 病 ） 、 泌 尿 道 感 染 、 肺 炎 、 脑 膜 炎 、 伤 口 化 脓 、 败 血 症 检 样 25

2、g+营 养 肉 汤 225mL乳 糖 发 酵 阳 性的 发 酵 管 36 1 6h肠 道 菌 增 菌 肉 汤麦 康 凯EMB36 1 18h24h乳 糖 发 酵 或 不 发 酵 的 菌 落 3个 5个 ，氧 化 酶 ， 革 兰 氏 阴 性 杆 菌TSI、 靛 基 质 、 pH7.2尿 素 KCN、 赖 氨 酸 、 动 力TSI底 层 +， H2S，KCN， 尿 素 血 清 学 试 验 非 左 述 的 各 种反 应 结 果非 大 肠 埃 希 氏 菌报 告 （ 一 ） 检 验 步 骤 检 样 样 品 处 理 增 菌 培 养 伊 红美 蓝 （ EMB） 平 板 分 离 培 养 生 化 鉴 定 血 清

3、 学 鉴 定 报 告 1、 增 菌 培 养v以 无 菌 手 续 称 取 检 样 25 g， 加 在 225mL营 养肉 汤 中 ， 以 均 质 器 打 碎 1 min或 用 乳 钵 加 灭菌 砂 磨 碎 。v取 出 适 量 ， 接 种 乳 糖 胆 盐 培 养 基 ， 以 测 定大 肠 菌 群 MPN， 其 余 的 移 入 500mL广 口 瓶内 ， 于 36 1 培 养 6h。v挑 取 1 环 ， 接 种 于 1管 30mL肠 道 菌 增 菌 肉汤 内 ， 于 42 培 养 18h。 2、 分 离 培 养v 将 乳 糖 发 酵 阳 性 的 乳 糖 胆 盐 发 酵 管 和 增 菌液 分 别 划

4、线 接 种 麦 康 凯 或 伊 红 美 蓝 琼 脂 平板 ；v污 染 严 重 的 检 样 ， 可 将 检 样 匀 液 直 接 划 线接 种 麦 康 凯 或 伊 红 美 蓝 平 板 ， 于 36 1 培养 18 24h， 观 察 菌 落 。v不 但 要 注 意 乳 糖 发 酵 的 菌 落 ， 同 时 也要 注 意 乳 糖 不 发 酵 和 迟 缓 发 酵 的 菌 落 。 EMB培 养 基黑 紫 色 或 紫 红色 ， 圆 形 ， 边缘 整 齐 ， 表 面光 滑 ， 湿 润 ，常 具 有 金 属 光泽 ， 也 有 的 呈紫 黑 色 ， 不 带或 略 带 金 属 光泽 。菌 落 特 征 ： 3、 生 化

5、 检 验v 自 鉴 别 平 板 上 直 接 挑 取 数 个 菌 落 分 别 接 种 三 糖 铁琼 脂 （ TSI） 或 克 氏 双 糖 铁 琼 脂 （ KI） 。 同 时 将 这些 培 养 物 分 别 接 种 蛋 白 胨 水 、 半 固 体 、 pH7.2 尿素 琼 脂 、 KCN 肉 汤 和 赖 氨 酸 脱 羧 酶 试 验 培 养 基 。以 上 培 养 物 均 在 36 培 养 过 夜 。v TSI斜 面 产 酸 或 不 产 酸 ,底 层 产 酸 , H2S阴 性 ,KCN阴 性 和 尿 素 阴 性 的 培 养 物 为 大 肠 埃 希 氏 菌 .v TSI底 层 不 产 酸 或 H2S、 K

6、CN、 尿 素 有 任 何 一 项为 阳 性 的 培 养 物 ， 均 非 大 肠 埃 希 氏 菌 。 v 必 要 时 做 氧 化 酶 实 验 或 革 蓝 氏 染 色 镜 检 。 v 三 糖 铁 琼 脂 试 验 ： 只 能 利 用 葡 萄 糖 的 细 菌 ，葡 萄 糖 被 分 解 产 酸 可 使 斜 面 先 变 黄 ， 但 因量 少 ， 生 成 的 少 量 酸 ， 因 接 触 空 气 而 氧 化 ，加 之 细 菌 利 用 培 养 基 中 含 氮 物 质 ， 生 成 碱性 产 物 ， 故 使 斜 面 后 来 又 变 红 ， 底 部 由 于是 在 厌 氧 状 态 下 ， 酸 类 不 被 氧 化 ，

7、所 以 仍保 持 黄 色 。 而 发 酵 乳 糖 的 细 菌 ， 则 产 生 大量 的 酸 ， 使 整 个 培 养 基 呈 现 黄 色 。 细 菌 分解 含 硫 氨 基 酸 ， 产 生 H2S， 与 FeSO4发 生 反应 形 成 FeS。 大 肠 杆 菌 ， 能 分 解 葡 萄 糖 产 酸 产 气 ， 大 多 数 能 分解 乳 糖 ， 不 产 生 H 2S。 靛 基 质 试 验 ： 细 菌 分 解 蛋 白 质 中 的 色 氨 酸 产生 吲 哚 ， 吲 哚 与 对 二 氨 基 苯 甲 醛 作 用 ， 形 成玫 瑰 吲 哚 而 成 红 色 。 v 脲 酶 试 验 ： 细 菌 分 解 尿 素 产

8、生 两 分 子 氨 ， 使 培 养 基pH升 高 ， 指 示 剂 酚 红 显 示 出 红 色 ， 即 证 明 细 菌 有 脲酶 。v 动 力 试 验 ： 有 动 力 的 细 菌 会 沿 着 穿 刺 线 扩 散 生 长 。v 赖 氨 酸 脱 羧 试 验 ： 细 菌 从 赖 氨 酸 脱 去 羧 基 （ -COOH） ， 导 致 培 养 基 pH变 碱 ， 指 示 剂 溴 麝 香 草 酚蓝 就 显 示 出 蓝 色 ， 试 验 结 果 为 阳 性 ， 如 果 细 菌 不 能脱 酸 ， 培 养 基 不 变 则 为 黄 色 。 4、 血 清 学 试 验 v 假 定 试 验 ： 挑 取 经 生 化 试 验

9、证 实 为 大 肠 埃 希 菌 的琼 脂 培 养 物 ， 用 致 病 性 大 肠 埃 希 氏 菌 、 侵 袭 性 大肠 埃 希 氏 菌 和 产 肠 毒 素 大 肠 埃 希 氏 菌 多 价 O血 清和 出 血 性 大 肠 埃 希 氏 菌 O157血 清 做 玻 片 凝 集 试验 。v 当 与 某 一 种 多 价 O血 清 凝 集 时 ， 再 与 该 多 价 血 清所 包 含 的 单 价 O血 清 做 试 验 。 v 致 泻 大 肠 埃 希 氏 菌 所 包 括 的 O抗 原 群 。 如 与 某 一单 价 O血 清 呈 现 强 凝 集 反 应 ， 即 为 假 定 试 验 阳 性 。 OK多 价 1 O55： K59（ B5） O86： K61（ B7） O111： K58（ B4） O127a： K63（ B8）OK多 价 2 O26： K60（ B6） O125： K70（ B15） O126： K71（ B16） O128： K67（ B12）OK多 价 3 O44： K74（ L） O114： K90（ B） O119： K69（ B14） O142： K86（ B） 5、 结 果 报 告 v根 据 以 上 生 化 试 验 和 血 清 学 试 验 结 果 作 出报 告 。