推荐精选体液免疫球蛋白测定

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1、体液免疫球蛋白测定体液免疫球蛋白测定P188P1881 u抗体抗体（antibody,Ab)antibody,Ab)：是：是B B细胞识别抗原后细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的能与相应抗原特增殖分化为浆细胞所产生的能与相应抗原特异性地结合球蛋白。异性地结合球蛋白。(生物学功能上的概念生物学功能上的概念)u抗体主要存在于血清等体液中，故将抗体介抗体主要存在于血清等体液中，故将抗体介导的免疫称为体液免疫。导的免疫称为体液免疫。几个概念几个概念2 免疫球蛋白免疫球蛋白（immunoglobulinimmunoglobulin，IgIg）：具有具有抗抗体活性体活性或或化学结构与抗体相似的化学结构

2、与抗体相似的球蛋白球蛋白。（化学结构上的概念）（化学结构上的概念）Ab与与Ig的联系的联系 1.所有的所有的Ab都是都是Ig 2.Ig并非都是并非都是Abu分泌型分泌型（secreted Ig，sIg）：存在于血清等体液存在于血清等体液中，如中，如AbAbu膜型膜型（membrane Ig，mIg）是是B B细胞上的抗原受细胞上的抗原受体。体。3 IgIg的基本结构：的基本结构：四肽链结构四肽链结构,所有所有IgIg的基本单位都是四条肽链的对的基本单位都是四条肽链的对称结构。两条重链（称结构。两条重链（H H）和两条轻链（）和两条轻链（L L）。每条）。每条重链和轻链分为氨基端和羧基端。重链和

3、轻链分为氨基端和羧基端。4 免疫球蛋白分类及特性免疫球蛋白分类及特性v重重 链链 性性 质质，I g分分 5类类：IgG()、IgA()、IgM()、IgD()、IgE()v轻链性质，轻链性质，Ig分分2型：型：、vIg占血浆蛋白总量：占血浆蛋白总量：20%vIg含量：血清含量：血清 IgG、IgA、IgM：g/L、IgD、IgE：mg/L 体液体液 IgG、IgA、IgM：mg/L v检测意义：反应机体的免疫功能、诊断疾病检测意义：反应机体的免疫功能、诊断疾病5 五类免疫球蛋白的特点和功能五类免疫球蛋白的特点和功能6 第一节第一节 体液中体液中IgGIgG、IgAIgA、IgM IgM 测测

4、定的临床应用定的临床应用体液免疫球蛋白测定主要指对人体的血液、尿体液免疫球蛋白测定主要指对人体的血液、尿液、脑脊液等样本中的液、脑脊液等样本中的IgGIgG、IgAIgA、IgM IgM 定量检定量检测，由于免疫球蛋白测，由于免疫球蛋白IgGIgG、IgAIgA、IgM IgM 在人体体在人体体液中含量相对较高，测定快速，临床意义明确，液中含量相对较高，测定快速，临床意义明确，临床应用较广泛临床应用较广泛7 u IgGIgG是血清中含量最高是血清中含量最高(占占80%)80%)的免疫球蛋白，是血液的免疫球蛋白，是血液和细胞外液中的主要抗体，也是机体再次免疫的主要抗体。和细胞外液中的主要抗体，也

5、是机体再次免疫的主要抗体。u IgAIgA分为血清型分为血清型A1A1和分泌型和分泌型A2A2，是参与黏膜局部免疫的，是参与黏膜局部免疫的主要抗体，主要存在于胃肠道和支气管分泌液、初乳、唾主要抗体，主要存在于胃肠道和支气管分泌液、初乳、唾液和泪液中。液和泪液中。u IgMIgM是分子量最大的免疫球蛋白，是个体发育过程中最是分子量最大的免疫球蛋白，是个体发育过程中最早合成和分泌的抗体，也是抗原刺激诱导的体液免疫应答早合成和分泌的抗体，也是抗原刺激诱导的体液免疫应答中最早出现的抗体。中最早出现的抗体。测定方法测定方法 单向环状免疫扩散法单向环状免疫扩散法(耗时、重复性差耗时、重复性差)免疫浊度法（

6、速率散射比浊）免疫浊度法（速率散射比浊）常用常用8 年龄：血液年龄：血液IgIg随年龄、性别、血型、种族及测定随年龄、性别、血型、种族及测定方法不同有所差别，各实验室要建立自己的参方法不同有所差别，各实验室要建立自己的参考范围考范围一、血液免疫球蛋白测定的临床意义一、血液免疫球蛋白测定的临床意义高高IgIg血症血症 多克隆多克隆IgIg增高（感染）增高（感染）单克隆单克隆IgIg增高（免疫增殖病）增高（免疫增殖病）低低IgIg血症血症:先天性低先天性低IgIg血症（免疫缺陷病）血症（免疫缺陷病）获得性低获得性低IgIg血症血症(蛋白丢失、淋巴系统肿蛋白丢失、淋巴系统肿瘤、使用免疫抑制剂瘤、使用

7、免疫抑制剂)9 正常人尿液中的正常人尿液中的IgIg含量甚微，当机体的免疫含量甚微，当机体的免疫功能异常或炎症反应引起肾脏疾病时，可导功能异常或炎症反应引起肾脏疾病时，可导致肾小球滤过膜分子屏障破坏或电荷屏障受致肾小球滤过膜分子屏障破坏或电荷屏障受损，从而引起球蛋白及其他大分子蛋白质漏损，从而引起球蛋白及其他大分子蛋白质漏出增多。出增多。二、尿液免疫球蛋白测定的临床意义二、尿液免疫球蛋白测定的临床意义u判断肾小球滤膜受损程度：判断肾小球滤膜受损程度：选择性蛋白尿指数选择性蛋白尿指数SPISPIu可根据尿内可根据尿内IgIg增高的类型帮助鉴别诊断肾小球疾病的种类增高的类型帮助鉴别诊断肾小球疾病的

8、种类u尿中游离轻链的检测对诊断轻链病和尿中游离轻链的检测对诊断轻链病和MMMM有重要意义有重要意义10 三、脑脊液免疫球蛋白测定的临床意义三、脑脊液免疫球蛋白测定的临床意义 生理情况下，生理情况下，IgIg根据其分子量大小，通过根据其分子量大小，通过血脑屏障的难易度不同，血脑屏障的难易度不同，IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM在在脑脊液中的浓度递减。病理状态时，血脑屏脑脊液中的浓度递减。病理状态时，血脑屏障通透性增加，脑脊液组分发生改变。障通透性增加，脑脊液组分发生改变。u血脑屏障受损程度：血脑屏障受损程度：白蛋白商值、白蛋白商值、CSF-IgGCSF-IgG指数指数u增高有临床意义：多

9、发性硬化症、中枢神经系统感染增高有临床意义：多发性硬化症、中枢神经系统感染11 第二节血液第二节血液IgDIgD和和IgEIgE的测定及临床应用的测定及临床应用u正常人血液中正常人血液中IgDIgD含量很低（含量很低（0.2%0.2%），目），目前生物学功能尚不清楚前生物学功能尚不清楚uIgEIgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，主要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞白，主要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌，为亲细胞抗体，引起分泌，为亲细胞抗体，引起I I型超敏反应；型超敏反应；与机体抗寄生虫免疫也可能有关。与机体抗寄生虫免疫也可能有关。12 一、IgDIgD的测定及

10、临床意义的测定及临床意义u测定方法：放免、免疫比浊、测定方法：放免、免疫比浊、ELISA(ELISA(常用常用)u临床意义：血液中含量波动范围大，各实临床意义：血液中含量波动范围大，各实验室最好使用固定的试剂盒，建立自己的验室最好使用固定的试剂盒，建立自己的参考范围参考范围13 二、IgEIgE的测定及临床意义的测定及临床意义u测定方法：测定方法：总总IgEIgE测定：测定：放射免疫分析法放射免疫分析法 化学发光免疫分析法化学发光免疫分析法(常用常用)免疫比浊法免疫比浊法 酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法(常用常用)特异性特异性IgEIgE测定：测定：免疫斑点法免疫斑点法 酶联免疫吸附法酶联免疫吸

11、附法u临床意义：临床意义：增高：增高：变态反应性疾病、寄生虫感染、病毒感染、自身免变态反应性疾病、寄生虫感染、病毒感染、自身免疫性疾病。疫性疾病。降低：降低：意义不大意义不大14 第三节第三节 血清血清IgGIgG亚类测定及临床意义亚类测定及临床意义IgIg亚类：亚类：IgG1IgG1、IgG2IgG2、IgG3IgG3、IgG4IgG4，其含量依次下降，其含量依次下降测定方法：测定方法：单向免疫扩散法单向免疫扩散法 免疫比浊法（常用）免疫比浊法（常用）放射免疫分析法放射免疫分析法 酶联免疫吸附法（常用）酶联免疫吸附法（常用）临床意义：临床意义：IgGIgG亚类可能和感染复发、亚类可能和感染复

12、发、免疫缺陷免疫缺陷和自身免疫性疾病有和自身免疫性疾病有关，因而测定关，因而测定IgGIgG亚类对上述疾病有重要意义。即使当总亚类对上述疾病有重要意义。即使当总IgGIgG水平在正常范围内，水平在正常范围内，IgGIgG的亚类分配也可能发生紊乱的亚类分配也可能发生紊乱 15 第四节第四节 M M蛋白测定及临床意义蛋白测定及临床意义 M蛋白：蛋白：B淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖产生的淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖产生的一种在氨基酸组成及顺序上十分均一的异常单一种在氨基酸组成及顺序上十分均一的异常单克隆免疫球蛋白克隆免疫球蛋白u 临床上多见于多发性骨髓瘤、高丙种球蛋临床上多见于多发性骨髓瘤、高丙

13、种球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等 16 M M蛋白测定蛋白测定蛋白区带电泳：蛋白区带电泳：经典方法经典方法 计算蛋白含量和百分比计算蛋白含量和百分比免疫比浊法：免疫比浊法：免疫球蛋白定量免疫球蛋白定量 准确性高、快速准确性高、快速免疫电泳：免疫电泳：M M蛋白分型蛋白分型免疫固定电泳：免疫固定电泳：M M蛋白分型及鉴定，分辨蛋白分型及鉴定，分辨 率高率高(最常用最常用)各方法视具体情况合理选用各方法视具体情况合理选用17 u蛋白质区带电泳是血清蛋白的经典分析方法，血清蛋白质区带电泳是血清蛋白的经典分析方法，血清（或尿液）标本中不同性质的蛋白质（或尿

14、液）标本中不同性质的蛋白质由于其等电点，由于其等电点，分子量和分子形状各不相同，其电泳速度就不同，分子量和分子形状各不相同，其电泳速度就不同，可明显分开形成不同的区带，与正常的电泳图谱进可明显分开形成不同的区带，与正常的电泳图谱进行比较，很容易发现患者电泳图谱中不一样的行比较，很容易发现患者电泳图谱中不一样的狭窄狭窄而浓缩而浓缩的集中带，即的集中带，即M M区带。区带。u这是由于这是由于M M蛋白的化学结构高度均一，因而其电泳蛋白的化学结构高度均一，因而其电泳迁移率十分一致。如果将这些区带电泳图谱扫描，迁移率十分一致。如果将这些区带电泳图谱扫描，还可计算出异常蛋白的含量和百分比。这种还可计算出

15、异常蛋白的含量和百分比。这种M M区带区带较多见于较多见于或或区，偶亦可见于区，偶亦可见于区。区。u该法方便，该法方便，是筛选是筛选M M蛋白的最基本方法蛋白的最基本方法。但是区带。但是区带电泳不能判定免疫球蛋白的类型，最终还需用特异电泳不能判定免疫球蛋白的类型，最终还需用特异性抗体进行鉴定。性抗体进行鉴定。一、血清蛋白区带电泳血清蛋白区带电泳18 gba2白蛋白a1:a1酸性糖蛋白,a1抗胰蛋白酶:结合珠蛋白,a2 巨球蛋白,a脂蛋白,铜蓝蛋白:转铁蛋白,血液结合素,C3补体,b脂蛋白:免疫球蛋白血清蛋白电泳血清蛋白电泳19 正常的电泳图谱正常的电泳图谱20 出现在出现在区域的单克隆免疫球蛋

16、白区域的单克隆免疫球蛋白21 二、血清免疫球蛋白定量测定二、血清免疫球蛋白定量测定u血清免疫球蛋白定量测定也可作为检测血清免疫球蛋白定量测定也可作为检测M蛋蛋白的初筛试验。白的初筛试验。免疫球蛋白定量测定较常用免疫球蛋白定量测定较常用的方法有单向扩散法与免疫浊度法，前者较的方法有单向扩散法与免疫浊度法，前者较为简便，后者更为准确迅速为简便，后者更为准确迅速 u免疫球蛋白免疫球蛋白定量检测，有助于丙种球蛋白病定量检测，有助于丙种球蛋白病的诊断，并对丙种球蛋白病的良、恶性鉴别的诊断，并对丙种球蛋白病的良、恶性鉴别有帮助。恶性单克隆丙种球蛋白病常呈现某有帮助。恶性单克隆丙种球蛋白病常呈现某一类丙种球

17、蛋白的显著增高，大多在一类丙种球蛋白的显著增高，大多在30g/l30g/l以以上；在良性丙种球蛋白病的血清标本中，上；在良性丙种球蛋白病的血清标本中，M M蛋蛋白多在白多在20g/l20g/l以下以下 23 三、免疫电泳（常规方法）三、免疫电泳（常规方法）u疑为丙种球蛋白病的患者，经血清蛋白区带电泳和免疫球疑为丙种球蛋白病的患者，经血清蛋白区带电泳和免疫球蛋白测定，已基本证实是否有免疫球蛋白的异常增高和其蛋白测定，已基本证实是否有免疫球蛋白的异常增高和其含量的多少，但是增高的含量的多少，但是增高的M M蛋白究竟是哪一类免疫球蛋白，蛋白究竟是哪一类免疫球蛋白，仍需进一步分类鉴定，常应用各种类型的

18、特异性抗血清，仍需进一步分类鉴定，常应用各种类型的特异性抗血清，做不同形式的电泳或免疫扩散。做不同形式的电泳或免疫扩散。u免疫电泳是将区带电泳和免疫扩散结合起来的一种免疫学免疫电泳是将区带电泳和免疫扩散结合起来的一种免疫学分析法。分析法。u一般多用抗一般多用抗IgGIgG、IgMIgM、IgAIgA、和和轻链等轻链等5 5种抗血种抗血清进行实验，用抗正常人血清作为对照。清进行实验，用抗正常人血清作为对照。M M蛋白与蛋白与相应抗体发生反应所出现的沉淀弧较为特殊，较普相应抗体发生反应所出现的沉淀弧较为特殊，较普通沉淀弧宽，凸出呈弓形，不难辨认通沉淀弧宽，凸出呈弓形，不难辨认 24 +-免疫电泳示

19、意图免疫电泳示意图25 四、免疫固定电泳（最常用）四、免疫固定电泳（最常用）u区带电泳区带电泳+沉淀反应：沉淀反应：将待测血清或其他标本在琼脂将待测血清或其他标本在琼脂平板上作区带电泳，分离后于其上覆盖含抗平板上作区带电泳，分离后于其上覆盖含抗或或轻链或各类重链的抗血清滤纸，当抗体与某区带中轻链或各类重链的抗血清滤纸，当抗体与某区带中的单克隆免疫球蛋白结合后，便形成复合物而沉淀的单克隆免疫球蛋白结合后，便形成复合物而沉淀下来，再通过漂洗与染色，呈现浓而狭窄的着色区下来，再通过漂洗与染色，呈现浓而狭窄的着色区带，即可判断单克隆丙种球蛋白的轻链和重链型别带，即可判断单克隆丙种球蛋白的轻链和重链型别

20、u结合蛋白质电泳的高分辨率和抗原抗体反应的特异结合蛋白质电泳的高分辨率和抗原抗体反应的特异性性u测定时间短测定时间短(1.5-2h)(1.5-2h)、敏感性高（、敏感性高（0.5-1.5g/l0.5-1.5g/l）、）、结果直观易于分析判断结果直观易于分析判断 26 左图为左图为IgG IgG 型型,中图为中图为IgG IgG 型，右为正常型，右为正常 SP G AM SP G AM SPG AM 免疫固定电泳示意图免疫固定电泳示意图27 五、本五、本-周蛋白的检测周蛋白的检测u本周蛋白即尿中游离的本周蛋白即尿中游离的免疫球蛋白轻链免疫球蛋白轻链，其检测对轻链病的，其检测对轻链病的诊断是必不可

21、少的项目，并对多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋诊断是必不可少的项目，并对多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白病、重链病等疾病的诊断、鉴别和预后判断均有一定帮助白病、重链病等疾病的诊断、鉴别和预后判断均有一定帮助 u加热沉淀法加热沉淀法:本周蛋白在本周蛋白在pH5.0pH5.0的条件下，加热至的条件下，加热至50506060时出现沉淀，继续加热至时出现沉淀，继续加热至9090后又重新溶解。根据这种理化后又重新溶解。根据这种理化性质，又将其称为凝溶蛋白，故可根据这一特点，用化学方性质，又将其称为凝溶蛋白，故可根据这一特点，用化学方法进行检测。这种方法简便易行，但敏感度较低，也不能确法进行检测。这种方法简便易行，

22、但敏感度较低，也不能确定轻链的型别定轻链的型别 u免疫电泳分析法：尿标本用抗免疫电泳分析法：尿标本用抗和和型轻链抗血清进行免疫型轻链抗血清进行免疫电泳分析，游离轻链往往与其中一型的抗血清起反应，在电泳分析，游离轻链往往与其中一型的抗血清起反应，在-区附近形成一条致密的弓形沉淀弧。区附近形成一条致密的弓形沉淀弧。28 六、六、-Ig-Ig和和-Ig-Ig定量测定定量测定u样本：尿液、血液样本：尿液、血液 方法：单向免疫扩散法、免疫比浊法（常用，准方法：单向免疫扩散法、免疫比浊法（常用，准确、快速）确、快速）u应用：应用：M M蛋白血症的分型及鉴定蛋白血症的分型及鉴定u多数实验室确立的多数实验室确

23、立的/比率正常范围在比率正常范围在1.2-2.41.2-2.4，通过通过/比率测定有助于判断疾病类型和监测治疗比率测定有助于判断疾病类型和监测治疗效果效果29 u冷球蛋白是血清中的一种特殊蛋白质，在冷球蛋白是血清中的一种特殊蛋白质，在44时自发沉淀，在时自发沉淀，在3737时又可溶解时又可溶解 ，常利用这，常利用这种可逆性冷沉淀的特性对其进行测定。种可逆性冷沉淀的特性对其进行测定。u取患者外周血，分离出血清置取患者外周血，分离出血清置44冰箱中，一冰箱中，一般在般在242472h72h出现沉淀，若出现沉淀，若1 1周仍不出现沉淀者周仍不出现沉淀者方可判断为阴性。如形成沉淀，再置方可判断为阴性。

24、如形成沉淀，再置3737温育温育使其复溶，也可将冷沉淀物离心洗涤后做定性使其复溶，也可将冷沉淀物离心洗涤后做定性与定量分析。与定量分析。七、七、冷球蛋白的检测冷球蛋白的检测30 冷球蛋白的类型及临床意义冷球蛋白的类型及临床意义 I I型：为单克隆冷球蛋白型，占型：为单克隆冷球蛋白型，占25%25%40%;40%;多见多见于免疫增生性疾病如于免疫增生性疾病如MMMM 型：单克隆和多克隆混合型冷球蛋白，占型：单克隆和多克隆混合型冷球蛋白，占15%15%25%;25%;多见于自身免疫性疾病（多见于自身免疫性疾病（SLESLE、类风湿、类风湿、SSSS）型：多克隆混合型冷球蛋白，约占型：多克隆混合型冷球蛋白，约占50%;50%;多多见于传单以及感染性疾病见于传单以及感染性疾病 31 谢谢 谢！谢！32