培训资料-免疫血液学2、第五章血液成分制备

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1、输血前免疫血液学检查及血液成分制备 输血前检查的目的和要求 选择与患者血型配合的各种血液成分，使之能在患者体内有效地存活，无不良反应。即输入的红细胞在患者体内必须不溶血，输入的血浆成份不导致患者红细胞破坏，也就是供者与患者之间的血液在免疫血液学方面“相溶”从而达到安全、有效输血的目的。 二、输血前检查的内容包括以下几个方面： 1、患者的病史和标本等的检查、核对及处理。 2、受血者、献血者ABO和Rh血型鉴定。 3、不规则抗体的筛选和鉴定。 4、交叉配血试验 5、标签和发血。 （一）标本的要求 1、标本必须经鉴定和标记，确实来自患者和献血者。 2、符合患者体内状态，能代表患者当前的免疫学情况，

2、3、防止血样的稀释和溶血的产生。（输液患者对侧抽血） 4、最好用血清（血浆有纤维蛋白原的干扰）配血 5、输血后所有标本（患者及供者）保存2-8一周。 （二）ABO血型鉴定用抗A和抗B试剂检测红细胞抗原，称之正定型，用A型和B型、O型红细胞检测血清中抗体称之反定型人ABO血型由红细胞抗原和血清抗体所决定 ，其正、反定型相符。见表 ABO血型常规定型 正定型（检查红细胞抗原） 反定型（检查血清中抗体）血型 红细胞标本+抗体试剂 血清标本+标准红细胞试剂 抗A 抗B A细胞 B细胞 O细胞 A型 + - - + - B型 - + + - - O型 - - + + - AB型 + + - - - 2、

3、ABO血型正反定型不符及其原因可能因为操作技术，管理上问题也可能是红细胞和血清标本问题 （1）技术操作、管理错误假阴性结果：试管中未加入抗体试剂或血清 未能认识溶血也是阳性反应 血清或试剂与红细胞比例太小 离心速度时间不够 使用了失效的抗体和红 细胞试剂 没能正确地记录和解释试验结果。假阳性结果：离心速度过大和离心时间过长 使用了受到细菌污染的试剂 使用了不干净的试管、器皿 错误记录、解释试验结果 （2）红细胞标本相关问题 某些ABO亚型、白血病或其它恶性疾病病人红细胞ABO抗原太弱（或缺乏），抗A抗B试剂未能出现预期的凝集反应。 红细胞获得性或遗传性的异常，如获得性B抗原红细胞或T n/T多

4、凝集红细胞，试剂可与这些异常的红细胞反应悬浮红细胞的血清或血浆中含的型物质浓度高，中和了抗体试剂，出现假阴性，如卵巢囊肿病例。病人红细胞自凝，病人血清中高活性，高浓度自身凝集严重致敏（包被）自身红细胞，以至在稀释液存在下，自发地发生凝集，而不是抗体试剂的特异性作用。近期输血：输入过与自身血型不一致的血液，使标本成为“混合外观凝集” （3）血清标本的问题异常的血浆蛋白：受检查血浆中异常的白蛋白，球蛋白比例（某些肝病、传染病如结核、多发性骨髓瘤等疾病患者球蛋白增加）高浓度的纤维蛋白原（心梗、感染、外伤、肿瘤患者）均易使红细胞发生缗钱状凝集现象。免疫抑制疾病或免疫抑制治疗的病人血清中ABO抗体减少或

5、消失。年龄：老年人随年龄增高，ABO抗体减弱，婴儿血清抗体是阴性或很弱（0-6月不做反定型）不规则抗体的存在：反复多次输血者妊娠者血清中有ABO血型以外的同种异型抗体，如盐水抗M、高效价冷凝集素抗I。 （三）Rh（D）定型和定型中应注意的问题假阳性结果：受检细胞已被免疫球蛋白致敏， 受检细胞与血清孵育的时间过长 多凝集细胞造成定型的假阳性 器材或抗血清被污染，造成的假阳性假阴性结果：受检细胞浓度太高，与抗血清比例失调 漏加或错加定型血清 定型血清使用方法错误 抗血清保存不当，导致失效 关于弱D（传统称Du型）弱D型（ Du型）是D的弱抗原，这种抗原与大部分盐水抗D试剂不产生直接凝集反应，而与部

6、分的IgG抗D血清用间接抗球蛋白试验反应阳性弱D （ Du型）鉴定：三种不同批号的IgG抗D定型如果全部阴性方可认定患者为RhD阴性，否则为弱D弱D 临床意义：作为供血者DuRhD阳性 作为受血者DuRhD阴性 （四）不规则抗体筛选和鉴定 1对受血者的血清做抗体筛选，以发现有临床意义的不规则抗体，不规则抗体是指抗A抗B以外的血型抗体抗体筛选的原则让受检血清与已知的试剂红细胞起反应，以发现在37 中有反应的抗体方法：盐水法、凝胶法、聚凝胺法、抗球蛋白试验等抗体筛选阳性的，则须做鉴定试验，以确定其特异性 （五）交叉配血试验 1、要求及内容主侧：受血者血清+供者红细胞检测对供者红细胞起反应的抗体。次

7、侧：供者血清+受者红细胞检测对受者红细胞起反应的抗体。自身对照：Rs+Rc显示自身抗体、直抗阳性。 2、方法盐水交叉配血试验：检出IgM类抗体。检测不完全抗体的交叉配血试验蛋白酶（木瓜酶、波萝酶）传统抗人球蛋白试验新方法：促凝剂（凝聚胺）微柱凝胶试验 3、配血中异常原因与处理缗线状假凝集特点：显微镜下红细胞膜完整，细胞界限清晰地成线串聚集37、室温结果一样，不受温度影响，但加盐水即可散开。解决方法：被检细胞用盐水洗涤后再配血。自身抗体造成配血不合，共同特点是患者血清能凝集自身红细胞天然自身冷凝激素获得性病理性自身冷抗体：直抗阳性/室温较37强/Rs+OcRs+Rc自免溶贫血清中的温型自身抗体，

8、直抗阳性/37 室温 血清中的不规则凝集素 三、常规和紧急情况下的发血程序血液的申请：医生填写输血申请单护士抽取血样，送至血库检验师进行血型鉴定、抗体筛选选择血液，交叉配血填写输血记录单发血给护士 第七节 新生儿溶血病一、新生儿溶血病的发病机制二、新生儿溶血病的临床症状三、新生儿溶血病的血清学检查四、新生儿溶血病治疗与预防五、新生儿换血和输血 什么是新生儿溶血病？ 新生儿溶血病（hemolytic disease of the newborn ）简称HDN。指母婴血型不合，孕母体内存在着与胎儿红细胞不配合的IgG性质的血型抗体，该抗体通过胎盘进入胎儿体内，作用于胎儿红细胞使之产生不同程度溶血。

9、 二、临床症状 被IgG抗体体致敏的胎儿红细胞在分娩前后加速破坏，这在临床上有多种表现，严重可致胎儿宫内死亡，轻者只在血清学中有所表现，婴儿却很健康，HDN的病理变化主要同红细胞溶解所引起的，大量红细胞破坏使红细胞数目减少，引起贫血，组织和脏器因供氧减少而发生缺氧、并可影响其功能主要表现为水肿、黄疸、贫血、肝脾肿大、核黄疸。 水肿全身性、伴低蛋白血症；胸水、腹水、心 包积液。黄疸进行性黄疸增高胆红素51.3mol/L（3mg%）脐带胶质黄疸 68.4-102.6mmol/L（4-6 mg%）面部淡黄 256.5-307.8（15-18 mg%）面部+躯干橙黄， 手心足底、呈淡黄 342（20

10、mg %）手足橙黄色 贫血组织缺氧： 心律快、组织增高、嗜睡、少 吃、少哭、心衰。肝脾肿大骨髓外造血组织来代偿引起核黄疸未结合胆红素是对中枢神经系统有毒害的物质，婴儿大脑发育未成熟，血脑屏障不健全，过多的未结合胆红素可影响脑组织脑神经基底核，使脑神经细胞发生变性表现为发热、嗜睡、吸吮反射弱、痉挛、肌张力 病死率高，存活后有智力不全，运动障碍。 三、血清学检查 1、测母子（父）ABO血型，确定ABO相合/不相合 2、患儿标本检查： （1）直接抗球蛋白试验：ABO溶血病患儿红细胞上抗体结合得很少，常得到阴性结果（2）释放试验：阳性，红细胞上有IgG抗体（3）游离抗体：阳性，就证明新生儿病情会继续加

11、重 新生儿血清中游离抗体检查 与指示红细胞反应 结果判定 Ac Bc Oc 有游离的抗A抗体 有游离的抗B抗体 有游离的抗A、抗B或抗A，B抗体 有游离的ABO系统以外抗体 无游离的抗体 患儿红细胞抗体释放试验与指示红细胞反应 结果判定 Ac Bc Oc 释放出IgG抗A抗体 释放出IgG抗B抗体 释放出IgG抗A、抗B或抗A，B抗体 未释放出抗体 释放出ABO血型系统以外的抗体 新生儿ABOHDN血清学试验直接抗球 游离抗体 抗体释放 结果 意义蛋白试验 试验 试验 判定 确诊 ABOHDN 确诊 ABOHDN 确诊 ABOHDN 可疑 可疑ABOHDN 可疑 可疑ABOHDN 否定 血清学

12、试验未能证实HDN 四、治疗（一）药物治疗：葡萄糖、白蛋白（二）光照（蓝光照射） ：胆红素能吸收光，以波长450-460m作用最强，未结合胆红素（Z）转化为异物体（E）后者不能进入脑组织，为无毒水溶性，双吡咯，易从尿内排出，使血清胆红素浓度降低。（三）换血：换出抗体和致敏红细胞，减轻溶血，纠正贫血，防心衰，换血清胆红素，防核黄疸。 ABO系HDN ：O型洗涤细胞加AB血浆/同型浆 Rh系HDN ：ABO血型同患儿， Rh血型同母亲 如子B型母Accdee血清含有抗D选B型D阴性血。 （一）宫内输血（二）提早分娩 64妊娠期内的治疗：（三）药物治疗 孕妇服Vc、VE、VK注射葡萄糖，吸氧，苯巴比

13、妥为酶的诱导剂，促进肝脏清除胆红素，新生儿输白蛋白，能结合胆红素防核黄疸。预防：对未致敏的Rh阴性妇女在分娩Rh阳性婴儿72小时内，肌注30mg（145-435mg）抗Rh (D)IgG，通常可预防Rh阴性妇女发生同种免疫。 第五章 血液成份制备第一节 血液的生理功能输送氧气和二氧化碳，在肺脏和人体组织间进行气体交换。输送养分到组织，从组织带走代谢产物。输送激素，维生素和各种药物。维持渗透压、酸碱度以及电解质平衡保持体温恒定防御微生物或异物入侵有效的凝血和纤维蛋白溶解机制 细 红细胞人体的内呼吸，向机体组织运送O2、带走CO2、由 Hb完成胞 白细胞粒细胞中性、嗜酸、嗜碱、免疫系统，吞噬破坏入

14、 侵细胞成 淋巴细胞T细胞参与细胞免疫B细胞参与体液免疫分 40-45% 血小板粘附，释放凝固、收缩非 （血浆）白蛋白保持渗透压和体液平衡；载体蛋白的作用，传递运输细胞 免疫球蛋白血浆中具有抗体活性的球蛋白的统称，它 包括所有血液中的抗体。成 分 凝血因子共14个、血浆中含除组织因子（FIII）外所有因子 55-60% 凝血过程分三个阶段，凝血酶原激活物的形成， 凝血酶原激活形成凝血酶； 纤维蛋白原分解形成纤维蛋白。 分内源性途径、外源性途径和共同途径。 第二节 全血保养液ACD CPD CPDA-1组成成分 枸橼酸-枸橼酸三钠、葡萄糖Acid-Cutrate-Dextrose 枸橼酸盐、磷酸

15、盐、葡萄糖Citrate-Phosphate-Dextrose 添加腺嘌呤（A） 枸橼酸盐：抗凝葡萄糖：维持红细胞代谢枸橼酸：降PH到 5.0解决葡萄糖焦糖化 磷酸盐：调节PH到5.6以利于维持血液中2、3-DPC（2，3二磷酸甘油酸）维持细胞放氧能力。 腺嘌呤（A）是ATP的一个成分，能增加ATP合成 保存期限* 21天21天35天 血液成分的最佳保存条件红细胞：42血小板：222 水平振荡，如4贮存，24h 50%以上丧失功能，48 h减小显著，72h基本无止血作用，5天全部遭破坏。白细胞：室温 ， 24h微量减弱，3-5天显著减弱，7天完全消失凝血因子：-20以下冷冻保存 第三节 血液细

16、胞成分的制备一、制备原理：利用血液细胞比重、体积等因素的不同通过离心分层而得到浓度较高的单一成分。如图所示。二、制备方法 1、手工法； 2、血细胞分离机单采法 三、红细胞制品浓缩红细胞：全血中大部分血浆分离后剩余部分即为浓缩红细胞。比积0.65-0.80 42悬浮红细胞：全血中大部分血浆分离后，向剩余部分加入红细胞添加液制成的成分即为悬浮红细胞。有MAP（甘露醇-腺嘌呤-磷酸盐）等添加液比积0.50-0.65 42少白细胞的红细胞：离心或过滤去除白细胞比积0.60-0.75 42 洗涤红细胞：用生理盐水洗去大部分非红细胞成分。较彻底地去除血浆（98%）和白细胞（80%）红细胞回收率70% 42

17、冰冻解冰去甘油化红细胞 6日内血，红细胞保护剂为甘油，低温-80保存，使用时去甘油化后加生理盐水制成红细胞回收率80% 42用于稀有血型和自体血保存辐射红细胞：用射线（钴60）辐照，灭活红细胞制品中淋巴细胞预防输血相关性移植物抗主病 四、白细胞制品：单采用血细胞分离机及配 套耗材一次从单一献血者采集的粒细胞为1人份，容量200ml，含 量1.01010 室温静置保存24小时五、血小板制品：单采用血细胞分离机及配套耗材一次从单一献血者采集的血小板为1人份，容量200ml，含量2.51011 20-24振荡保存，24小时（普通袋） 5天（专用袋） 第四节 血液非细胞成分的制备新鲜冰冻血浆：全血采集

18、后6h(ACD保养液)、8h（CPD保养液）分离出血浆制成的成分称为新鲜冰冻血浆，-20保存1年转为普浆。含全部凝血因子，白蛋白、免疫球蛋白普通冰冻血浆：和新鲜冰冻血浆比较，只缺少不稳定凝血因子V和 ， -20保存5年 冷沉淀：以400ml全血分离的200ml新鲜冰冻血浆制备的冷沉淀为1u，容量20-30ml，含80ID纤维蛋白原150mg 纤维结合蛋白250-500mg/L -30保存1年 根据轻、中、重度出血所需剂量为10IU、25IU、40IU/kg体重， 用于儿童血友病甲：血管性血友病，纤维蛋白原缺乏症及手术后出血，严重外伤及DIC等治疗。 血浆蛋白制品白蛋白免疫球蛋白：肌肉注射免疫球蛋白，静脉注射免疫球蛋白凝血因子浓缩制剂凝血酶原复合物